蛋白含量对牦牛乳清蛋白浓缩物功能特性的影响

通过不同截留分子质量的再生纤维素膜过滤纯化牦牛原乳清液和牦牛甜乳清液,分别制取牦牛原乳清蛋白浓缩物(native whey protein concentrate,NWPC)和牦牛甜乳清蛋白浓缩物(sweet whey protein concentrate,SWPC),研究蛋白含量不同的乳清蛋白浓缩物(whey protein concentrate,WPC)主要成分(乳糖含量、pH值和总蛋白质含量)和功能特性(溶解性、持水性、持油性、起泡性、乳化性及热稳定性)的特征。结果表明:10 000 Da再生纤维素膜透析得到的牦牛WPC中总蛋白含量达到80%以上,不含乳糖,功能特性(溶解性、持水性、持油性、起泡性、乳化性及热稳定性)均显著高于经3 500 Da卷式膜、5 000 Da再生纤维素膜透析得牦牛WPC,WPC蛋白含量越高,其功能特性越好;不同蛋白含量的牦牛SWPC起泡能力、泡沫稳定性、乳化活性和乳化稳定性均显著(P<0.05)高于牦牛NWPC。牦牛乳WPC最不稳定温度为85℃,高于荷斯坦牛乳WPC的80℃,热处理会适当改善牦牛WPC的起泡性能、乳化性能和热稳定性。通过膜牦牛处理获取的高蛋白含量的WPC,功能特性较好,应用广泛,对解决牦牛乳清资源的利用问题、保护环境、提高企业的经济效益起到关键性作用。

热处理和调节pH改性乳清蛋白浓缩物对搅打稀奶油加工性质的影响

通过热处理和调节p H对乳清蛋白浓缩物80（Whey protein concentrate,WPC80）进行改性处理,并将改性后的WPC80添加至低脂稀奶油中,以改善其搅打性质。结果表明调节WPC80溶液的p H为3,在80℃下加热15min时具有最佳的溶解性和起泡性,相同p H条件下,不同的热处理时间会对溶解性和起泡性产生不同的影响;将热处理和p H改性后WPC80加入搅打稀奶油中,研究发现不同热处理时间,p H为5改性的WPC80可以显著提高搅打稀奶油的打发率（p〈0.05）,但是p H为7处理的WPC80使稀奶油的泡沫稳定性增加了154.67%~193.42%。因此可通过热处理和调节p H改性的WPC80来提高低脂稀奶油的搅打特性,且此操作方法简单易行。

膜分离法制备高α-乳白蛋白质量分数的乳清蛋白浓缩物80

采用微滤和超滤结合制备乳清蛋白浓缩物80(Whey protein concentrate,WPC80),所制得的WPC80中α-乳白蛋白质量分数占总蛋白的64.37%。本研究采用0.2μm的聚偏氟乙烯去除甜乳清溶液中的脂肪和酪蛋白等,使得脂肪质量分数由0.15%降低至0.03%;比较分析了p H值为4.30时,乳清溶液50 ku聚偏氟乙烯和50 ku聚醚砜对α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的分离效果,其中50 ku聚偏氟乙烯的平均膜通量和α-乳白蛋白的得率都显著低于50 ku聚醚砜,但α-La纯度和对α-La的选择透过性(即α-La/β-Lg)显著高于50 ku的聚醚砜,综合考虑,50 ku的聚偏氟乙烯更适合于生产高α-La质量分数的WPC80。

用高效液相色谱法比较牦牛和犏牛乳中两种乳清蛋白含量

为比较牦牛和犏牛乳中两种乳清蛋白的含量,采用C18柱建立了检测牦牛乳和犏牛乳中α-乳清蛋白(α-La)和β-乳球蛋白(β-Lg)含量的高效液相色谱法(HPLC).试验动物包括放牧全奶麦洼牦牛(n=40)、半奶麦洼牦牛(n=27)和犏牛(n=36),分别从其全乳中制备乳清后,用HPLC方法测定两种乳清蛋白含量.结果表明,全奶牦牛、半奶牦牛和犏牛乳中α-La平均含量接近,约为0.86 mg/mL;β-Lg含量分别约为7.10 mg/mL、9.64 mg/mL和6.96 mg/mL,在半奶牦牛乳中含量极显著高于全奶牦牛乳和犏牛乳(P<0.01),而在全奶牦牛乳和犏牛乳中的含量接近.β-Lg的色谱图为单峰或双峰,未见明确规律.进一步用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)对牦牛乳和犏牛乳中β-Lg进行基因分型,表明牦牛中均为EE型,犏牛中为AE和BE型,BE型频率为0.694 4.HPLC可以分析牦牛和犏牛乳中α-La和β-Lg含量,但无法对β-Lg进行基因分型.

乳清蛋白质浓缩物的流变学性质

本研究以3种工业化生产的乳清蛋白浓缩物(WPC)的再制溶液为对象,测定其不同条件下的流动特性,即在剪切速率3～1321/sec、温度5～65℃、总固形物浓度5～40％,pH3～10等条件下,溶液的剪切应力与剪切速率和剪切应力与剪切时间的关系。WPC溶液的流变学行为与溶液的浓度、温度、pH有关。在多数实验条件下,WPC溶液具有假塑性液体性质,可以用幂律模式(power law module)来表示,在极端条件下,溶液的流动特性则接近牛顿液体或塑性液体。

近红外反射光谱新方法测定乳清蛋白浓缩物品质的研究

本文比较了近红外反射光谱(NIRS)和传统的化学方法测定乳清蛋白浓缩物的蛋白质、脂肪、水分的效果。结果发现,用近红外反射光谱法有很好的效果,完全可以代替传统的化学方法,且快速、简便、准确且无药品污染。

荷斯坦奶牛乳与牦牛乳的差异蛋白质组学分析

本试验利用蛋白质组学方法分析荷斯坦奶牛乳与牦牛乳乳清与乳脂肪球膜中的差异蛋白,比较功能差异,为开发不同品种牛乳提供帮助。通过离心法分离荷斯坦奶牛乳与牦牛乳的乳清与乳脂,分别提取蛋白,通过串联质谱标签(TMT)法进行蛋白质定性与定量分析,得到差异蛋白;对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白质互作(PPI)等生物信息学分析。结果显示:牦牛乳的乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物和非乳脂固形物含量均显著高于荷斯坦奶牛乳(P<0.05)。在2种牛乳乳清中共鉴定到可信蛋白641种,在乳脂肪球膜中共鉴定到可信蛋白543种;在乳清中筛选出差异蛋白268种,其中牦牛乳比荷斯坦奶牛乳上调70种,下调198种;在乳脂肪球膜中筛选出差异蛋白267种,其中牦牛乳比荷斯坦奶牛乳上调68种,下调199种。GO功能注释及富集分析表明2种牛乳的乳清和乳脂肪球膜差异蛋白均主要富集在细胞外空间、小分子结合和免疫反应等方面。KEGG注释及富集分析表明2种牛乳的乳清和乳脂肪球膜差异蛋白主要富集在金黄色葡萄球菌感染、补体与凝血级联等通路。差异蛋白互作网络分析发现2种牛乳的乳清差异蛋白中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、α2-HS糖蛋白(AHSG)、簇集蛋白(CLU)、血红素结合蛋白(HP)、补体3(C3)、SERPINA1、热休克蛋白A8(HSPA8)、β-2-微球蛋白(B2M)等度值较高,可能为乳清中的关键蛋白;乳脂肪球膜差异蛋白中血清白蛋白(ALB)、HP、C3、CLU、α-2-巨球蛋白(A2M)、AHSG、HSPA8、B2M等度值较高,可能为乳脂中的关键蛋白。综上可知,牦牛乳较荷斯坦奶牛乳在营养价值方面更优;牦牛乳中丰度较高的蛋白在胃肠道免疫功能、促进钙与磷吸收等方面表现优异,且牦牛乳中部分高丰度蛋白易引起乳制品腐败变质。

泌乳高峰期娟犏牛和牦牛乳汁差异蛋白分析

娟犏牛(Bos taurus)是通过娟姗牛冻精杂交甘南牦牛(Bos grunniens)所产的后代,其产奶量高于牦牛。为探究娟犏牛乳品质与牦牛乳差异,对泌乳高峰期娟犏牛与牦牛的乳汁进行了蛋白质组学分析。通过串联质谱(TMT)标记蛋白质组学方法比较两种奶的乳清和乳脂球膜(MFGM)蛋白差异,结果表明,利用标记定量蛋白质组学技术在泌乳高峰期娟犏牛奶与牦牛奶中共鉴定到651个乳清蛋白和990个MFGM蛋白,筛选出乳清差异表达蛋白(DEPs)145个,其中娟犏牛奶比牦牛奶上调71个,下调74个;筛选出MFGM DEPs 160个,其中娟犏牛奶比牦牛奶上调78个,下调82个。生物信息学分析结果发现,泌乳高峰期娟犏牛奶乳清与MFGM DEPs主要参与的生物过程是固有免疫应答,定位的主要细胞成分是胞外间隙和胞外区,而乳清DEPs主要参与的分子功能是蛋白质同源二聚体活性,MFGM DEPs主要参与的分子功能是鸟苷-5'-三磷酸酶(GTPase)活性。娟犏牛奶乳清与MFGM DEPs参与的重要免疫途径是补体与凝血级联。综上可知,娟犏牛奶中丰度较高的主要乳清和MFGM DEPs在促进钙磷吸收、免疫保护和免疫调节等方面表现优异,牦牛奶中丰度较高的主要乳清和MFGM DEPs在保证细胞稳定性、促进T淋巴细胞增殖和抗菌等方面表现优异,说明泌乳高峰期娟犏牛奶较牦牛奶在免疫保护和免疫调节等生物过程中发挥更重要作用,推测娟犏牛奶更有助于新生儿建立抗微生物感染的免疫系统。本研究结果为高原奶制品的开发提供了数据支撑,并为生产功能性婴幼儿配方乳粉提供了科学依据。

牦牛α-乳清蛋白基因的克隆与序列分析

根据奶牛α 乳清蛋白基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增并克隆了牦牛 (Poephagensgrunnieus)α 乳清蛋白基因的全序列。结果表明 ,牦牛α 乳清蛋白基因长 2 999bp ,其中 1～ 670bp为 5′侧翼序列 ,2 690～2 999bp为 3′侧翼序列 ,在 671～ 2 689bp之间 ,共有 4个外显子和 3个内含子 ,牦牛α 乳清蛋白基因共编码 14 2个氨基酸 ,其中第 1～ 19氨基酸之间的短肽为信号肽序列。牦牛的α 乳清蛋白基因有较高水平的表达可能与基因内非编码序列碱基突变引起的回文结构消失有关。该基因 5′侧翼序列在结构上牦牛和牛基本相同 ,只有MGF因子识别位点稍有差别。且牦牛的该序列更符合Groenen等 1994年总结的该因子识别位点的模式序列 ,因此牦牛的该基因

西藏牦牛乳营养成分及乳清蛋白组成的研究

牦牛（Ｂｏｓｇｒｕｎｎｉｅｓｎｓ）是我国的主要牛种之一。西藏约有牦牛３９５万头〔１〕，占全国牦牛总数的３０％，占西藏牛总头数的８０％以上，为牧区牧民提供了大量的乳、肉、毛、皮等生产生活资料。但有关西藏牦牛乳的组成方面尚未见到系统的研究报道，因此，我们...

娟犏牛与牦牛乳汁相同蛋白质组学分析

利用蛋白质组学的方法对娟犏牛奶与牦牛奶乳清和乳脂球膜(MFGM)相同蛋白进行分析,而娟犏牛产奶量高于牦牛,若娟犏牛奶的功能与牦牛奶相近,将提高当地牧民的经济水平。通过离心法分离乳清与乳脂,分别提取蛋白;通过串联质量标签(TMT)技术,进行蛋白质定性与定量分析得到相同蛋白;对相同蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白互作等生物信息学分析。结果表明,利用标记定量蛋白质组学技术在娟犏牛奶与牦牛奶中共鉴定到651种乳清蛋白和990种MFGM蛋白,筛选出298种乳清相同蛋白,283种MFGM相同蛋白。GO注释分析发现,鉴定的娟犏牛奶与牦牛奶乳清相同蛋白主要参与的生物过程是内肽酶活性的负调控、免疫应答和免疫球蛋白产生,MFGM相同蛋白参与的生物过程主要是内肽酶活性的负调控和补体激活,经典途径乳清与MFGM相同蛋白定位的细胞成分主要是胞外间隙和胞外区,参与的分子功能主要是三磷酸鸟苷(GTP)酶活性、GTP结合。KEGG富集分析发现,娟犏牛奶与牦牛奶乳清与MFGM相同蛋白主要富集的途径包括补体和凝血级联反应、吞噬体和内质网中的蛋白加工。娟犏牛奶和牦牛奶中丰度较高的蛋白显示出其在免疫和促进营养吸收等方面表现优异,然而,娟犏牛产奶量高于牦牛,这将增加当地牧民的经济收入,也为人们提供更多有价值的高原奶制品。

牦牛α-乳清蛋白基因5′-非翻译区部分序列测定及PCR-RFLP分析

用PCR方法扩增了麦洼牦牛α-乳清蛋白基因5′-非翻译区的部分序列.该序列与普通牛的相应序列具有很高的同源性(98.1℅),但存在8个碱基差异,碱基突变类型包括1个缺失,5个转换和2个颠换.应用PCR-RFLP方法分析了麦洼牦牛和九龙牦牛α-乳清蛋白基因-1689位单碱基的多态性,结果在该位点没有检测到多态性.

牦牛垂体特异转录因子-1、生长激素和α-乳清蛋白基因多态性的分析

利用PCR-RFLP技术分析了麦洼牦牛、九龙牦牛和西藏牦牛GH、Pit-1和α-LA基因的多态性。采用普通牛所用的PCR引物均能在牦牛上正确地扩增出上述几个基因相应大小的片段。GH、Pit-1和α-LA(-1689)基因特定位点均未检测到多态性,基因型分别为AA、BB和AA;利用PCR-RFLP分析牦牛乳蛋白基因型具有准确、快速的特点,并能对新生牦牛和公牦牛乳蛋白或泌乳相关基因型进行分析。

麦洼牦牛乳清蛋白组成的研究

本文采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法研究了麦洼牦牛乳清蛋白组成。结果表明:α—Lα、β—Lg、Ig、SA和Lf占乳清蛋白的比例(%)分别为:15.4±4.4、41.7±5.8、35.8±8.4、7.0±3.1和0.4±0.5。泌乳一年以上的半奶牦牛乳中SA和α—Lα所占比例显著低于常奶牦牛,Ig和β—Lg浓度(mg/me)极显著高于常奶牦牛。常奶牦牛乳中α—Lα浓度同乳糖含量显著正相关。

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从牦牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,其最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5%、水解6 h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2%.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.

乳蛋白高效液相色谱检测方法的优化及甘南牦牛乳指纹图谱的建立

建立多种乳蛋白同时检测的高效液相色谱法,为乳及乳制品乳蛋白的分离检测提供方法,并建立甘南牦牛乳的指纹图谱。样品采用缓冲液使蛋白溶解变性,采用高效液相色谱检测,ZORBAX 300SB-C8色谱柱,检测波长为214 nm,柱温40℃,流速0.6 mL/min,梯度洗脱。所建方法能够分离乳中的κ-酪蛋白、α-酪蛋白、β-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳清蛋白,峰保留时间RSD<1.3%,峰面积RSD<3.3%。10批甘南牦牛乳样品得到的指纹图谱相似度大于0.99,指认了其中9个乳蛋白色谱峰。该方法操作简便、具有良好的重现性和专属性,适用于乳及乳制品中多种乳蛋白的分离检测。所建立的甘南牦牛乳指纹图谱为牦牛乳的质量控制提供参考依据。

尖扎牦牛乳清蛋白组分的电泳技术

采用醋酸纤维素薄膜电泳法分析了249份尖扎牦牛乳样的乳清蛋白组分。结果发现,牦牛的乳清蛋白有4条电泳区带,由阳极起依次为乳清白蛋白,β-乳球蛋白、α-乳白蛋白和免疫球蛋白。各组分的相对比例分别为6.74±2.30、7 6.30±1.46、29.92±1.01和15.12±0.87。β-乳球蛋白区带宽而深染,泳动速度较普通牛的为慢是尖扎牦牛乳清蛋白组分的特点。关键词:乳清蛋白、电泳、牦牛。电泳技术的完善和精确化,已经被用于大量生物物质的分析、分离、鉴定和提纯,也用于许多生物液蛋白组分的分离和鉴定。对于牛的乳清蛋白组分,畜牧和兽医工作者采用电泳法从不同角度进行了广泛的研究,前者用于乳汁成分的分析,后者作为诊断疾病的依据。然而,对于牦牛的乳清蛋白组分研究甚少。鉴此,我们在进行牛隐性乳房炎调查的同时,对尖扎牦牛的乳清蛋白组分进行了电泳分析,以期为某些乳房疾病的诊断提供基础资料。现将结果报告如下。

高效液相色谱法分离测定牦牛乳中的8种蛋白质

建立了同时分离和测定牦牛乳中4种酪蛋白和4种乳清蛋白的反相高效液相色谱方法。脱脂牦牛乳经分散剂处理后,采用C4色谱柱(250 mm×4.6 mm,300,5μm i.d.)进行分离,以0.1%的三氟乙酸水溶液和0.1%的三氟乙酸乙腈溶液为流动相,流速为0.8 mL/min,梯度洗脱,二极管阵列检测器(DAD)在220nm波长下检测,外标法定量。结果表明,牦牛乳中8种主要蛋白质在40 min内完全分离,在各自的线性范围内呈良好线性,除α-乳白蛋白外,其余7种蛋白的相关系数均大于0.99。8种蛋白质的回收率为86%～103%,相对标准偏差(RSDs)为1.7%～8.7%;检出限(LODs)为10.7～39.2 mg/L,定量下限(LOQs)为35.7～130.7 mg/L。该方法的准确度和精密度均较高,能够满足实际检测的要求。