免疫亲和色谱特异性剔除中药方剂四逆散中的柚皮苷

为了获得剔除柚皮苷(naring in)的中药方剂四逆散样品以供其药理活性探讨时使用,制备了抗柚皮苷抗体的免疫亲和色谱柱,用于特异性地剔除四逆散中的柚皮苷。首先合成了柚皮苷的完全抗原柚皮苷与牛血清白蛋白的结合物naring in-B SA,并用naring in-B SA对新西兰兔进行免疫获得抗血清,再将其纯化后与经CNB r活化的Sepharo se4B凝胶共价偶联制成免疫亲和色谱柱。将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱,洗脱,制得特异性剔除了柚皮苷的四逆散样品。由检测结果可知,naring in-B SA被成功合成。将其用于免疫新西兰兔,获得的抗血清的效价经酶联免疫吸附法(ELISA)测定达到1∶30 000,抗体IgG的纯度达94%,交叉反应率低。在IgG与Sepha-ro se4B合成的IgG-Sepharo se免疫亲和色谱柱中,IgG的偶联率为87%。用该免疫亲和色谱柱处理四逆散后,其中所含的柚皮苷几乎完全被剔除。结果证明,利用抗柚皮苷免疫亲和色谱,能特异性地剔除四逆散或其他样品中的柚皮苷成分。

特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的方法

利用组织特异性分子标志物启动子调控Cre重组酶,研制了6种在不同组织中特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。这些转基因小鼠的基因型鉴定均使用设计在Cre基因编码区的通用引物。为了特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶的转基因小鼠,在大鼠胰岛素RIP启动子上和Cre基因上设计1对引物进行PCR扩增,并通过凝胶电泳进行分析。PCR结果显示,设计在Cre基因上的通用引物可以从6种不同组织特异性Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA中扩增获得480bp产物;利用本研究设计的特异性引物可以从胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA中扩增200bp的目的条带。这一结果表明,利用特异性引物进行PCR反应,可有效地将胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠与其他多种组织的Cre重组酶转基因小鼠鉴别开来。

以四逆散为例谈中药成分在复方中的作用地位

中药复方是中医辨证论治、处方用药的重要手段之一,其君臣佐使等配伍的独特规律及效用的优越性等已为长年累月的临床实践所证实。尽管多年来人们一直致力于阐明中药复方作用的机理和物质基础,但由于中药所含成分及其配伍效应的复杂性,中药复方的研究仍存在很多问题。尤其是成分在复方中的作用地位以及成分间相互作用的研究,目前尚缺少理想的研究方法。本课题组十余年通过对传统名方四逆散的系统研究,从整体到细胞和分子水平、从全方到药对配伍、从单体成分的配伍到成分的特异性剔除等多个角度阐述了四逆散的作用,在此基础上提出并总结了一些研究思路,包括方剂效应的多指标评价、主要成分的分工及与活性的关系、药对配伍与成分配伍相结合、成分配伍与剔除相结合等。特别是中药成分的特异性剔除系本课题组首次尝试,我们成功地从四逆散中分别特异性地剔除了柴胡皂苷、芍药苷、柚皮苷和甘草酸,通过观察剔除前后活性的改变,了解成分在方中承担的角色,为配伍规律和成分间相互作用的研究打下基础,对于其他中药和复方的研究亦具有指导意义。

中药成分在方剂中的作用及其研究思路

中药成分在方剂中的作用及成分间相互作用的研究,目前尚缺少理想的研究方法。本文通过对传统名方四逆散的系统研究,从整体到细胞和分子水平,从全方到药对配伍,从单体成分的配伍到成分的特异性剔除等多个角度叙述了四逆散的作用,在此基础上提出并总结了一些研究思路,包括方剂效应的多指标评价;主要成分的含量、分工及与活性的关系;药对配伍与成分配伍相结合,成分配伍与剔除相结合等。特别是中药成分的特异性剔除系首次尝试,我们成功地从四逆散中分别特异性地剔除了柴胡皂苷、芍药苷、柚皮苷和甘草酸,通过观察剔除后活性的改变,了解成分在方中承担的角色,为配伍规律和成分间相互作用的研究打下基础,对于其他中药和方剂研究亦具有指导意义。

芹菜素在风轮菜改善高糖所致血管内皮细胞损伤中的作用

目的通过特异剔除芹菜素(AP),研究AP在风轮菜活性部位(CCE)改善高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)损伤中的作用地位。方法应用Sephadex LH-20凝胶柱色谱法从CCE中特异剔除AP,制备剔除AP的CCE(CCEAP-)。将培养的内皮细胞随机分为5组:对照组、高糖模型组、CCE组、CCEAP-组和AP组。以MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测胞内活性氧(ROS)水平,通过Hoechst染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态,以Annexin V-FITC染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,以分光光度法检测细胞内caspase-3的活性,并用Western blotting检测Bax的表达情况。结果 CCE组和AP组均能显著提高高糖损伤的内皮细胞存活率,降低高糖诱导的内皮细胞胞内ROS水平、内皮细胞凋亡率、caspase-3的活性及Bax的表达。而CCEAP-组对高糖所致内皮细胞损伤的改善作用不明显。结论 AP是风轮菜改善高糖所致内皮细胞损伤的重要成分之一,其改善高糖诱导内皮细胞凋亡作用与抗氧化应激有关。