特发性高草酸尿大鼠模型的建立

目的建立特发性高草酸尿(IH)的大鼠模型。方法将第1代72只SD大鼠(雌雄各半)分别置于大鼠代谢笼中,在适应饮食5d后收集连续2d的24h尿,用离子色谱仪测定24h尿草酸排泄量。将第1代大鼠中尿草酸排泄量最高的3只雄鼠与6只雌鼠进行交配,按同样的方法检测其子代(作为近交系)的24h尿草酸排泄量,再选择尿草酸排泄量最高的3只雄鼠与6只雌鼠进行交配。依此类推,连续对每代大鼠进行检测、筛选和近交传代至第5代。结果根据第1代大鼠的检测值确定大鼠24h尿草酸排泄量的正常值范围(x±2s):雄性为(4.82±2.94)mg;雌性为(5.21±3.26)mg。第5代近交系大鼠24h尿草酸排泄量(x±s):雄性为(12.54±2.46)mg(n=16);雌性为(13.51±2.63)mg(n=16)。将24h尿草酸排泄量高于正常值范围且在2.5倍以内的大鼠定义为IH大鼠,则在第5代近交系大鼠中,雌、雄性IH大鼠的出现率均超过90%。结论该实验建立的IH大鼠模型可稳定传代,可用于IH的病因学研究。

特发性高草酸尿症大鼠空肠中蛋白磷酸酶2A表达变化及其意义

目的研究蛋白磷酸酶2A(PP2A)在特发性高草酸尿症(IH)大鼠空肠中表达,从而为IH的发病机制进一步提供依据。方法取8只IH大鼠为实验组8,只正常大鼠为对照组,利用蛋白免疫印迹法检测两组PP2A在空肠组织的表达水平,并进行比较。结果 PP2A在IH大鼠空肠组织中表达明显强于对照组,差异有显著性。结论IH空肠组织中PP2A表达增高,可能通过对肠上皮细胞间的缝隙连接的调控促进了草酸经旁细胞途径的吸收而参与了IH的发生。

特发性高草酸尿症大鼠肝脏差异表达基因的筛选研究

目的从基因水平探索特发性高草酸尿症（IH）的发病机制，筛选可能导致其发病的相关基因。方法应用含有26962条大鼠全基因组寡核苷酸芯片，研究3只IH模型大鼠和3只正常大鼠肝脏组织基因表达谱的差异性，同时进行生物信息学分析。结果在IH模型大鼠与正常大鼠肝脏组织之间存在差异表达基因147条，其中上调基因123条，下调基因24条，包括细胞受体、免疫相关、细胞信号和传递蛋白、代谢蛋白、发育相关等多种基因。结论基因芯片能有效筛选出IH模型大鼠肝脏中的差异基因，显著的基因差异表达与其发病机制可能存在相关性。

特发性高草酸尿症大鼠肝脏差异蛋白质的筛选

目的寻找特发性高草酸尿症大鼠肝脏组织差异表达的蛋白质。方法取3只雄性特发性高草酸尿症大鼠和3只正常对照雄性大鼠，分别取其肝脏组织约300mg后提取其中的总蛋白。以荧光差异显示凝胶电泳（DIGE）技术分离肝脏中的全部蛋白质，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI—TOFMS）和DeCyderTMv6．5软件进行蛋白质的分析和鉴定。结果总共筛选出21个差异表达蛋白质点，其中11个蛋白质点在特发性高草酸尿症组表达上调，10个蛋白质点下调。最终有18个差异蛋白质点被鉴定确认。结论筛选出的这些差异蛋白质可能与特发性高草酸尿症有关。

特发性高草酸尿症大鼠空肠蛋白质组二维电泳可行性研究

目的：在正式进行双向凝胶电泳实验前需要进行二维电泳的可行性评价，为双向凝胶电泳实验的顺利进行奠定实验基础。方法：取1只特发性高草酸尿大鼠（IH）和正常对照大鼠的空肠组织300mg，匀浆提取组织总蛋白，以双向电泳技术分离蛋白质，银染后扫描获得图谱，并以ImageMaster^TM 2D Platinum software（Version5．0）软件进行分析。结果：获得了清晰、稳定的凝胶蛋白图谱，正常大鼠凝胶图谱可检测到2541个蛋白点，IH大鼠凝胶图谱可检测到2654个蛋白点。结论：从获得的二维电泳图谱来看，2个蛋白质样品的蛋白质点的迁移基本稳定，从而保证后续正式的双向凝胶电泳实验有较好的重复稳定性和可行性。

特发性高草酸尿大鼠肝脏蛋白质组的电泳分析

目的:建立稳定的特发性高草酸尿大鼠肝脏蛋白质组的双向电泳图谱,探讨其差异蛋白质组与特发性高草酸尿的关系。方法:取特发性高草酸尿大鼠及正常对照大鼠的肝组织300 mg,匀浆提取肝组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,每一对Cy3和Cy5标记样品均与一个Cy2标记的内标等量混合,采用凝胶内差异显示电泳(DIGE)技术进行电泳分离,经过不同激光下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。获得的图谱经DeCyderTMv6.5软件进行分析。结果:在特发性高草酸尿大鼠肝组织中共筛选出21个差异表达蛋白质点,有11个蛋白质表达水平显著增加,另外10个蛋白质表达水平显著下降。结论:利用DIGE技术可以作胶内对比分析,并可根据内标消除胶与胶之间的差异,从而提高统计可信度。分析出的21个差异蛋白质可能与特发性高草酸尿的发生有密切关系。