甘薯近缘野生种三浅裂野牵牛KNOX基因家族鉴定及其在块根发育中的表达分析

为探究甘薯近缘种三浅裂野牵牛KNOX(ItrKNOX)基因家族在块根发育过程中的作用,本研究在基因组水平对ItrKNOX基因家族进行了鉴定,并利用转录组测序技术对ItrKNOX基因在三浅裂野牵牛Y22块根发育不同阶段的表达量变化进行了分析。共鉴定到分布于10条染色体的12个ItrKNOX基因。进化分析显示,这些ItrKNOX基因可分为ClassⅠ、ClassⅡ和Class M三类,KNOX家族基因的类型和数目在三浅裂野牵牛、三裂叶薯、牵牛和圆叶牵牛这4个甘薯属二倍体物种基因组中都较为稳定,其中三浅裂野牵牛和三裂叶薯的亲缘关系较近。对ItrKNOX基因启动子区进行分析,发现多个与生长发育、植物激素、光和逆境胁迫相关的顺式作用元件。转录组分析显示,在Y22块根发育过程中,不同ItrKNOX基因表达模式不同。其中,Class M基因ItrKNOX12几乎不表达,而ItrKNOX02、ItrKNOX03、ItrKNOX09和ItrKNOX10在整个根部发育过程中持续高表达。从不定根时期到块根发育期,ItrKNOX01~ItrKNOX03、ItrKNOX05、ItrKNOX09和ItrKNOX11的表达量明显上调,ItrKNOX08的表达量明显下调。值得注意的是,ItrKNOX06在块根膨大到直径大于2 mm后表达量才明显上调,ItrKNOX07在不定根和成熟块根中表达水平明显低于发育中的块根。本研究为探索甘薯及其近缘野生种三浅裂野牵牛KNOX家族基因的功能和调控机制提供了参考。

矮牵牛PhSPL9b基因的克隆及功能分析

为研究SPL(SQUAMOSA-promoter binding protein-like)转录因子在矮牵牛成花转换中的作用,克隆矮牵牛PhSPL9b基因,并将该基因对应的miR156/157靶位点进行点突变获得rPhSPL9b,将PhSPL9b和rPhSPL9b分别构建超量表达载体,转化矮牵牛和拟南芥,最终获得拟南芥35S∶∶PhSPL9b与35S∶∶rPhSPL9b转基因植株以及矮牵牛35S∶∶PhSPL9b转基因植株。研究结果显示,过表达PhSPL9b和rPhSPL9b导致拟南芥莲座叶显著减少,花期明显提前,其中35S∶∶rPhSPL9b转基因表型更为明显;过表达PhSPL9b促进矮牵牛提前开花。RT-PCR和qRT-PCR分析结果显示,表型明显的转基因株系中,PhSPL9b基因表达量均显著高于对照。转录激活实验结果表明,PhSPL9b是一个具有转录激活活性的转录因子。以上结果表明,矮牵牛PhSPL9b基因对开花时间具有重要调控作用,其功能具有保守性,同时,它可能是通过转录激活下游基因的表达而影响植物开花。

牵牛花综合征1例并文献复习

牵牛花综合征(MGS)是一类特殊类型的视神经缺损,先天性视盘发育不全的疾病,其发病率低,在临床较少见。目前国内外学者,对于MGS的研究以及辅助检查,诊断治疗有了重大突破。本文通过在我院就诊的牵牛花综合征1例,用文献检索的方式,对MGS进行综述,为其早期诊断及治疗提供参考价值。

矮牵牛花瓣衰老和逆境胁迫响应相关NAC基因的鉴定与分析

【目的】NAC(NAM, ATAF and CUC)参与植物生长发育和多种逆境胁迫响应过程的调控。本文旨在鉴定和研究对矮牵牛生长发育和逆境胁迫响应的关键NAC成员,为优质抗逆矮牵牛育种提供基因资源。【方法】以腋生矮牵牛(Petunia axillaris)基因组为参考基因组,利用矮牵牛花器官衰老过程、烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)侵染、低磷、低温、NaCl、铜离子和干旱胁迫处理后的转录组数据,分析矮牵牛NAC基因(PaNACs)差异表达情况,并对差异表达PaNACs的启动子顺式作用元件及转录因子结合位点进行分析。利用实时荧光定量PCR验证了部分差异表达PaNACs在矮牵牛花衰老过程中的表达情况,并预测了差异表达PaNACs编码蛋白的潜在靶基因。【结果】鉴定的131个PaNAC基因中,59个(45.04%)被鉴定为花器官衰老和逆境胁迫响应过程中的差异表达基因。PaNAC72、 PaNAC22、 PaNAC29、 PaNAC40、 PaNAC2、 PaNAC90、 PaNAC83、 PaNAC56、 PaNAC36和PaNAC35在至少3个生物学过程响应中差异表达显著,其中拟南芥衰老关键基因AtNAP的直系同源基因PaNAC29在花器官衰老过程和低温、低磷、铜离子胁迫逆境处理中显著上调表达;PaNAC72在除受铜离子胁迫外的所有6种处理中表达差异显著;PaNAC22在花器官衰老过程和低温和低磷胁迫中上调表达,在铜离子和干旱逆境下调表达。启动子分析结果显示这10个PaNAC启动子区域存在多种逆境胁迫响应相关元件,且大量响应衰老和逆境胁迫的差异表达基因的启动子区域存在NAC的结合位点。【结论】PaNACs广泛参与矮牵牛生长发育及逆境胁迫响应,其中PaNAC29可能是花衰老关键的正调控因子,PaNAC72广泛响应多种逆境胁迫。

矮牵牛花朵大小及相关性状遗传分析

为了探究矮牵牛花朵大小的遗传规律,以大花型和小花型矮牵牛高代自交系为亲本构建四世代遗传群体(P_1、P_2、F_1、F_2),对花朵大小遗传特征进行主基因+多基因混合遗传模型分析,并将F_1植株与中花型矮牵牛W115株系进行杂交,验证遗传规律。同时以F_2群体为材料,对花径、萼片长、叶片长等23个表型性状进行测定,并研究其相关性。结果表明,矮牵牛大花对小花性状符合2MG-A模型,即由2对加性主基因控制,主基因遗传率为95.38%;大、小花杂交F_1与中花W115进一步杂交,后代出现大花与中花性状分离(1∶1),且中花植株的叶片和苞片叶绿素含量显著高于大花植株(P<0.01)。大花×小花F_2群体的表型性状变异丰富,变异系数在7.67%~59.93%,平均22.38%。相关性分析结果表明,花部性状、叶部性状以及两者之间均存在一定的相关性,其中花径与其他器官大小均呈显著正相关,与部分植株性状呈显著负相关。

三浅裂野牵牛SnRK2基因家族的鉴定和表达分析

蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK可分为SnRK1、SnRK2和SnRK3共3个亚族,其中,SnRK2是一类仅存在于植物中的蛋白激酶,已在多种植物中得到了鉴定,其在植物生长发育、胁迫响应和信号转导中发挥了重要作用。为探究三浅裂野牵牛中SnRK2基因家族的成员并推测其功能,利用拟南芥SnRK2蛋白序列,通过生物信息学方法筛选并鉴定ItfSnRK2基因家族成员,对各成员的特征进行分析,采用转录组数据分析ItfSnRK2各成员在不同组织和非生物胁迫下的表达谱。结果发现,三浅裂野牵牛中共有7个ItfSnRK2基因,分别位于6条不同的染色体上,依据染色体排列顺序依次命名为ItfSnRK2.1~ItfSnRK2.7,它们均含有保守的激酶结构域和调节结构域。进化树分析结果显示,ItfSnRK2分为3个亚家族。基因结构分析显示,同一亚家族的成员具有相似的基因结构和保守基序组成。表达谱分析则揭示了ItfSnRK2基因具有组织表达的特异性,ItfSnRK2.2、ItfSnRK2.3、ItfSnRK2.4和ItfSnRK2.5的表达受非生物胁迫诱导,可能与抗性调节有关,以上结果为进一步了解SnRK2基因在甘薯逆境胁迫响应和信号转导中的具体功能提供了重要线索,也为甘薯的抗逆性改良提供了潜在的基因资源。

芯片行业再生水灌溉矮牵牛的植物毒理效应及环境风险评价

芯片行业废水的再生利用对减少水环境污染、缓解水资源短缺、推动行业绿色发展具有重要意义。为明确芯片行业再生水灌溉对植物的毒理效应,采用矮牵牛作为模型生物,分析2种再生水灌溉期间其生长形态及对总蛋白、叶绿素、抗氧化系统和能量系统标志物的响应特征,基于第二代综合生物标志物响应指数(IBRv2)法评估再生水灌溉的环境风险。结果表明:2种再生水灌溉期间未对矮牵牛的生长形态产生明显不良影响;灌溉中期(9 d)矮牵牛总蛋白、叶绿素均被显著诱导,随后诱导作用减弱,抑制作用开始显现;灌溉中长期(9~15 d)矮牵牛的抗氧化标志物以抑制效应为主,但机体未出现明显的氧化损伤;灌溉期间矮牵牛能量系统标志物的响应规律无明显的一致性。芯片行业再生水灌溉矮牵牛的平均IBRv2为0.85~1.72,环境风险水平较低,但因再生水仍含有高浓度的氯离子和溶解性总固体(TDS),可选择敏感的生物标志物组合谷氨酸脱氢酶、丙酮酸激酶、丙二醛(MDA)或超氧化物歧化酶、MDA对环境风险进行监测和管控。建议进一步研发可有效降低芯片行业再生水中氯离子和TDS浓度的处理工艺,以保障芯片行业再生水回用于绿化灌溉的生态环境安全。

利用指纹图谱和网络药理学预测牵牛子抗炎Q-marker

通过UPLC建立了牵牛子的指纹图谱,并测定了主要抗炎成分的含量.通过网络药理学方法,构建了“成分-靶点-通路”网络,分子对接验证了Q-marker的生物活性,并通过RAW264.7细胞实验验证了抗炎活性.建立了16批牵牛子的指纹图谱,指认出7个共有色谱峰:绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷和异绿原酸A、B、C;经网络药理学分析,筛选出7个成分的32个核心靶点和6条关键通路;分子对接配体与受体有较强结合能力;一氧化氮(NO)抑制率结果阐明了牵牛子提取物以及7个成分均有抗炎活性.结果表明:绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷和异绿原酸A、B、C可作为牵牛子的潜在抗炎Q-marker,为牵牛子的质量控制以及合理应用提供依据.

策士的重现:魏禧《孟子牵牛章》评点实践

“牵牛章”在《孟子》中地位独特,历代《孟子》学著作对此章阐释都颇为用心。许多学者在阐释此章义理时纷纷触及到孟子的论辩技巧,越来越关注《孟子》的辞章。魏禧在继承前人基础之上,单独重新评点此章,发掘《孟子》文章中的文势与文法,认为其文有“策士气”,是进言的典范之作。魏禧借《孟子》光明正大之文讲解策士进言之术,阳儒而阴纵横,实际上还原儒家经典《孟子》作为战国诸子的真实面目,同时提出自己关于“进言”体文章写作的理论主张。

不同供磷水平对矮牵牛生长的影响

为提升矮牵牛的育苗和养护技术,本研究以矮牵牛品种‘梦幻玫红’为试验材料,设置5个不同磷浓度的营养液处理矮牵牛幼苗,研究不同磷供应水平对矮牵牛生长相关指标的影响。结果表明,不同浓度磷供应对矮牵牛植株的株高随处理时间不同有所差异,至第5周,磷浓度为7.5 mg·L^(-1)处理组的平均株高最大(达到14.25 cm)。随着处理时间延长,磷浓度高的处理组和磷浓度低的处理组的冠幅差异逐渐增大,至第5周,磷浓度越高冠幅越大,磷浓度为45.0 mg·L^(-1)处理组冠幅达到22.90 cm。叶片数、分枝数、花芽数随磷浓度升高呈上升趋势,但各处理组间叶片SPAD值基本无显著差异。破坏性取样后发现,植株地上和地下部分磷积累量和干重也随磷浓度升高而增加,但根冠比随着磷浓度升高而降低。因此,不同供磷水平对矮牵牛的营养生长有明显的影响,磷供应不足会降低矮牵牛的冠幅、叶片数、分枝数和花芽数量等重要观赏指标。

牵牛子配方颗粒多指标成分含量测定方法研究

目的:建立牵牛子配方颗粒中多指标成分的含量测定方法。方法:采用HPLC结合一测多评法同时测定绿原酸等酚酸类成分的含量。色谱条件为采用AgilentZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5.0μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,检测波长为326nm,流速为1.0mL·min^(-1),柱温为30℃,进行梯度洗脱。建立一测多评法,以咖啡酸为内参物测定牵牛子配方颗粒中酚酸类成分的含量。同时采用外标法验证本研究建立的测定方法测定结果的准确性。结果:在各自线性范围内,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的相对校正因子分别为1.841、1.718、1.885、1.485、1.268、1.429;一测多评法与外标法测定结果差异不显著。结论:建立的一测多评法可准确地检测牵牛子配方颗粒酚酸类多指标成分含量,作用于牵牛子配方颗粒的质量控制。

小小牵牛花,也能开出一片景致

今年夏天,气温一天赛一天高。骄阳炙烤着大地,露台上的花儿和蔬菜都有些焉头套脑、萎靡不振。月季不论是爬藤的‘夏洛特夫人’‘王妃’,还是勤花的‘仙度瑞拉’,都尽显颓势,零星几朵冒出的小花也是又瘦又小,发育不良。4、5月开爆的金鸡菊偃旗息鼓,从去年11月一直开到5月的多色角堇、矮牵牛也悄无声息地退出了舞台。盛夏时节,我的露台花园就此沉寂了么?

生物有机肥在矮牵牛上的应用效果试验

为探明生物有机肥在矮牵牛上的应用效果,作者在不增加或少增加矮牵牛栽培成本的条件下,开展了生物有机肥对矮牵牛植株生长和开花的影响试验。试验结果表明,生物有机肥对矮牵牛的植株生长发育有很好的促进作用,利于其增加单株花蕾数和单株开花数,园土掺入5%生物有机肥作基质盆栽矮牵牛,能使矮牵牛的开花期明显提前,初花期后连续开花性较好,花朵颜色鲜艳、品质优良。因生物有机肥和复合肥的成本相当,园土掺入5%生物有机肥作基质盆栽矮牵牛具有较好的经济效益。

铅胁迫对矮牵牛组培苗生长及光合特性的影响

以矮牵牛组培苗为材料,研究其在不同浓度Pb胁迫下的生长及光合生理反应.结果表明,Pb胁迫显著抑制矮牵牛组培苗的生长.1和2 mmol/L Pb处理均导致叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素和叶黄素含量显著下降,且2 mmol/L Pb胁迫导致的下降幅度更明显,但Pb胁迫不影响叶绿素a/b.随Pb处理浓度的增加叶绿素荧光参数光系统Ⅱ(PSⅡ)潜在活性、最大光化学效率、PSⅡ实际光化学效率、PSⅡ有效光化学效率、光化学猝灭系数以及光合电子传递效率逐渐减小,非光化学猝灭系数和调节性能量耗散电子产量增大,0.05 mmol/L Pb处理不影响最大光化学效率、PSⅡ实际光化学效率和PSⅡ有效光化学效率.不同浓度Pb胁迫诱导矮牵牛组培苗叶片的气孔导度、净光合速率和蒸腾速率(T_(r))显著下降,胞间CO_(2)浓度(Ci)明显增加.0.05 mmol/L Pb处理不影响T_(r)和C_(i),0.8 mmol/L Pb处理使水分利用效率显著减小.徕卡正置荧光显微镜分析显示随Pb处理浓度的增加矮牵牛组培苗下表皮气孔密度显著增加,但气孔开度明显减小,保卫细胞形态发生畸变.Pb胁迫导致矮牵牛组培苗光合色素含量下降,光合系统捕获的能量减少,电子传递产额和光能转化利用效率降低,光合作用受阻,进一步导致生长受到抑制,且抑制效应具有浓度依赖性.

杜甫《牵牛织女》诗之理、事、情的三维观照

《牵牛织女》诗演映了杜甫诗之理、事、情的三个文化维度。于事而言,杜甫以“牵牛织女”之事既揭七夕民俗之假,又借之谲谏君主,渴求恩义之真。于情而言,七夕佳节建构了“牛女—李杨”的爱情象喻,因时因地地引发了杜甫的慕汉之思。于理而言,夫妻、君臣、公私是自孟子以来哲学探讨的三个人性维度,杜诗发扬了即理即仁的孟子哲学,成为中唐北宋以来理学思想之由蘖。

矮牵牛初级三体创制、细胞学观察及生理特性

[目的]初级三体是重要的遗传性研究材料,本文旨在创制矮牵牛初级三体并进行相关细胞学和生理学研究。[方法]以矮牵牛(Petunia hybrida Vilm.)品种‘梅林’白色系二倍体、三倍体为材料,从三倍体与二倍体的回交子代中采用染色体计数和核型分析方法筛选出6号和7号2个初级三体,以二倍体为对照进行农艺性状观察和花粉可育率测定,采用常规减数分裂压片法对初级三体花粉母细胞减数分裂各时期进行观察,干旱胁迫环境下测定初级三体与二倍体的叶绿素含量、细胞膜透性、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性和过氧化物酶活性生理指标变化,计算平均隶属函数值进行耐干旱胁迫能力比较分析。[结果](1)与二倍体相比,初级三体植株株形较小、生长势弱,特别是6号初级三体表现最明显,7号初级三体花瓣边缘起伏变得不明显。7号初级三体的花粉不育率为16.3%,6号初级三体为41.6%,远大于二倍体8.5%花粉不育率。(2)初级三体减数分裂基本正常,符合二倍体植物减数分裂一般规律。(3)干旱胁迫处理期间,2种初级三体叶绿素降解速度大于二倍体;6号初级三体相对电导率、丙二醛含量升高最明显,7号初级三体次之、二倍体最低;超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性均呈逐渐升高的趋势,其中二倍体2种酶活性增加最显著,7号初级三体次之、6号初级三体最低。通过平均隶属函数计算后得出的耐干旱胁迫排名,结果为二倍体>7号初级三体>6号初级三体。[结论]用三倍体与二倍体的回交是创制矮牵牛初级三体的有效途径,相比二倍体初级三体生长势变弱、花粉不育率增加、耐干旱胁迫能力下降,6号初级三体比7号初级三体表现更显著。

外源水杨酸对Na_(2)CO_(3)胁迫下矮牵牛幼苗生长的影响

为明确外源水杨酸(SA)对植物碱胁迫是否具有缓解作用,本试验以‘梦幻’系列矮牵牛为材料,研究叶面喷施0.75 mmol·L^(-1)SA对100 mmol·L^(-1)Na_(2)CO_(3)胁迫下幼苗生长、保护酶活性及叶绿素荧光参数的影响。结果表明,与对照(蒸馏水)相比,Na_(2)CO_(3)胁迫下矮牵牛幼苗株高、叶片数、植株鲜重和干重、总根长、总根表面积、根体积、细根(直径0~2 mm)根长及其表面积显著下降,POD、CAT活性显著升高,TRo/RC及PIabs显著下降。Na_(2)CO_(3)胁迫下与不喷施SA相比,叶面喷施SA提高矮牵牛幼苗株高、叶片数、地上部鲜重和干重、总根长、总根表面积、细根根长及其表面积,以及POD活性、ABS/RC、TRo/RC和PIabs。综合分析看出,Na_(2)CO_(3)胁迫显著抑制矮牵牛幼苗生长,叶面喷施SA可通过促进细根生长、提高保护酶活性及PSⅡ的光合性能,在一定程度上缓解Na_(2)CO_(3)胁迫对矮牵牛幼苗生长产生的抑制作用。

中压制备色谱法分离黑果枸杞中2个矮牵牛素花色苷及其对胰脂肪酶的抑制活性

为了快速制备较高纯度的黑果枸杞花色苷,黑果枸杞花色苷粗提物首先用大孔树脂-中压制备色谱进行纯化,再用凝胶树脂-中压制备色谱分离获得2个花色苷单体,采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)、核磁共振氢谱(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)对其结构进行鉴定,并对纯化物的胰脂肪酶抑制活性进行评价。结果表明:用D101大孔树脂-中压制备色谱对黑果枸杞花色苷进行纯化,所得纯化物中P1、P2的相对含量分别为18.22%和30.77%,继续采用Sephadex LH-20联合中压制备色谱分离纯化可得到相对含量分别为84.16%和81.48%的两个黑果枸杞花色苷组分P1和P2,经UPLC-MS/MS和1H NMR鉴定,2个花色苷化合物分别为矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-对香豆酰基)-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷。P1和P2具有较好的胰脂肪酶抑制活性,其IC50值分别为0.250 mg/mL和0.224 mg/mL,且远低于花色苷粗提物和大孔树脂纯化物。研究为黑果枸杞花色苷利用提供一定基础。

不同浓度NaCl对矮牵牛幼苗生长及光合参数的影响

为明确矮牵牛(Petunia hybrida)对盐胁迫的耐受范围及敏感指标,为矮牵牛耐盐品种筛选及其在盐渍土上推广种植提供借鉴和参考,本试验采用温室盆栽方法,研究不同浓度NaCl(0、50、100、150、200 mmol/L)对矮牵牛幼苗生长及光合参数的影响。结果表明:NaCl胁迫显著(P<0.05)降低矮牵牛幼苗根总长、根总表面积、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重和地下部干重,随NaCl浓度升高各项指标整体下降趋势增大,其中200 mmol/L NaCl处理与对照相比降幅最大,分别高达86.07%、87.26%、88.62%、88.89%、80.62%和88.25%。与对照相比,50 mmol/L NaCl处理显著抑制矮牵牛幼苗叶片净光合速率、气孔导度和胞间CO_(2)浓度,降幅分别为18.52%、23.12%、21.79%;100、200 mmol/L NaCl处理下,矮牵牛幼苗叶片气孔长度分别下降26.97%、42.22%,气孔开度分别下降49.28%、76.28%,气孔密度分别增加52.26%、132.40%,而下表皮细胞面积仅在200 mmol/L NaCl处理时显著下降。矮牵牛幼苗的NaCl胁迫半致死浓度为319.19 mmol/L。矮牵牛根总表面积、地下部鲜重、地上部鲜重、根总长、地下部干重、地上部干重对NaCl胁迫较为敏感,其中,根总表面积、地下部鲜重及地上部鲜重的半致死浓度较低,可作为矮牵牛苗期耐NaCl胁迫的筛选指标。

牵牛子蛋白的提取及抗肿瘤活性评价

利用响应面法对牵牛子黑丑的总蛋白提取进行工艺优化并观察其抗肿瘤活性。采用单因素及响应面法,以牵牛子蛋白提取量为指标,考察料液比、温度和pH三个因素对蛋白质提取量的影响。在经过双酶解法、SephadexG-15凝胶层析后,利用MTT(噻唑蓝)实验观察多肽组分的抗肿瘤活性。响应面优化结果发现影响牵牛子总蛋白质提取的各因素主次顺序为料液比>温度>pH,且最佳提取工艺为:pH 8.0,料液比为1∶50,温度为57℃,牵牛子蛋白提取量为544.608±1.13 mg(n=3),与理论预测相对误差较小。MTT实验结果显示多肽组分GA和GB对人鳞状上皮舌癌细胞SCC9和SCC25活性有显著抑制作用,但对人乳腺癌细胞和肺癌人肺泡基底上皮细胞则没有明显抑制效果。研究结果显示:牵牛子蛋白提取工艺条件合理,其抗肿瘤活性的研究为后期治疗舌鳞状细胞癌临床药物的研发提供科学依据。