结核分枝杆菌Rv0440 CTL表位肽的免疫原性研究

目的体外鉴定结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv0440蛋白序列中表位肽362-370aa和369-377aa的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性,为基于表位的结核疫苗研究提供实验依据。方法根据T2细胞HLA-A*0201分子与多肽结合力分析实验结果,选取结核分枝杆菌Rv0440蛋白质氨基酸序列中对HLA-A*0201分子高亲合力的Rv0440-1(362-370aa,KLQERLAKL)和Rv0440-2(369-377aa,KLAGGVAVI)作为候选表位肽。用候选表位肽刺激PPD(+++)健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)检测细胞分泌IFN-γ的水平。用候选表位肽诱导特异性CTL细胞,检测特异性CTL细胞对负载表位肽的T2细胞的杀伤活性,观察Rv0440-1和Rv0440-2的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性。结果 ELISPOT实验结果显示,表位肽Rv0440-1能够明显诱导HLA-A*0201(+)、PPD(+++)健康志愿者PBMC分泌IFN-γ(P<0.05);且表位肽Rv0440-1负载DC诱导的CTL在效靶比为10∶1时对负载相应表位肽的T2细胞的特异性杀伤活性高于对照组(P<0.05);与对照组相比,表位肽Rv0440-2没有诱导能力。结论表位肽Rv0440-1(362-370aa,KLQERLAKL)具有良好的免疫原性,是有效的结核分枝杆菌的HLA-A*0201限制性CTL表位。

携带结核杆菌Ag85B靶细胞的构建、鉴定及应用

目的构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞以便评定结核疫苗的特异性细胞毒(CTL)作用。方法将携带有Ag85B基因的重组质粒pTB30s转入小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),用RT-PCR及免疫组化染色法鉴定阳性克隆细胞胞内的Ag85B基因转录和蛋白表达水平;同时,用接种过BCG,pTB30s或生理盐水(NS)小鼠脾脏单个核细胞作为效应细胞,G418高压筛选的阳性克隆细胞为靶细胞,用MTT法检测各组CTL杀伤活性。结果RT-PCR以及免疫组化结果显示,阳性细胞能稳定表达Ag85B。CTL杀伤实验:BCG、pTB30s及NS对照组杀伤率分别为28.14%、45.18%和5.13%。结论含有Ag85B靶细胞构建成功及应用,为研究结核疫苗的免疫效果提供了较好的研究手段。

“生物导弹”定点消灭癌细胞 细胞免疫治疗给肿瘤患者带来希望

近年来,随着生物医学科技的飞速发展,细胞免疫治疗被越来越广泛应用到肿瘤治疗中,被视为手术、放疗、化疗后的第四种肿瘤治疗手段。今年4月29日,美国食品和药物管理局(FDA)批准了第一支细胞免疫治疗疫苗——前列腺癌疫苗,而307医院也在肿瘤细胞免疫治疗科研上取得成果。肿瘤细胞免疫治疗通过人为干预。