HA 226/228双位点突变对H5N1禽流感病毒受体结合特异性和致病性的影响

禽流感病毒(AIV)主要识别SAα2,3Gal受体,而人源流感病毒主要识别SAα2,6Gal受体。本研究利用糖链受体结合特性检测方法检测表明,H5N1 AIV A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)可以同时识别SAα2,3Gal和SAα2,6Gal受体,然而HA 226位谷氨酸(Q)到亮氨酸(L)和228位甘氨酸(G)到丝氨酸(S)的双突变,可以导致DK/35更倾向于识别SAα2,6Gal受体。对BALB/c小鼠致病性试验显示,突变病毒株(rDK/35(Q226L/G228S))对小鼠的致病力比野毒株弱,其MLD50为4.7 log10EID50,而DK/35为1.8 log log10EID50。本研究表明H5N1 AIV通过突变可以获得优先与SAα2,6Gal受体特异性结合的能力,为H5N1 AIV的监测预防和对公共卫生风险评估提供一定的参考依据。

甾体激素受体功能特异性的结构基础

甾体激素受体家族包括雌激素受体、雄激素受体等五个亚家族 ,在机体组织细胞的生长分化、发育生殖、内环境稳定等几乎所有生理过程中都起着重要的作用。研究甾体激素受体亚家族的特异性可以加深对该家族功能的理解 ,并且具有潜在的临床应用价值。采用进化踪迹方法对该家族的配体结合域 (LBD)进行分析 ,探讨了决定亚家族功能特异性的结构基础。结果表明 ,甾体激素受体的各亚家族可能同相应的内源性配体存在着共进化关系 ;配体结合处的踪迹残基决定了受体-配体间的氢键作用和疏水相互作用模式并导致了亚家族的配体结合特异性。上述结论可用于甾体激素受体的配体结合特异性的改造以及新型组织选择性配体 (如选择性雌激素受体调节剂 ,SERM)

老年乳腺癌组织雌激素受体、孕激素受体与富集AT序列的特异性结合蛋白1及人表皮生长因子受体-2表达的相关性

目的探讨老年乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与富集AT序列的特异性结合蛋白(SATB)1及人表皮生长因子受体(Cerb B)2表达的相关性。方法回顾性分析原发性乳腺癌患者172例的临床资料。以距肿瘤组织超过5 cm外的癌旁组织为对照,用免疫组化方法检测乳腺癌组织中SATB1、CerbB2表达及其与临床病理特征、ER、PR的关系。结果 SATB1、CerbB2在乳腺癌组织中表达的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05)。组织学分级Ⅲ级的乳腺癌组织中SATB1、CerbB2表达阳性率最高,其次为Ⅱ级、Ⅰ级,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期为Ⅲ期的乳腺癌组织中SATB1、CerbB2表达阳性率显著高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05);有淋巴结转移的乳腺癌组织中SATB1、CerbB2表达阳性率显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)。SATB1、CerbB2在乳腺癌组织中的表达与ER、PR表达呈显著负相关(r_(ER)=-0.387,-0.372,r_(PR)=-0.296,-0.329,均P<0.05)。结论 SATB1、CerbB2在老年乳腺癌组织中呈高表达,且与ER及PR表达呈显著负相关。

膜脂流动性对亲和素与膜表面模型受体特异性结合的影响

在人工膜表面研究分子识别及蛋白质与膜表面特异性受体的作用是近年来活跃的一个领域。胰岛素受体作为一种天然的膜受体,已经通过重组的脂质体和平面脂双层进行过系统的研究。把一些具有识别功能的分子化学耦联到磷脂层表面,形成膜表面模型受体(membrane bound model receptor)则是研究分子识别和受体结合性质的另一途径。最近德国慕尼黑的生物物理实验室把抗体Fab链耦联到磷脂头部作为膜表面模型受体,用LB膜技术对其与配体结合进行深入研究。另外一个值得注意的工作是关于streptavidin/biotin之间的特异性结合,德国美因茨的实验室利用化学耦联的biotin-fipid,在空气/水界面上对streptavidin与biotin的相互作用进行了研究。本文的研究对象是avidin/biotin这一具有高度亲和力和稳定性的系统。中性条件下,Biotin-avidin复合物的解离常数为10^(-15)M^(-14)。同时,biotin与avidin的结合又在pH或变性剂很大的变化范围内均能保寺稳定存在。

EGFR特异性单链抗体与靶细胞结合的特异性

目的:检测EGFR特异性单链抗体F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特性。方法:提取细菌周质腔蛋白经N i-NTA柱纯化F4-scFv;采用流式细胞术及W estern b lot检测F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合的特异性。结果:N i2+柱纯化的F4-scFv经SDS-PAGE可见分子量为36 kDa单一条带,F4-scFv可与EGFR阳性细胞CHO-EGFR-GFP1、A431及MDA-MB-231特异性结合,而不与EGFR阴性细胞CHO-K1及SKOV3结合。结论:F4-scFv可与天然表达EGFR的细胞特异性结合,为其靶向抗肿瘤研究奠定了基础。

噬菌体受体结合蛋白及其宿主谱扩展的相关研究进展

噬菌体是如今地球上种类最多、分布最广的生物之一,在清除细菌尤其是针对目前广泛出现的多重耐药细菌上具有巨大优势。目前多种噬菌体产品已在食品原料、养殖动物、食源性致病菌检测及即食食品杀菌等领域投入使用且效果良好,但天然噬菌体狭窄的宿主范围与复杂的宿主互作机制很大程度上限制了新型噬菌体抑菌剂的开发。噬菌体与宿主细菌的特异性结合依赖于噬菌体表面的受体结合蛋白,对各种不同的噬菌体受体结合蛋白的结构功能与作用机制进行研究有助于进一步了解噬菌体与细菌的互作过程,在此基础上利用诱导培养及基因工程等方法对噬菌体受体结合蛋白进行改造以获得优质的宽谱噬菌体已经成为噬菌体研究的重要内容之一。本文对噬菌体受体结合蛋白的不同结构与各种宿主谱扩展方案的相关研究进行总结,为食品工业中噬菌体的进一步开发与应用提供理论支撑。

流感病毒受体特异性红细胞检测试剂的制备及初步应用

为优化流感病毒受体特异性的检测方法,本研究利用霍乱弧菌神经氨酸酶(VCNA)对鸡红细胞(RBC)进行去唾液酸化处理后,再分别通过α2,3和α2,6唾液酸转移酶以CMP-唾液酸作为底物进行不同唾液酸受体的标记,使其分别仅含SAα2,3Gal和SA2,6Gal受体,利用血凝试验和流式细胞仪检测其标记效果。流式检测结果显示,经过α2,3唾液酸转移酶处理的红细胞只含有SAα2,3唾液酸受体,而α2,6唾液酸转移酶只将SAα2,6唾液酸受体标记到红细胞表面。将两种红细胞分别经过人流感病毒和禽流感病毒的检测,表明该方法可以快速鉴定流感病毒的受体特异性。本研究所建立的流感病毒受体特异性标记和检测方法为流感病毒宿主嗜性范围的检测提供了一种有效的技术手段。

受体特异性蛋白:对Mabs药物生产的一个挑战

尽管受体特异性蛋白还没有广泛地应用,然而利用其在体内通过特异性受体结合到靶药物上(而不必用 Mabs),从而识别特异性细胞的尝试已越来越多。例如 Seragen 股份有限公司(马萨诸塞州霍普金顿)和波士顿、马萨诸塞的几家医院的研究人员已经成功地利用白细胞介素-2(IL-2)和部分白喉毒素的融合蛋白杀死动物中的活性 T 细胞和阻止所谓延缓型过敏性(DTH)反应。上述研究小组用 IL-2基因替代白喉毒素中的受体结合编码区。

山柰酚拮抗血小板活化因子与其受体结合的作用

目的 :观察山柰酚对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合作用的影响 ,试图证明该药为一新型血小板激活因子 (PAF)受体拮抗剂。方法 :以放射配基结合试验观察 [3 H]PAF与家兔血小板受体的特异性结合 ;分光光度法测定PAF诱发的血小板黏附强度 ;Fura 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞 (PMNs)内钙离子浓度的升高。结果 :山柰酚可浓度依赖地抑制 1,2 ,4nmol·L-1[3 H]PAF与血小板受体的特异性结合 ,IC50 分别为 30 .8,74 .6 ,92 .0 μmol·L-1;该药可明显抑制PAF诱发的兔血小板黏附及PMNs内游离钙升高 ,且均呈明显的量效关系 ,其抑制血小板黏附的IC50 为 6 5 μmol·L-1。结论 :山柰酚具抗PAF的作用 。

NRSE与NRSF及其对神经元特异性基因表达的调控作用

神经限制性沉默元件(NRSE)是一段长度为21￣23bp的保守DNA序列,存在于许多神经元特异表达基因的转录调控区中,神经限制性沉默因子(NRSF)能特异性结合到NRSEdsDNA上,并通过其N端和C端阻遏结构域分别连接共阻遏蛋白Sin3A/B和CoREST,Sin3A招募HDAC对组蛋白进行去乙酰基化修饰,CoREST则作为平台蛋白招募特异的“沉默组件”,以此维持基因沉默.最近的研究显示,NRSEdsRNA能在转录水平与NRSF蛋白直接作用,而不是作为siRNA或miRNA在转录后水平启动神经元特异性基因的表达.

^(125)I-GM-CSF的制备及其受体结合分析

粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）通过其特异性受体（GMR）维持靶细胞存活,刺激靶细胞增殖与分化.^125I-GM-CSF是研究GM-CSF与受体生物学特性及其相关信号转导途径,探求髓性白血病发病机制的重要工具.笔者对^125I-GM-CSF的制备及其受体结合进行研究,现报道如下.

NLRP3炎症小体、高迁移率族蛋白B1与内皮细胞特异性分子-1诊断脓毒症合并急性呼吸窘迫综合征的临床价值

目的 探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体、高迁移率族蛋白B1(high-mobilitygroupbox-B1,HMGB1)以及内皮细胞特异性分子-1(endothelialcell specificmolecule-1,ESM-1)对脓毒症合并急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)的诊断价值。方法 选择重庆医科大学附属永川医院2021年1月至2021年6月收治的87例脓毒症患者,根据ARDS诊断标准,将36例合并ARDS的脓毒症患者作为观察组,51例单纯脓毒症患者作为脓毒症对照组,另选择同期在重庆医科大学附属永川医院体检的健康体检者43例作为健康对照组,收集各组基本临床资料,并测定各组NLRP3 mRNA、HMGB1、ESM-1水平,采用logistic回归分析脓毒症合并ARDS的影响因素,并通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线观察HMGB1、ESM-1、NLRP3mRNA+HMGB1+ESM-1预测脓毒症合并ARDS的临床价值。结果 观察组的NLRP3mRNA、HMGB1及ESM-1水平均高于脓毒症对照组、健康对照组,且脓毒症对照组高于健康对照组,差异有显著性(P<0.05)。Logistic回归分析显示,肺部感染、APACHEⅡ评分、NLRP3 mRNA、HMGB1、ESM-1均是脓毒症合并ARDS的影响因素。ROC曲线分析显示,ESM-1诊断脓毒症合并ARDS的最佳临界值为10.56,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.566(95%CI 1.655~2.297,P<0.001),灵敏度为70.35%,特异度为79.26%;HMGB1诊断脓毒症合并ARDS的最佳临界值为98.77,AUC为0.661(95%CI 1.769~2.436,P<0.001),灵敏度为72.41%,特异度为80.57%;NLRP3 mRNA+HMGB1+ESM-1联合诊断的灵敏度为85.96%,特异度为94.78%。结论 NLRP3炎症小体、HMGB1及ESM-1在脓毒症合并ARDS的诊断中具有临床价值,可作为评估患者预后的重要指标。

神经营养因子和受体复合物结构研究取得重要进展

神经营养冈子是一类对神经元的发育。存活和凋产起重要作用的蛋白质。其成员包括神经生长因子（NGF），脑源性生长因子（BDNF），神经营养因子3（NT-3），神经营养因子4（NT-4）等，这些蛋白质是治疗神经损伤等疾病的潜在药物标靶。生物物理所江涛课题组题，利用X-射线晶体学方法解析了NT-3与p75NTR胞外区复合物的2．6A分辨率的三维结构，并开展了相关的生化研究。研究结果揭示了神经营养因子-3与p75NTR的特异性结合方式，使人们得以更加深入地了解神经营养因子与受体相互作用的机制。

细胞焦亡相关蛋白在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系

目的:探究细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系。方法:选择2020年1月至2023年1月于常熟市中医院妇产科就诊并分娩的胎膜早破孕妇135例作为观察组,另选择同期产检并分娩的健康孕妇135例作为对照组,比较两组孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达。依据妊娠结局将135例胎膜早破孕妇分为妊娠不良组(n=50)和妊娠良好组(n=85),通过单因素和多因素Logistic分析胎膜早破孕妇妊娠不良的独立危险因素;应用Logistic回归模型结合限制性立方样条(restricted cubic splines,RCS)分析胎膜早破孕妇胎膜组织中细胞焦亡相关蛋白表达量与妊娠不良的剂量反应关系;依据独立因素构建列线图预测模型,并对模型进行验证。结果:观察组胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达显著高于对照组(P<0.001)。就诊时间≥2 h、生殖道感染、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA高表达是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素(P<0.05);RCS结果显示,胎膜早破孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA表达量与妊娠结局不良呈非线性剂量反应关系,在NLRP3 mRNA表达量为1.20(OR=1.818,95%CI:1.673~1.932)和Caspase-1 mRNA表达量为1.25(OR=2.735,95%CI:1.132~3.821)处发生妊娠结局不良的风险最大;构建的列线图预测模型具有良好的区分度、准确性和临床适用性。结论:NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA在胎膜早破孕妇胎膜组织中呈高表达,二者是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素,随着表达量升高,胎膜早破孕妇妊娠不良的危险性也随之升高。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。

慢性荨麻疹患者外周血单个核细胞Toll样受体和DC-SIGN的检测和分析

目的检测慢性荨麻疹(CU)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2(TLR2)、TLR7、TLR9与树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN)的表达。方法分离CU患者20例与正常对照组20例外周血PBMC,部分细胞提取RNA,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测TLR2、TLR7、TLR9和DC-SIGN mRNA表达,采用流式细胞术检测剩余PBMC中TLR2、TLR7、TLR9和DC-SIGN的蛋白表达。结果 CU患者PBMC的DC-SIGN mRNA表达明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。CU患者PBMC TLR2蛋白表达高于正常对照组(P<0.05),DC-SIGN蛋白表达低于正常对照组(P<0.05)。结论 CU患者PBMC的DC-SIGN表达降低,TLR2蛋白表达增强。

CXCR1、ESM-1及IGFBP-2与COPD合并肺部感染患者疾病严重程度、预后的关系

目的 分析血清趋化因子受体1(CXCR1)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺部感染患者疾病严重程度、预后的关系。方法 选取2021年1月至2023年1月于阜阳市人民医院就诊的COPD患者325例,根据肺部感染情况分为感染组及未感染组。比较两组入院时的血清CXCR1、ESM-1、IGFBP-2水平及常规感染指标[C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)]水平,采用Pearson相关分析感染组上述指标的关系。比较不同病情严重程度COPD合并肺部感染患者入院时的CXCR1、ESM-1、IGFBP-2水平。对感染组患者跟踪随访6个月或死亡止,根据预后情况分为存活亚组及死亡亚组,比较两亚组患者入院时的血清CXCR1、ESM-1、IGFBP-2水平;采用受试者工作曲线(ROC)分析上述指标对COPD合并肺部感染患者死亡的预测价值。结果 325例COPD患者包括感染组109例及未感染组216例。感染组患者入院时的血清CXCR1、ESM-1、IGFBP-2、CRP、PCT水平高于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同病情严重程度COPD合并肺部感染患者入院时的血清CXCR1、ESM-1、IGFBP-2水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,感染组入院时的血清CRP水平与CXCR1、ESM-1水平呈正相关(P<0.05)。随访期间感染组死亡19例(17.43%),存活90例(82.57%),死亡亚组入院时的血清CXCR1、ESM-1、IGFBP-2水平高于存活亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC结果显示,血清CXCR1、IGFBP-2水平预测COPD合并肺部感染患者死亡具有一定局限性(AUC=0.636、0.769),ESM-1的预测效能较好(AUC=0.827),CXCR1+ESM-1+IGFBP-2三项联合诊断的预测效能最佳(AUC=0.904)。结论 血清CXCR1、ESM-1、IGFBP-2水平在COPD合并肺部感染患者的疾病严重程度及预后评估方面具有一定指导意义。

血清钙结合蛋白S100A_(12)及可溶性sRAGE在急性胰腺炎患者血清中的表达及意义

目的:探讨急性胰腺炎(AP)患者血清钙结合蛋白S100A_(12)及可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)蛋白的表达及临床意义。方法:将110例急性胰腺炎(AP)患者分为轻症组(MAP 54例)和重症组(SAP 56例),并以45例健康献血者作为对照组。入院后获取APACHEII评分,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定患者外周血中S100A_(12)、sRAGE在发病48h内的水平,使用受试者工作特征曲线(ROC)下面积分析S100A_(12)、sRAGE、PCT、APACHEII评分在区分重度和轻度急性胰腺炎方面的价值。结果:SAP组S100A_(12)、sRAGE、PCT、APACHEII评分的水平显著高于对照组、MAP组,差异有统计学意义(P<0.05)。MAP组和对照组各项指标之间比较差异无统计学意义(P>0.05),SAP组死亡者S100A_(12)、sRAGE水平明显高于存活者(P<0.05)。ROC曲线显示,S100A_(12)对SAP组的预测价值相关指标:敏感度81.42%、特异度93.28%,曲线下面积0.86,sRAGE对SAP的预测价值相关指标:敏感度66.54%、特异度92.38%,曲线下面积0.81,联合检测S100A_(12)和sRAGE的敏感度63.74%、特异度95.73%。结论:S100A_(12)、sRAGE与AP的严重程度和预后密切相关,S100A_(12)、sRAGE有可能成为重症急性胰腺炎早期诊断的新指标。