欧洲型PRRSV N蛋白特异性抗原表位基因串联表达及其产物的纯化

采用SOE-PCR方法将编码欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的aa2~12和aa40~46核苷酸片段进行重复串联,获得编码双表位重复串联基因NE,构建表达载体pGEX-4T-1-NE,将其转入BL21(DE3)pLysS菌中,获得融合蛋白。Western-blot检测结果表明,该融合蛋白可被欧洲型PRRSV阳性血清识别,而不能被美洲型PRRSV阳性血清、猪瘟病毒阳性血清和伪狂犬病病毒阳性血清识别。纯化所得的融合蛋白,为建立检测欧洲型PRRSV提供了抗原基础。

抗原表位特异性CTL在慢性HBV感染肝损伤和抗病毒中的作用研究

目的:探讨抗原表位特异性CTL在肝炎发作中的抗病毒和肝损害作用.方法:用四个HBV抗原表位肽四聚体对外周血中抗原特异性CTL进行检测,(HBV抗原表位肽分别为HBcAg18-27,序列为FLPSDFFPSV(C18),HBsAg183-191序列为WLSLLVPFV(E183),HBeAg335-343序列FLLTRILTI(E3.35),多聚酶P的575-583序列为FLLSLGIHL(P575))检测慢性乙型肝炎患者肝炎发作时病毒抗原表位特异性CTL出现频率,统计分析抗原表位特异性CTL频率与病毒载量和血清ALT水平的相关关系.将所有检测的病例按照血清ALT水平高低重新分组进行对比,分析各组间抗原表位特异性CTL频率的差异.结果:36例慢性HBV感染患者抗原表位特异性CTL检测阳性33例(91.7%),HBeAg183-191表位特异性CTL频率高于其他三个(P<0.05).统计分析抗原表位特异性CTL频率与病毒载量和血清ALT水平相关性不显著;分组对比发现血清ALT升高5-10倍组多个抗原表位特异性CTL水平高于其他组(P<0.05).结论:慢性HBV感染患者外周血中存在抗原表位特异性CTL,但特异性CTL的存在并不能代表保护性免疫.认为慢性HBV感染肝炎发作时抗原表位特异性CTL反应增强,抗原表位特异性CTL在肝炎发作过程中具有抗病毒和肝组织损害双重作用,肝组织损害可能比较轻微,严重的肝损害可能是非特异性细胞造成.