特异性小鼠血清中瘦素放射免疫分析的建立和应用

目的 建立高特异性和高灵敏度的小鼠血清瘦素 (Leptin)放射免疫分析方法 ,用于测定小鼠血清中瘦素水平。方法 用人工重组的小鼠leptin多次免疫兔子获取高效价、高特异的小鼠leptin抗体。用氯氨T法制备1 2 5I标记的leptin ,经Sep hadexG 2 5纯化。抗原抗体反应采用平衡一步法 ,4℃培养 2 4h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原。该法测定范围为 1.1～ 30 0ng mL ,最低检出值为 0 .5ng mL ,批内和批间误差小于 4 .4 %和 6 .7%。结果 用该法测定正常小鼠 2 3例 ,血清leptin为 (39.6 5± 15 .72 )ng mL ,而人leptin放射免疫法为 (1.5 6± 0 .4 5 )ng mL ,具有显著的差异 ,2组数据有中等程度的相关性 (r=0 .6 2 18)。用该法测定正常人样本 30例 ,血清leptin为 (19.4 6± 7.0 9)ng mL ,而人leptin放射免疫法为 (10 .0 8± 5 .2 0 )ng mL ,具有显著差异 ,但不存在明显的相关性 (r =- 0 .0 95 9)。用该法发现烫伤大鼠血清leptin明显下降 (14 .33± 3.5 2 )ng mL与(6 .71± 3.14 )ng mL ,烫伤大鼠切痂后leptin于 96h内恢复正常水平 (12 .0 8± 4 .0 5 )ng mL。结论 该法稳定、简便、特异、灵敏 ,适于检出小鼠和大鼠血清中的leptin水平 。

化学发光免疫分析法和放射免疫法在甲状腺疾病临床检验中的应用敏感性和特异性评价

探讨化学发光免疫分析法在甲状腺疾病临床检验中的应用敏感性和特异性。方法 自我院收诊病患中选取76例疑似甲状腺疾病患者(选取时间为2019年02月~2021年01月)展开回顾性研究,76例患者均接受放射免疫法、化学发光免疫分析法检验,然后,分析化学免疫分析法与放射免疫法对甲状腺疾病的敏感性、特异性。结果 76例疑似甲状腺疾病患者中,阳性48例(其中甲亢26例,甲减22例),阴性28例。化学发光免疫分析法检测结果显示,阳性47例,其中真阳性47例,阴性29例,其中真阴性28例,准确性为98.68%(74/75);放射性免疫法检测结果显示,阳性49例,其中真阳性43例,阴性27例,其中真阴性22例,准确性为85.53%(65/76)。化学发光免疫分析法诊断甲状腺疾病的敏感性(97.92%)、特异性(100.00%)明显高于放射性免疫法诊断(68.75%、78.57%)(P>0.05)。结论 甲状腺疾病诊断中应用化学发光免疫分析法检测诊断敏感性、特异性较高,可降低漏诊,提高准确性,作为单一诊断指标可为甲状腺疾病患者诊疗提供参考价值。

化学发光微粒子免疫分析法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用与评价

目的评价化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)的实验室应用,采用受试者操作特性(ROC)曲线分析应用CMIA检测抗-TP最佳的S/CO的cutoff值,以提高抗-TP检测的灵敏度和特异度。方法收集美国雅培公司I2000化学发光免疫分析仪检测的抗-TP阴性、弱阳性、阳性血清共294份,分别用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)和欧蒙免疫印迹法(WB)进行抗-TP检测,比较TPPA与CMIA的特异性和敏感性,采用SPSS 16.0统计软件对抗-TP S/CO值绘制ROC曲线,得出CMIA在本实验室的S/CO最佳cutoff值。结果以免疫印迹法结果为金标准,CMIA与TPPA的阳性检出率分别为42.1%和42.5%,敏感性为100.0%和99.2%,特异性为88.2%和88.7%,阳性预测值为86.1%和86.7%,阴性预测值为100.0%和99.3%,与WB的总符合率均为93.2%。ROC曲线分析其最佳筛查cutoff值S/CO=3.125时,CMIA的特异性为98.4%,敏感性为97.2%,ROC曲线下面积为0.956,具有很好的诊断价值。结论 CMIA法和TPPA法具有高敏感性和特异性。采用ROC曲线分析得到CMIA S/CO的cutoff值为3.125时,可显著提高实验的特异性。

电化学发光免疫分析法检测梅毒特异性抗体的临床应用及假阳性分析

目的评价电化学发光免疫分析法(ECLIA)在筛查梅毒特异性抗体中的临床应用价值,并分析假阳性产生的原因。方法选取2020年9月至2021年8月在该院就诊的门诊及住院78374例患者标本,均采用ECLIA筛查梅毒特异性抗体,阳性标本和临界标本采用梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行确证,计算ECLIA检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并对假阳性结果进行分析。结果ECLIA筛查梅毒特异性抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00%、99.94%、97.65%、100.00%;当发光比值>20.00时,ECLIA与TPPA的阳性符合率为100.00%。结论ELCIA适合大规模的梅毒特异性抗体筛查试验,可为临床诊断梅毒提供重要血清学诊断依据。

化学发光微粒子免疫分析法对梅毒螺旋体特异性抗体的检测价值探究

目的:研究化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)对梅毒螺旋体特异性抗体的检测,评价其检测效果,探讨其临床适用性。方法:选择2011年5月～2012年5月在我院就诊的门诊和住院260例患者,分别使用梅毒螺旋体胶凝试验(TPPA)法与CMIA法病人血清,观察两种方法测定的阳性率,并以TPPA法为标准,评价CMIA法的敏感性、特异性、阴性预测值及阳性预测值。结果:CMIA法检出率为16.2%,而TPPA法检出率为14.6%,两种方法的阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CMIA法敏感性100%,特异性98.2%,阳性预测值90.5%,阴性预测值100%,CMIA法与TPPA法检测梅毒螺旋体抗体的符合率为98.7%。结论:CMIA具有自动化、检测周期短等特点,可以为梅毒抗体进行实验室批量检测。其与梅毒螺旋体胶凝试验的检出率相当,特异性也较高,可以结合TPPA及临床资料用于梅毒的确诊,在临床长期推广应用。

胰岛素自身抗体的改良放射免疫分析法

目的 :建立胰岛素自身抗体 (IAA)的改良放射免疫分析法 ,并探讨IAA对 1型糖尿病 (T1DM )的诊断价值。方法 :1 2 5I 胰岛素抗原与血清在EP管内混匀 ,旋转孵育 ,用蛋白A 琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。沉淀物经TBST缓冲液洗涤后 ,置于液体闪烁计数仪上计数 ,结果以IAA指数表示。通过与国际标准化实验室及国内商品化IAA放射免疫试剂盒检测结果比较 ,并检测 1 2 0例健康对照和 32例初发T1DM患者IAA水平 ,评价其一致性、灵敏度和特异性 ,以及临床应用价值。结果 :①该方法的批内变异系数 (CV)为 5 .8%～ 8.3% ,批间CV为 7.0 %～1 1 .0 %。 4 1例标本的IAA指数与国际标准化实验室呈显著正相关 (r=0 .783,P <0 .0 1 ) ,结果判断一致率为 1 0 0 %。82例IAA指数呈梯度排列的标本检测结果与国内放射免疫试剂盒一致率为 89% ,9例不符合的标本均为该方法检测为低滴度阳性 (指数在 0 .0 5～ 1 .0 0 )而试剂盒检测阴性 ;②IAA指数的阳性阈值为 0 .0 5 1 (为 1 2 0例健康人的99.5 %百分位点上限 ) ,T1DM患者IAA检出率为 1 8.8% (6 /32 ) ,高于正常对照的 0 .8% (P <0 .0 0 1 )。其中 1 5岁以下病程≤半年的T1DM患者IAA检出率为 2 8.6 % (4 /1 4 ) ,1 5岁以上IAA阳性率为 1 1 .1 % (2 /1 8)。结论

荧光免疫分析法、酶联免疫吸附试验和乳胶增强免疫比浊法检测胃蛋白酶原的敏感度和特异性分析

目的观察分析检测胃蛋白酶原(PG)使用荧光免疫法(TRFIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳胶增强免疫比浊三种检测方法分析其特异性和敏感性。方法使用以上三种检测方式检测129名胃癌患者称之为胃癌组和147名正常患者称之为正常组,对比分析其血清当中的PG亚群PG1和PG2的含有量以及两者之间的比值(PGR)。结果在敏感度上TRFIA为76.79%,ELISA为72.88%,乳胶增强免疫比浊为74.57%,差异无统计学意义(P>0.05)。在特异度上TRFIA为74.15%,ELISA为82.99%,乳胶增强免疫比浊为76.87%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论三种检测方式特异性敏感度差异无意义,无可比性,因此三种检测方式的选择主要看医院已有的设备和检测费用,ELISA成本较低可作为基层医院首要选择,有全自动生化分析仪的规模较大医院可选择乳胶增强免疫比浊方法,而配有先进荧光免疫分析仪的医院可选择TRFIA方式。

总前列腺特异性抗原定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的性能验证

目的对自制的总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,t PSA)定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)进行性能验证,判断自制试剂盒是否满足产品行业标准要求。方法参照产品行业标准要求,对自制试剂盒的准确度、最低检测限、线性、重复性、批间差、稳定性、配对抗体等克分子反应性进行考察。结果自制试剂盒的最低检测限为0.0022 ng/m L,线性相关系数r=0.9998,重复性为2.82%和1.96%,批间差为5.55%,配对抗体等克分子反应小于15%,均符合产品标准的要求。对刚过12个月有效期的产品进行以上项目检测,也符合产品标准要求,说明效期内试剂质量稳定。结论自制试剂盒的各项性能指标符合行业标准要求,在线性、最低检测限和检测范围方面比临床常用的罗氏t PSA电化学发光试剂盒更优,可替代国外昂贵试剂应用于临床检测。

新型冠状病毒中和抗体与特异性抗体检测结果一致性分析

目的探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体与特异性IgM、IgG抗体的一致性,为疫苗接种人群特异性抗体检测结果的临床解读提供依据。方法选取排除SARS-CoV-2感染的健康医务人员148名,其中127名接种过SARS-CoV-2疫苗(按样本采集日期与第2剂疫苗接种日期的时间间隔分为14~30 d组、31~60 d组、61~90 d组、91~120 d组、121~150 d组、>150 d组),21名未接种SARS-CoV-2疫苗。采用胶体金免疫层析法(LFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SARS-CoV-2中和抗体,采用磁微粒化学发光免疫分析法检测特异性IgM、IgG抗体,分析3种方法检测结果的一致性。结果14~30 d组ELISA中和抗体、LFIA中和抗体、特异性IgG抗体的阳性率均为100.00%,特异性IgM抗体阳性率为27.27%。随着疫苗接种时间的延长,3种方法的抗体阳性率均逐渐下降。31~120 d各组特异性IgG抗体阳性率均最高,121~150 d组和>150 d组ELISA中和抗体阳性率最高。ELISA中和抗体检测结果与LFIA的总符合率为85.14%,一致性一般(Kappa=0.698);与特异性IgM抗体的总符合率为60.14%,一致性较差(Kappa=0.144);与特异性IgG抗体的总符合率为82.43%,一致性一般(Kappa=0.649)。特异性IgG抗体与LFIA中和抗体检测结果的总符合率为83.78%,一致性一般(Kappa=0.677)。结论磁微粒化学发光免疫分析法特异性IgG抗体检测结果与LFIA、ELISA中和抗体检测结果的符合率>80%,但一致性一般,需谨慎解读特异性IgG抗体阳性结果。

人血清中总前列腺特异性抗原化学发光免疫分析法的建立

目的建立一种定量分析人血清中总前列腺特异性抗原（t—PSA）的化学发光免疫分析方法。方法采用生物素和碱性磷酸酶分别标记捕获抗体与检测抗体，与样本中的抗原形成免疫复合物，然后通过链霉亲和素与生物素的反应被链霉亲和素标记的磁微粒捕获，利用碱性磷酸酶与发光底物的反应建立了双单抗夹心法检测人血清中t—PSA的化学发光免疫分析方法。结果标准品对WHO96／670国际标准品进行溯源，同时检测血清样本，线性回归方程为y=0．9434X-0．1605，相关系数r=0．99。选择具有等摩尔分子反应性的单抗，对不同存在形式的PSA检测偏差在士3％以内。病人血清样本的测试结果与雅培architecti2000化学发光试剂盒检测结果显著相关，相关系数r=0．989。结论该方法具有较高的灵敏度和重复性，检测结果准确，提高了国产同类试剂的竞争力，同时比同类进口试剂成本低，适于临床检测和科研应用。

放射免疫分析法在体育中的应用

放射免疫分析法(Radioim mulloassag简称RIA)是1960年首先由YaIou和Berson创立的一种体外超微量分析方法。它是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术与高度特异性的免疫化学技术相结合而建立起来的分析方法,几乎一切具有生物活性的物质都可用这种方法进行测定。由于它内在的特点,具有很大的潜在力和生命力,因此。

甲状腺激素自身抗体(抗T_3、T_4)放射免疫分析

目的 :本实验主要建立内源性甲状腺激素自身抗体 (抗T3 、T4)放射免疫分析的检测方法。方法 :用12 5I标记T3 、T4衍生物作为示踪剂 ,血清样本与T3 、T4衍生物 (12 5IT3 、T4衍生物 )在室温 16h孵育。用抗人IgG二抗分离抗体抗原复合物 ,测定放射性活度。结果 :12 5I标记T3 、T4衍生物与人血清T3 、T4自身抗体特异性结合。健康人群中甲状腺激素自身抗体阳性检出率为 1 0 7% ;甲状腺功能异常组甲状腺激素自身抗体阳性检出率为 14 4 % ;甲状腺功能亢进组 13 5 % ;甲状腺功能减退组 15 2 %。甲状腺激素自身抗体阳性血清标本经加入非标记T3 或T4,血清中T3 或T4自身抗体可被中和。T3 或T4自身抗体滴度较原滴度明显下降 (P <0 0 5 ) ,用PEG沉淀法去除血清中免疫球蛋白 ,高水平的FT3 、FT4均明显下降 (P <0 0 5 )。结论 :本文结果提示 ,正常人群中甲状腺自身抗体阳性的发生率较低 ,甲状腺功能异常患者中甲状腺激素自身抗体阳性检出率达14 4 %。内源性甲状腺激素自身抗体对FT3 、FT4的测定存在干扰 ,结果常与临床表现不一致。经PEG将免疫球蛋白去除后 ,重新评估了血清中FT3 、FT4的含量 ,其结果与TSH趋于一致。

不同稀释介质对化学发光免疫法检测血清游离前列腺特异性抗原结果的评估

目的 评估不同稀释介质、稀释倍数在罗氏和新产业两仪器上稀释测定游离前列腺特异性抗原(free prostate specific antigen,FPSA)的可行性。方法 选取2020年7~12月在南通市肿瘤医院检测血清FPSA浓度在40~50ng/ml的样本60例为研究对象,运用化学发光免疫法稀释验证。根据罗氏仪器的检测上限,选取30例FPSA浓度为40~50ng/ml的血清样本,在罗氏仪器上分别用罗氏稀释液、蒸馏水、生理盐水和低值混合血清进行2,4和8倍稀释验证。根据新产业仪器的检测上限选取30例FPSA浓度为40~50ng/ml的血清样本,在新产业仪器上分别用蒸馏水、生理盐水和低值混合血清进行2,4和8倍稀释验证。对样本使用配对t检验,比较不同稀释介质和稀释倍数稀释后FPSA测定值与原倍值的差异,并计算两者的偏差。结果 FPSA在罗氏仪器上使用罗氏稀释液、蒸馏水、生理盐水和低值混合血清按不同比例稀释后测定,测定值的偏倚分别为-33.92%~63.51%,-36.83%~133.0%,-44.82%~116.2%和-33.0%~74.2%,其中罗氏稀释液和低值混合血清2倍稀释后结果与原倍值比较差异无统计学意义(t=0.387,0.707,均P>0.05),其余稀释后测定值与原倍值差异均有统计学意义(罗氏稀释液4和8倍,t=2.33,3.364;蒸馏水2,4和8倍,t=2.072,3.898,6.619;生理盐水2,4和8倍,t=2.052,3.078,6.507;低值混合血清4和8倍,t=3.584,6.229,均P<0.05)。FPSA在新产业仪器上使用蒸馏水、生理盐水和低值混合血清按不同比例稀释后测定,测定值偏倚分别为-32.14%~112.07%,-30.89%~95.22%和-31.85%~112.7%,稀释后测定值与原倍值差异均有统计学意义(蒸馏水2,4和8倍,t=2.169,2.706,3.996;生理盐水2,4和8倍,t=2.149,2.617,3.757;低值混合血清2,4和8倍,t=2.058,2.932,4.639,均P<0.05)。结论 对于超出检测上限的FPSA,罗氏仪器可用罗氏稀释液和低值混合血清进行2倍稀释,而新产业仪器不宜进行稀释检测。

放射免疫法快速检测鸡肉中青霉素类药物残留

主要探讨应用Charm Ⅱ放射免疫分析方法检测鸡肉中青霉素类药物残留。确定制样和控制点设定的方法,评价了免疫反应体系的灵敏度和特异性,验证了青霉素类药物最大残留限量的检测稳定性。90min可出检测结果。

放射免疫分析在遗传病诊断和筛查中的应用

放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)具有灵敏度高、特异性强等特点。近年来,随着计算机技术在该领域的应用,RIA数据处理的准确性和速度均得到大大提高。使该技术兼有简便、快速等优点,从而使RIA技术不仅可用于临床医学诊断,还可用于大面积的疾病筛查。本文就RIA在遗传病的诊断和筛查中的应用予以综述。

（续）四、放射免疫分析（RA）

RIA兼有同位素分析和抗原抗体反应两大特点的超微量技术。具有灵敏度高(比化学法高1万-100万倍)，特异性强，精确性好，标本及试剂用量少，应用范围广(能分析300多种物质)，便于标准化、规格化、自动化等优点。多数检测方法比较简单，对人体基本无害。

电化学发光法用于献血者梅毒特异性抗体酶联免疫试验反应性样本补充试验的效果评价

目的探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)用于梅毒特异性抗体酶联免疫试验(TP-ELISA)反应性样本后续补充试验的可行性。方法选取无偿献血者样本136例,其中TP-ELISA双试剂反应性样本55例,单试剂反应性样本41例,双试剂无反应性样本40例,分别用ECLIA和明胶螺旋体凝集试验(TPPA)及免疫印迹法(WB)检测,以WB法为金标准,比较ECLIA和TPPA法的灵敏度和特异性差异。结果以WB法为金标准,136份样本中ECLIA法敏感度为100.00%,特异性为97.53%,一致率为98.53%;TPPA法敏感度为98.18%,特异性为96.30%,一致率为97.79%;ECLIA和TPPA两种方法 Youden指数分别为0.975 3和0.944 8;ECLIA和TPPA检测一致率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ECLIA具有较高检测敏感度和特异度,且操作方便,自动化程度高,可作为TP-ELISA反应性样本的后续补充试验。

放射免疫分析质量控制的临床探讨

放射免疫分析(RIA),是一类以放射性核素标记的配体为示踪剂,以结合反应为基础,在体外完成的微量生物活性物质检测技术的总称。近年来在核医学领域中发展很快,因其具有灵敏度高,特异性强而应用广泛,具无损伤,能够进行超微量测定和对疾病进行动态观察等特点,目前已成为临床诊断和医学科研工作中一项十分重要的分析手段,迄今已可用本技术测定体内各种微量生物活性物质如激素,蛋白质、抗体、免疫球蛋白、维生素和药物达300多种。

牙周炎龈沟液铜蓝蛋白放射免疫分析的临床价值

本文报道了51例牙周炎和130例正常对照龈沟液铜蓝蛋白(CP)放免检测的观察和研究结果。牙周炎时CP非常显著增高,CP值快速型(RPP)>成人型(AP)青少年型(JP),但无统计差异,其临床敏感性为76.47％、特异性96.67％、阳性似然比22.964、阴性似然比0.243、Kappa值0.680、选择指数0.7392。

荨麻疹患者血清特异性IgE的测定与分析

目的 :探讨由 Ig E介导的 型变态反应在荨麻疹发病中的意义及考察 MAST- CAL检测法的临床应用价值。方法 :采用 MAST- CAL法 (多种抗原光化学分析法 )检测了 180例荨麻疹患者血清特异性 Ig E水平 ,分析各种致敏原在荨麻疹发病中的意义。结果 :180例病人中 ,吸入组检出阳性 62例 ,阳性率 34 .4 4 % ,常见的吸入过敏原为粉尘螨、屋尘螨、蟑螂 ;食物组检出阳性为 53例 ,阳性率为 2 9.4 4 % ,最常见的食物过敏原为黄豆、吞拿鱼。结论 :由 Ig E介导的 型变态反应仅占荨麻疹病因的一部分 ,南方地区常见的吸入过敏原为粉尘螨及屋尘螨。 MAST- CAL检测法在检测荨麻疹患者血清特异性 Ig E水平上可提供可靠的实验结果。