HBx突变体特异性抗血清的制备及临床研究

目的探讨HBx突变体特异性抗血清的制备及临床效果。方法通过多肽合成的方法制备HBxd431、HBx-d382缺失型突变体特异性多肽抗原,免疫动物制备相应抗血清。产生的抗体经纯化、酶标后,建立检测HBx-d431、HBx-d382特异性多肽抗原及其抗体的ELISA方法。通过对肝细胞癌患者和非肝细胞癌患者临床标本的检测,研究HBx-d431、HBx-d382缺失型突变体多肽抗原及其抗体的临床意义。结果 ELISA法研制的兔抗体HBx-d431、HBx-d382多克隆抗体均能与相应的抗原发生反应,并随着兔抗血清稀释的增加,A值会逐渐下降,肝细胞癌组HBxAg-w、HBxAg-m、HBxAb-w和HBxAb-m明显高于正常健康组,差异有统计学意义。结论建立的ELISA方法将可用于HBV相关肝细胞癌的早期诊断、HBV携带者及慢性乙肝患者的监测。

罗汉果甜苷V特异性抗血清的制备与应用

目的制备罗汉果甜苷V（MogV）特异性抗血清，建立MogV含量竞争性抑制酶联免疫检测法。方法用罗汉果甜苷V-丁二酸酯一牛血清蛋白（MogV-HS－BSA）结合比约为44：1为免疫抗原制备抗血清，用罗汉果甜苷V-丁二酸酯一人血清蛋白（MogV-HS-HSA）结合比约为64：1为包被抗原，建立MogV含量竞争性抑制酶联免疫检测法。结果包被抗原工作浓度为1gg·mL-1，血清最佳稀释倍数为1：8000，在此工作浓度下，MogV浓度在1×10-4 －1gg·mL－1内回归方程仁－0．158X＋0．298，r=0．9910。结论成功制备了MogV抗血清，MogV浓度在1×10-1 -lgg·mL-1。内对抗血清的OD（405nm）值抑制作用呈良好的线性关系。

小鼠特异性抗体与效应细胞在体外协同杀伤日本血吸虫童虫作用的研究

在体外试验系统中,特异性抗血清或各种效应细胞单一因素与日本血吸虫童虫作用,对童虫一般不出现有意义的杀伤作用。但当两者共同作用于虫体时,则可使粘附各种效应细胞的童虫比率和童虫死亡率显著增高。这种作用在一定范围内随着特异性抗体的浓度、效应细胞与童虫的比率(效一靶比率)和孵育时间的增加而增强。在同样条件下,一般均以巨噬细胞(Mφ)和嗜酸性粒细胞(Eos)的作用较强,中性粒细胞(Neu)作用较差。显微镜下观察可见Mφ和Eos紧密粘附于虫体表面,致虫体表面出观明显损伤。而Neu在虫体粘附一定时间后自由体脱落,童虫结构相对比较完整。

用人血清-唾液-初乳斑痕吸收免疫抗血清制备特异性抗人精液血清

本研究采用人血清-唾液-初乳混合液斑痕吸收抗人精液免疫血清,以消除抗血清的外器官特异性交叉反应。吸收后的抗人精液血清,仅和人精液及附睾和前列腺组织提取液发生反应,和人血清、唾液、初乳、阴道分泌液及尿液等5种人类体液分泌液及22种人体组织浸取液无交叉免疫反应;和8种动物精液也无交叉反应,具有良好的器官及种属特异性。获得的抗血清清亮透明,效价高。血清吸收方法简便易行,成本低,易于普及推广。

大肠杆菌K88ac、K99和987P纤毛抗原的纯化及抗血清的制备

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是新生畜(仔猪、羔羊和犊牛)腹泻的主要病因之一,其致病因子包括纤毛抗原和肠毒素。我们参照国外学者De Graaf和Isaacson等人的方法分别纯化了K88ac、K99和987P三种纤毛抗原并制备出三种高特异性抗血清。纯化用K88菌株C83549(0149:K91,K88ac),K99菌株C83644(0101:K99),987P菌株C83710(020:987P)均由中国兽医药品监察所提供。K88菌用改良Minca培养基,K99菌用Minca培养基,987P用胰酶水解大豆酪蛋白胨肉汤培养基。

乳源性金黄色葡萄球菌肠毒素A的间接ELISA检测方法建立

从乳品中筛选出金黄色葡萄球菌,并对其所产的肠毒素进行分离纯化。制备出金黄色葡萄球菌肠毒素的特异性抗血清,建立金黄色葡萄球菌肠毒素A特异性血清间接ELISA方法。结果表明,最佳抗原包被浓度为10μg/mL,抗体最佳稀释倍数为1︰1 600,抗血清效价达到1︰3 200。通过建立此检测方法可以为乳源金黄色葡萄球菌肠毒素的检验提供依据。