特异性单引物PCR

建立特异性单引物PCR ,并用于筛选基因克隆重组子。根据α -globin的一段序列设计引物 ,按照设计好的特性单引物PCR扩增条有α -globin的重组质粒PLNSX -αglobin ,具体扩增条件如下 :(1) 97℃5min变性后 ,94℃ 30s ,70℃ 2min ,72℃ 2min30s,30个循环 ,制备单链模板 ;(2 ) 94℃ 1min ,12℃ 5min ,16℃3min ,18℃ 3min ,2 0℃ 3min ,2 2℃ 3min ,2 5℃ 1min ,30℃ 3min ,37℃ 3min ,72℃ 6min ,低温条件下引物 3′端 4～ 5个碱基与所扩单链模板退火配对 ,扩增得到一系列不同起始位点但同一序列末端长短一的核酸片段 ;(3)以上述所得片段为模版进行如下条件的扩增 :94℃ 30min ,70℃ 2min ,72℃ 2min ,(每个循环增加 1s) ,4 5个循环。结果 ,特异性单引物PCR能够从pLNSX -αglobin上扩增出特异带 ,可有效用于筛选基因克隆重组子。