牦牛血红蛋白活性肽酶法制备工艺的优化及脱色技术研究

为开发具有保健功能的新型高附加值生物制品,本实验采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及AS1.398中性蛋白酶3种食品级内切蛋白酶对牦牛血红蛋白进行酶解,以水解度及三氯乙酸可溶性氮为评价指标,采用酶解-活性炭法对水解液进行脱色,筛选出AS1.398中性蛋白酶为最佳水解用酶。通过正交实验对其酶解工艺进行优化后,得出AS1.398中性蛋白酶最佳水解条件为:底物浓度5%,加酶量8000U/g,温度55℃,初始pH7.5,酶解时间5h。在此条件下水解产物为淡黄色,并具有较高的低分子量生物活性肽含量。

磁场对血红蛋白氧合速率的影响

目的血红蛋白是高等动物体内运输氧气的载体蛋白,本工作拟探究磁场对血红蛋白氧合的影响,并比较人和牦牛血红蛋白在磁场下氧合的差异。方法构建人和牦牛血红蛋白的重组表达纯化系统;分别将人和牦牛脱氧血红蛋白置于地磁场或外加磁场下,通过收集紫外可见光谱数据,计算氧合血红蛋白、脱氧血红蛋白和高铁血红蛋白3种组分的浓度和比例,分析磁场对血红蛋白氧合速率的影响;使用超导量子干涉磁测量系统SQUID对人氧合血红蛋白和人脱氧血红蛋白进行磁性测量,探讨磁场影响血红蛋白氧合速率的可能机制。结果利用大肠杆菌原核表达系统成功表达并纯化得到了人和牦牛的血红蛋白样品。发现牦牛血红蛋白比人血红蛋白的氧合速率更快,外加0.3 T静磁场显著提高了血红蛋白的氧合速率,且牦牛血红蛋白比人血红蛋白对磁场更为敏感。结论本研究成功表达和纯化了人和牦牛血红蛋白,发现磁场促进了血红蛋白的氧合过程。磁场对血红蛋白氧合速率的影响可能与血红蛋白本身的磁学性质有关。这些发现为未来使用外加磁场作为辅助手段改善低氧症状提供了理论支撑,有望在临床中发挥作用。

酶法水解牦牛血制备蛋白多肽粉的技术研究

利用中性蛋白酶将牦牛血红蛋白水解,探讨各因素对中性蛋白酶水解牦牛血红蛋白的影响以及水解度的关系,并对酶解液进行了活性炭脱色效果的研究。通过单因素和正交试验[L_(16)(4~5)],确定了中性蛋白酶水解血红蛋白的适宜条件为pH 7.0,温度45℃,酶底物浓度比4000 U/g蛋白质液,底物浓度5%,酶解时间7 h。通过正交试验,确定酶解液的最佳脱色工艺条件为活性炭用量4%,脱色温度75℃,pH 5.0,脱色时间60 min。