鼠李糖脂抑制芽孢态蜡样芽孢杆菌的活性及机制

以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)芽孢为研究对象,从表观、形态和胞膜状态等方面解析鼠李糖脂(rhamnolipids,RLs)对芽孢态B.cereus的抑制活性和作用机制。结果表明,RLs的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为80.0 mg/L和160.0 mg/L。两个浓度的RLs均可以引起芽孢表面出现严重的皱缩和凹陷,破坏芽孢细胞膜完整性和通透性,导致胞内电解质、DNA和蛋白质等生物大分子外泄。同时,RLs可以通过降低芽孢的耐热性、产生胞内氧化应激反应、降低表面黏附能力、结合并干扰DNA分子等多种抑菌机制对B.cereus芽孢起到抑制和灭活作用。研究结果有利于推动RLs在食品安全领域的开发和应用。

源自蜡样芽孢杆菌抗菌肽DB16的筛选及其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

本实验发现当与蜡样芽孢杆菌混合培养时,金黄色葡萄球菌的生长受到抑制。结合生物信息学方法从蜡样芽孢杆菌DeadBoxATP依赖性RNA解旋酶中预测、筛选得到抗菌肽DB16(RKLLQFAKKLGIVFTK)。抗菌肽DB16对金黄色葡萄球菌的最低抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为31.25μg/mL,可在0.5 h内完全抑制金黄色葡萄球菌的生长;抗菌肽DB16在磷酸盐缓冲溶液中呈现无规卷曲结构,在十二烷基硫酸钠环境中转变为α-螺旋结构。采用荧光探针、流式细胞术、透射电子显微镜、DNA凝胶电泳以及圆二色谱等方法探究抗菌肽DB16对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,结果表明,抗菌肽DB16能够改变细菌细胞膜通透性,造成细胞内容物外泄,同时进入胞内与金黄色葡萄球菌基因组DNA结合,影响正常DNA的复制,最终抑制菌体的生长繁殖。此外,对哺乳动物红细胞的处理表明,DB16在8×MIC条件下仍无溶血性。综上,源自蜡样芽孢杆菌的抗菌肽DB16在金黄色葡萄球菌防控方面具有很大应用潜力。

一株蜡样芽孢杆菌产抑菌物质发酵条件优化及抑菌效果研究

从广东湛江红树林自然保护区的红树植物根际土壤中分离筛选出一株广谱抑菌效果的菌株蜡样芽孢杆菌M15,对菌株M15进行发酵培养条件优化,采用特定发酵培养基的基础上,控制单一变量,对装液量、接种量、发酵温度和发酵时间进行优化,并对其抑菌活性物质的酸碱稳定性、热稳定性和蛋白酶耐受性进行测定。结果表明:菌株M15的发酵条件为装液量30 mL、接种量2%、发酵温度30℃、发酵时间120 h时,发酵液的抑菌效果最佳,对大肠杆菌、链球菌和沙门氏菌抑菌圈直径均为17 mm,金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为15 mm;发酵培养基pH小于5.0或者大于6.0时,抑菌活性丧失;菌株M15的发酵液抑菌活性在30~60℃较稳定,但≥80℃时,发酵液抑菌物质失去活性;抑菌物质对胰蛋白酶不敏感,对木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶E和蛋白酶K敏感。

蜡样芽孢杆菌YF-2对荧光假单胞菌群体感应的淬灭活性

荧光假单胞菌是生鲜水产品中常见的优势腐败菌,其致腐能力受N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)类群体感应系统调控。以群体感应淬灭活性为导向,利用热灭活和酸敏感试验分析菌株YF-2分泌的淬灭活性物质类型。采用结晶紫染色法和激光共聚焦显微镜技术探究菌株YF-2对荧光假单胞菌生物膜的抑制和清除作用。通过生理生化和16S rDNA对菌株YF-2进行鉴定。结果表明:菌株YF-2对荧光假单胞菌AHLs具有较强的淬灭作用,降解率为100%,且淬灭活性物质在细胞提取物(CCE)中,通过热灭活及酸敏感试验初步判断淬灭活性物质为酰基转移酶或氧化还原酶。蛋白质量浓度为20,40μg/mL和80μg/mL的CCE对C4-HSL、C6-HSL及C8-HSL的降解率在52.8%~100%范围,对荧光假单胞菌生物膜的抑制率和清除率分别在25.84%~56.63%和26.12%~59.35%范围。此外,激光共聚焦图像表明CCE使荧光假单胞菌生物膜厚度减少,生物膜结构被破坏。同时,菌株YF-2被鉴定为蜡样芽孢杆菌。本研究为应用芽孢杆菌控制水产品腐败菌荧光假单胞菌提供一定的理论依据。

蜡样芽孢杆菌对银鲑生长性能、血清生理生化指标、肝脏抗氧化能力及肠道的组织结构影响

在水温10~18℃下,将初始体质量(130.2±10.5)g的银鲑(Oncorhynchus kisutch)饲养在流水水泥池中1×1×0.8(m^(3))的网箱中,每箱20尾,投喂喷淋活蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌液的饲料,添加量分别为0 CFU/g(CK对照组)、8×10^(11)CFU/g(H组)、4×10^(9)CFU/g(M组)和2×10^(7)CFU/g(L组)6周,每组设3个重复,研究饲料中添加不同浓度的蜡样芽孢杆菌对银鲑生长性能、血清生理生化指标、肝脏抗氧化能力以及肠道组织结构的影响。结果表明,投喂添加蜡样芽孢杆菌饲料的银鲑增重率(WGR)、肝体比(HSI)、存活率(SR)和特定生长率(SGR)均显著高于对照组(P<0.05),饲料系数(FCR)显著降低(P<0.05),蛋白质效率(PER)显著提高(P<0.05);各试验组银鲑血清中总胆固醇(T-CHO)、血清葡萄糖(GLU)、血清总蛋白(TP)含量与血清白蛋白(ALB)含量均显著提高(P<0.05)。其中,蜡样芽孢杆菌M组CHO、GLU、TP与ALB含量较其余实验组显著提高(P<0.05);各实验组银鲑血清谷丙转氨酶(GPT)与谷草转氨酶(GOT)活性与对照组无显著差异(P>0.05)。各实验组血清碱性磷酸酶(AKP)与空白对照差异显著(P<0.05);各试验组银鲑肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)酶活性较对照组显著提高(P<0.05),H组和M组丙二醛(MDA)较对照组显著降低(P<0.05),L组MDA与对照组降低但差异不显著(P>0.05),各实验组还原性谷胱甘肽(GSH)较对照组显著增高(P<0.05),H组和M组总抗氧化能力(T-AOC)较对照组显著增高(P<0.05),L组与对照组并无显著差异(P>0.05)。各实验组肠道肌层高度、绒毛长度、隐窝厚度较对照组均有提高,其中M组后肠各指标显著提高(P<0.05)。综上所述,饲料中添加4×109CFU/g蜡样芽孢杆菌可以促进银鲑的生长,改善血清生化指标,提高肝脏抗氧化能力,改善肠道健康。

基于转录组学分析揭示蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)AR1002阻控黄曲霉生长的生理机制研究

黄曲霉(Aspergillus flavus)极易侵染油料等农产品,其次级代谢产物黄曲霉毒素严重危害人体健康,阻控黄曲霉污染已成为亟待解决的国际难题。为探明蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)AR1002抑制黄曲霉生长、阻控黄曲霉污染的生理及分子机制。该研究采用AR1002代谢产物对黄曲霉进行处理,并对黄曲霉生长及产孢表型进行鉴定,通过显微结构及转录组学分析,对AR1002的抑菌机制进行了初探。蜡样芽胞杆菌AR1002代谢物可抑制黄曲霉菌丝生长、干物质积累分别达24.73%,65.00%,减少孢子数量达98.80%;AR1002通过抑制glpA和AYR1等关键基因表达调控黄曲霉甘油磷酸代谢,通过抑制SEC61A、RAD23、ATP13A1、UBE2G2等关键基因的表达调控内质网中蛋白质加工;此外,AR1002代谢产物通过下调RAD51和RAD54B等DNA修复机制相关基因,抑制黄曲霉同源重组及非同源性末端连接过程,最终达到抑制黄曲霉生长及产孢的目的。上述结果表明,蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)AR1002有望应用于实际生产中以应对黄曲霉污染问题。

非致病性蜡样芽孢杆菌的益生功能与应用

蜡样芽孢杆菌广泛分布于环境当中。传统的致病性蜡样芽孢杆菌由于携带毒力基因,具有编码肠毒素和腹泻毒素的能力,被人类误食后会引起食物中毒甚至导致严重的疾病,因而引起人们的广泛关注。近年来,非致病性蜡样芽孢杆菌所具有的功效逐渐被人们所发现,并且应用于动物饲料的添加剂中;然而关于非致病性蜡样芽孢杆菌的益生功能却鲜有报道,该研究综述了非致病性蜡样芽孢杆菌的益生功能及其在食品领域的应用,主要包括抑菌功能、抗炎作用以及促生长作用等,并且对未来的研究发展方向做出了展望。

云南木姜子提取物对蜡样芽孢杆菌抑菌作用的研究

目的研究云南木姜子(Yunnan Litsea cubeba)的抑菌活性及抑菌稳定性。方法用乙醇对云南木姜子果实进行提取并分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。比较不同萃取相对蜡样芽孢杆菌的抑制作用,并通过热处理、酸碱处理、紫外照射、金属离子处理、糖和盐处理对其稳定性进行考察。结果云南木姜子提取物对蜡样芽孢杆菌具有良好的抑菌作用,其活性成分主要分布于乙酸乙酯相,其对蜡样芽孢杆菌的最小抑菌浓度为0.08 mg/mL;云南木姜子乙酸乙酯萃取相经紫外线照射、酸碱处理和不同温度处理仍表现出良好的稳定性,盐和糖处理条件使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性增强,对于金属离子处理,Mg^(2+)使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性提高,Fe^(3+)、Fe^(2+)、Al^(3+)和Ca^(2+)等使其抑菌活性降低。结论云南木姜子提取物具有良好的抑菌活性,温度、紫外和pH对其抑菌成分的稳定性有较小的影响,金属离子、糖和盐浓度对其抑菌活性影响较大。因此可考虑将云南木姜子作为一种天然植物源防腐剂,它在保鲜方面具有良好的开发和利用前景。

具有益生功能芽孢杆菌的筛选鉴定及特性研究

本研究旨在筛选出产酶能力及抑菌性能优良的发酵菌株,为新型饲料资源的开发和抗生素替代品的研究提供参考。以蜡样芽胞杆菌菌株H14为出发菌株,分析其酶学特性和抑菌性能,通过单因素试验对发酵菜籽粕的饲料添加量与发酵时间进行优化。筛选鉴定出一株产纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶的蜡样芽胞杆菌H14。产纤维素酶最适反应条件为60℃,pH 9,酶活11.51 U/mL,蛋白酶酶活73.68 U/mL,淀粉酶酶活5.96 U/mL,木聚糖酶酶活14.02 U/mL。对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最大抑菌直径分别为18.200±0.200 mm和17.567±0.493 mm。发酵菜籽粕产纤维素酶的最佳条件为菜籽粕添加量25%,发酵48 h,酶活为12.608 U/mL,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌效果分别为菜籽粕添加量25%,发酵48 h,抑菌直径为24.933±0.204 mm;菜籽粕添加量25%,发酵72 h,抑菌直径为27.400±0.529 mm,发酵产物含蔗糖、木糖、葡萄糖。综上所述,本研究成功筛选出一株具有良好产酶和抑菌特性的发酵菌株H14,其在发酵菜籽粕生产中表现出良好的应用潜力,为未来发酵饲料的研发提供了有价值的参考。

养殖水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465对凡纳滨对虾抗病力的影响

将蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）PC465添加到凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）养殖水体中至终浓度分别为10^4、10^5和10^6CFU／mL，以无益生菌添加的养殖组为对照组，定期检测实验对虾肠道和养殖水体中的细菌总数、弧菌总数以及水体中氨氮含量和亚硝酸氮含量。实验结果表明，水体中添加益生菌能降低凡纳滨对虾肠道内细菌数量，且与对照组相比差异显著（P〈0．05）；高浓度的益生菌处理组可以明显降低养殖水体内弧菌数量（P〈0．05），但是益生菌并没有显著影响水体中的氨氮含量和亚硝酸氮含量。养殖4周后进行WSSV投喂感染实验，感染实验表明，实验组H组（益生菌浓度为10^6CFU／mL）和M组（益生菌浓度为10^5CFU／mL）凡纳滨对虾的累计死亡率分别为63．9％和74．6％，显著低于对照组100％的累计死亡率（P〈O．05）。感染实验期间采用荧光定量PCR方法测定了凡纳滨对虾3种免疫相关基因的表达情况，统计数据显示，益生菌处理组的脂多糖-β-1，3-葡聚糖结合蛋白（1ipopolysaccharide-β-1，3-glucan-binding protein，LGBP）、3-1，3-葡聚糖结合蛋白-脂蛋白（beta-1，3-glucan．bindingprotein-lipoprotein，pGBP-HDL）、热激蛋白70（heatshockproteins，Hsp70）mRNA的表达量在WSSV感染后呈显著上调趋势。实验结果提示，水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465可以提高凡纳滨对虾抗WSSV感染能力，其作用机制可能是降低对虾肠道和水体中的细菌和弧菌数量，或调节免疫相关基因的表达水平。

蜡样芽孢杆菌ANTI-8098A在番茄内的定殖和对青枯病的防治研究

本文研究了生防菌ANTI-8098A在番茄植株内的定殖及其对青枯病的生防特性,采用激光共聚焦显微技术观察了GFP标记菌株ANTI-8098A：pCM20在番茄根系的分布。ANTI-8098A及其标记菌株可很好地定殖于番茄植株内,在根内定殖浓度最高,达10^4－10^5cfu.g-1,茎部、叶片内次之,达10^3－10^4cfu.g-1;ANTI-8098A处理后番茄根系PPO活性显著提高,对番茄叶绿素含量有短期效应;处理后5~15d番茄根际微生物数量略低于对照,其后逐渐与对照趋于一致;ANTI-8098A及其标记菌株对青枯病的防效存在一定差异,平均防效为57.1%-100%。

蜡样芽孢杆菌CGMCC4348菌株防治番茄灰霉病的效果及机理研究

试验研究蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CGMCC4348菌株对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的生物防治效果,并初步探讨其抑菌机理,以寻找防治番茄灰霉病的新方法。试验从定量生物测定、室内离体抑菌试验和盆栽试验3个方面考察其抑菌作用效果,并以硫酸铵分级沉淀法提取拮抗蛋白进行检测。结果表明,室内抑菌试验的EC50为6.19 mg/L;盆栽试验中处理3对番茄灰霉病的平均防效达75.80%,与50 mg/L嘧霉胺处理的防效相当。试验证明蜡样芽孢杆菌CGMCC4348对番茄灰霉病菌有较好防治效果。

蜡样芽孢杆菌活菌制剂与蒙脱石联合治疗小儿病毒性腹泻

目的 :观察蜡样芽孢杆菌活菌制剂与蒙脱石联合治疗小儿病毒性腹泻的疗效。方法 :165例病毒性腹泻病儿随机分为A ,B ,C 3组 ,每组 55例。口服剂量 :蜡样芽孢杆菌活菌制剂 (L) ,≤ 1a 1/ 3粒 ,1～ 3a半粒 ,3～ 6a 2 / 3粒 ,6～ 10a 1粒 ,10～12a 1.5粒 ;蒙脱石 (M ) ,≤ 1a 1/ 3袋 ,1～ 3a半袋 ,3～ 6a 2 / 3袋 ,≥ 6a 1袋 ;乳酸杆菌制剂 (R) 0 .3～ 0 .6g·次 1。每日均 3次 ,L与R饭后 0 .5h口服 ,M于饭前空腹口服。结果 :A组 (L +M )治愈日数为 ( 1.92± 0 .2 1)d ,总有效率为 10 0 % ;B组 (M )为 ( 3.3± 0 .8)d和 93 % ;C组 (M +R)为 ( 3.6±0 .6)d和 84 % ,3组比较 (P <0 .0 1,P <0 .0 5)。结论 :蜡样芽孢杆菌活菌制剂与蒙脱石联合治疗小儿病毒性腹泻病疗效显著 ,无副作用。

家兔耐热蜡样芽孢杆菌的分离鉴定和筛选

蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）为革兰阳性菌，广泛存在于土壤等环境中，是一种需氧型的大杆菌。非毒性菌株可以作为健康动物肠道菌群的组成成分，对动物的生长发育起促进作用。蜡样芽孢杆菌与其他乳酸菌、肠球菌等非芽孢类益生菌相比具有很多优点，如在不利环境条件下能够以孢子形式存在，有耐高温、耐酸碱、耐挤压和耐温度变化等特点，能够经受颗粒饲料加工的影响，满足饲料加工的要求；在储藏过程中以孢子形式存在，处于休眠期，不消耗饲料的营养成分，不影响饲料品质，

抗猕猴桃细菌性溃疡病蜡样芽孢杆菌MA23培养基及发酵条件优化

蜡样芽孢杆菌MA23对猕猴桃溃疡病病原菌丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)有较好的抑制作用,优化其发酵培养基及发酵条件将为猕猴桃溃疡病的有效防治提供参考。本研究通过正交设计实验和单因素实验分别优化其发酵培养基和摇瓶发酵条件,提高摇瓶发酵的菌体量和抑菌活性。正交实验方差分析结果显示,蛋白胨、可溶性淀粉、K2HPO_(4)和MgSO_(4)为高度显著因素,NaNO_(3)为显著因素,葡萄糖为不显著因素,它们对实验结果影响由大到小表现为可溶性淀粉>K2HPO_(4)>蛋白胨>MgSO_(4)>NaNO_(3)>葡萄糖,综合考虑确定最优组合为A1B4C4D1E2F2。因此,蜡样芽孢杆菌MA23的最优培养基为葡萄糖0.8%,蛋白胨0.2%,可溶性淀粉3.5%,NaNO_(3)0.05%,K2HPO_(4)0.2%,MgSO_(4)0.2%,CaCO_(3)0.12%,MnSO_(4)0.035%;培养基优化后,蜡样芽孢杆菌MA23发酵液的菌体量和抑菌活性分别提高了41%和37.2%。通过发酵条件优化,确定了蜡样芽孢杆菌MA23最佳发酵初始pH 6.5,最佳发酵温度为30℃,最佳接种量为8%,最佳装液量为70 mL,最佳摇床转速为180 r/min,菌体量和抑菌活性分别提高了28.2%和25.6%。通过培养基和发酵条件优化,蜡样芽孢杆菌的菌体量和抑菌活性都得到大幅提高,为其进一步应用提供了参考。

食源蜡样芽孢杆菌16SrDNA分子鉴定及其抑菌活性的研究

对食源中筛选的具有抑菌活性、初步鉴定为蜡样芽孢杆菌的4株菌,进行16SrDNA分子鉴定,采用PCR扩增技术,建立4株菌的系统发育进化树,进行序列同源性分析,并通过琼脂打孔扩散法测定4株菌发酵液的抑菌谱.实验结果表明,4株菌16SrDNA基因序列基本一致,为同源蜡样芽孢杆菌,命名为BC2345.4株菌的发酵液具有较宽的抑菌谱,对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和沙门氏菌等常见病原菌具有抑制作用.

蜡样芽孢杆菌眼内炎1例

蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）属革兰阳性粗大杆菌,无荚膜,可产芽孢,广泛存在于水、土壤、空气、无脊椎动物的消化道和人类皮肤等,是引起食物中毒的常见病原菌之一,也可引起血流感染、肺炎、眼部感染、中枢神经系统感染、皮肤软组织感染以及心内膜炎等。

大肠埃希氏菌和蜡样芽孢杆菌致犊牛腹泻的诊治

为了对某肉牛场发生的犊牛腹泻进行诊断和治疗,采集了发病犊牛的肝脏和脾脏,通过细菌分离鉴定和小鼠致病性试验对其进行诊断。最终分离到1株蜡样芽孢杆菌和1株致病性大肠埃希氏菌,致病性试验发现所分离的蜡样芽孢杆菌和致病性大肠埃希氏菌接种小鼠会使其分别在36 h和24 h全部死亡。同时,结合发病犊牛的临床表现确诊为致病性大肠埃希氏菌混合蜡样芽孢杆菌感染引起的腹泻。药敏试验结果显示致病性大肠埃希氏菌对头孢噻呋钠、硫酸庆大霉素和复方磺胺氯达嗪钠敏感,蜡样芽孢杆菌对庆大霉素、氟苯尼考、万古霉素和恩诺沙星敏感。对发病犊牛进行隔离,参考药敏试验结果配合中药处方等措施,犊牛病情得到有效控制。

蜡样芽孢杆菌、产色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌三重PCR检测方法建立与应用

针对蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的hblA基因、产色葡萄球菌(S.chromogenes)的sodA基因和肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)的khe基因,建立了三重PCR检测方法。结果显示,退火温度为54℃,BC-hblA、SC-sodA和KP-khe引物浓度分别为0.6、0.2、0.1μmol/L为最佳扩增条件;对B.cereus、S.chromogenes和K.pneumoniae的基因组DNA最低检测限分别为35.8、6.3、40.2 pg/μL,菌液最低检测限分别为9.9×10^(3)、1.1×10^(3)、1.0×10^(4)CFU/mL。特异性试验显示,除这3种菌以外,大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、产气荚膜梭菌和腐败梭菌检测结果均为阴性。14份临床乳房炎乳样的检测结果显示,三重PCR方法B.cereus、S.chromogenes和K.pneumoniae的阳性率分别为35.7%(5/14)、14.3%(2/14)和7.1%(1/14),其中蜡样芽孢杆菌的PCR检测阳性率高于细菌分离鉴定阳性率(28.6%),细菌分离鉴定与PCR检测方法的阳性符合率为87.5%。结果表明,成功建立了能够同时检测蜡样芽孢杆菌、产色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌的三重PCR方法,为引起乳房炎的病原菌的检测补充了新的方法,并为畜牧生产中这3种细菌的快速检测提供了有效方法。

蜡样芽孢杆菌B-02菌株培养基及培养条件的优化

为研究培养条件对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B-02菌株生长和对番茄灰霉病菌(Botrytis ci-nerea)抑菌活性的影响,分别采用分光光度计法、琼脂孔扩散法和杯碟法进行Bacillus cereusB-02菌株的菌体量和抑菌活性的测定。结果表明,B-02菌株的最佳培养条件为:装液量50 ml(250 ml三角瓶),接种量1%(V/V),转速140 r/min,温度32℃,初始pH值为9.0的NB培养基中培养36 h;在此条件下B-02菌株抑菌活性比初始条件提高16.22%。