应用特异性核酸探针杂交分析法进行献血员HLA分型的初步报告

目的 探讨利用特异性核酸探针杂交分析法检测HLA等位基因的可行性。方法 10例西南某地献血员 ,提取DNA后经PCR扩增 ,采用酶联探针免疫杂交分析法检测HLAⅠ和HLAⅡ等位基因。结果 10例标本经检测HLAⅠ和HLAⅡ等位基因 ,表现为A 0 2、A 2 4、A 11、B 3 5、B 15、B 5 1、B 5 2、B 40、DRB1 110 1、DRB1 0 90 1、DQB1 0 3 0 3、DQB1 0 3 0 1等类型 ,为常见蒙古人种类型。结论 利用特异性核酸探针杂交分析法可方便快速地对HLA分型 ,值得推广使用。

鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒的研制

用特定引物通过PCR合成了经地高辛标记的鸡致病性外源性及内源性禽白血病病毒特异性核酸探针,通过交叉斑点分子杂交,这些探针将可用于检测病料样品中致病性外源性禽白血病毒特异性核酸的存在。利用此试剂盒,对从病料组织样品中提取的基因组DNA作交叉斑点分子杂交或对提取的DNA用相应引物扩增后的PCR产物作交叉斑点分子杂交,可在24～36 h内完成检测并报告结果。

聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针反向杂交法在HLA-DRB_1分型中的应用

目的:探讨聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针(polymerasechainreaction-sequencespe-cificoligonucleotideprobes,PCR-SSOP)反向杂交法应用于人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)-DRB1配型的可行性。方法:随机选取25例已行聚合酶链反应顺序特异性引物(polymerasechainreac-tion-sequencespecificprimers,PCR-SSP)法HLA-DRB1配型的肾移植受者的血标本,采用PCR-SSOP反向杂交法再次配型,并与PCR-SSP法的结果比较。结果:两法的一致性达92%。2例不一致的患者经再次PCR-SSOP反向杂交法配型后,其中1例与PCR-SSP结果一致,PCR-SSOP反向杂交法的平均操作时间为4小时30分。结论:PCR-SSOP反向杂交法是一种能以中等分辨度进行等位基因分型的方法,操作较简单,结果解读客观,适用于临床肾移植配型。

PCR-核酸探针斑点杂交法检测痕量白斑综合征病毒（WSSV）

设计了2对引物用于检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)，外引物用于PCR扩增，内引物用于合成探针进行斑点杂交。结果表明，外引物PCR-电泳的检出极限为1pg WSSVDNA；PCR产物经内探针斑点杂交，可检出10fg的WSSV DNA；单纯的内探针斑点杂交只能检测出1ng以上的WSSV DNA。PCR-斑点杂交的检测灵敏度比PCR-电泳高2个数量级，比单纯斑点杂交高5个数量级。Southern杂交表明，PCR-斑点杂交检测WSSV特异可靠。该方法可用于痕量WSSV的检测。

金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用

目的 建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法 将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果 核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论 建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。

人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用

采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberulosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段,将其克隆进pUC19载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PCR检测技术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PCR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。

基于镉特异性功能化核酸适配体测定痕量镉的共振光散射新方法

镉特异性功能化核酸适配体(FA_(Cd))在无镉体系中能阻碍金纳米(GNPs)与罗丹明6G(Rh6G)聚集,体系共振光散射强度较低。当体系中存在镉离子时,FACd与之特异性结合,从RNA位点处断裂产生适配体片段(FAF),FAF与GNPs和Rh6G形成GNPs-FAF-Rh6G聚合物,共振光散射强度大幅增加,共振光散射强度值(I_(RLS))与镉的浓度(cCd^(2+))在0.28~11.2 ng/mL范围内呈现良好线性关系,检出限为0.04 ng/mL,相对标准偏差≤5%,加标回收率为96.4%~101.4%。

PCR法标记探针在核酸杂交中的应用

目的 建立一种简便、高效的核酸探针标记方法。方法 以扩增小鼠生精细胞凋亡相关基因时使用的引物 ,基因重组扩增后阳性克隆质粒DNA为模板 ,采用PCR法标记同位素 [α 3 2 P]dCTP。结果 制成的探针比放射活性大于 1× 10 9cpm/ml,电泳仅见一条条带 ;northernblot杂交显示阳性条带清晰 ,背景噪音低。结论 PCR法标记探针简便、特异。

用Y染色体特异性探针作斑点印迹法检测人血痕的性别

血痕的性别检查是法医学检案中一个重要内容。过去常用的方法是检查血痕里残存有核细胞中的x和y小体，也有试图测定血痕中性激素(主要是睾丸酮)含量的办法来达到鉴定性别的目的。但都因方法比较繁琐且结果不大可靠，或男女性别判断的界线不够清楚，或受澎响的因素太多而不能令人满意。

沙门氏菌属特异性核酸探针的研制及应用试验

首先提取鼠伤寒沙门氏菌菌株23566的染色体DNA,并用限制酶BamHI或HindⅢ进行酶切消化,将酶切片段连接到质粒载体pBR325的相应位点中,然后转化大肠杆菌宿主细胞HB101,我们通过这种随机克隆的方法建立了鼠伤寒沙门氏菌染色体的部分基因文库。其次,经广泛的杂交试验表明,重组质粒pLS2和pLS3中的插入片段(大小分别为8.0kb和3.4kb)

应用生物素核酸探针斑点杂交法检测人肠道病毒

应用生物素核酸探针斑点杂交法检测人肠道病毒赵贵明，李兵（中国商检研究所）肠道病毒越来越引起人们的重视。它以食物和水为媒介，经口感染，直接威胁人们的身体健康，目前已经从肉、禽、蛋、牛奶以及海产品中分离出肠道病毒［１］。肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇...

ADV特异性糖蛋白GP50基因片段的核酸探针

新疆军区后勤部卫生防疫大队生物医学研究室进行了用光敏生物素标记核酸探针检测伪狂犬病的研究,他们利用分子生物学方法,将伪狂犬病毒(ADV)的特异性糖蛋白GP50基因片段制备成光敏生物素探针,经过杂交试验,灵敏度高达46.8Pg水平。该探针与HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ及CMV杂交阴性,证明特异性强。通过检测感染乳猪及屠宰场随机样品,证明此探针能有效地用于临床检测AD,换言之。用ADV

应用核酸斑点杂交法检测鹅细小病毒(GPV)

利用鹅细小病毒 (GPV)核酸探针 ,设计并建立了核酸斑点杂交法 ,用以检测 GPV核酸。该方法特异性与敏感性均较好 ,其敏感度可达 3pg。应用该方法对 4例病变典型的小鹅瘟患鹅组织器官进行检测 ,结果表明 ,患鹅脏器中 ,小肠、心、肝、胰、脾组织含毒量较高 ,其中小肠组织含毒量最高 ,而脑组织中含毒量较低。应用琼脂扩散试验验证了核酸斑点杂交法的检测结果。

牙龈卟啉菌特异性克隆探针的筛选

目的 从牙龈卟啉菌 47A - 1的基因文库中筛选出特异性片段 ,制备成特异性克隆探针 ,方法将牙龈卟啉菌 47A- 1基因文库中的重组质粒大量扩增和纯化 ,采用地高辛标记法制备成探针 ,与口腔中14种常见细菌 DNA进行杂交鉴定 ,检测其特异性 ,从中筛选出对牙龈卟啉菌具有特异性的克隆探针。结果 重组质粒 p ZJ1与牙龈卟啉菌 47A - 1杂交 ,而与其它细菌 DNA均不杂交 ,包括牙龈卟啉菌ATCC332 77和 W83。结论 重组质粒 p ZJ1可制备成高特异性克隆探针。

生物素标记核酸探针染色体原位杂交及其临床应用

采用随机引物法使生物素标记DNA探针PY3·4，对正常男性、女性及两例47，XYY患儿的染色体进行原位杂交，免疫荧光检测系统检测，结果显示PY3·4有高度特异性，可作为Y染色体的标记探针。此方法具有稳定、安全、价廉、特异性强，降低本底等优点，可取代同位素标记的方法用于染色体上基因定位，检出染色体畸变以及癌变机理等研究。

核酸探针杂交技术及其在口腔厌氧菌检测中的应用

口腔厌氧菌是导致牙周尖、根尖周炎等口腔感染性疾病的主要病原菌,其种类众多。传统的病原微生物学检测方法一般依据细菌的形态、生理生化特征及免疫血清学分型,不但费时费力,而且准确性差。随着分子生物学的不断发展,核梭探针杂交技术应用于口腔病原菌的检测和研究,从分子水平鉴定细菌,具有快速、简便、特异性强、敏感度高等优点。本文就核酸探针杂交技术原理,探针种类及其在口腔厌氧菌研究中应用的新进展作一综述。 一、原理 核酸探针杂交技术是根据两条单链DNA(或DNA与RNA)中互补碱基序列能专一配对的原理进行的。在一定条件下,双链DNA变性成单链。

一种增强MLPA检测SNP位点的特异性方法

目的:在传统多重连接探针扩增(MLPA)技术基础上建立一种更为特异的检测单核苷酸多态性(SNP)位点的方法。方法:设计针对Kras基因216 G-C SNP位点的MLPA探针,使用不同方法优化MLPA实验,观察其对SNP位点检测时的影响。结果:直接用锁核酸(LNA)修饰MLPA探针的SNP位点或添加阻滞探针均可显著提高SNP检测时的特异性,3个LNA修饰的阻滞探针能最好地保证检测的灵敏度和特异性。结论:成功地建立了一种增强MLPA检测SNP位点的特异性方法。

同位素标记核酸探针技术在法医学中的应用

核酸分子杂交法是当今分子生物学研究中应用最广泛的一项技术。其基本原理是利用放射性同位素标记的核酸探针,与固定在硝酸纤维素膜或尼龙膜上的单链核酸中的同源序列进行杂交。通过放射自显影,即可在X 光片上看到特定的核酸片段,利用该法对DNA

粪污染水样中F-特异性RNA噬菌体不同基因型检测方法的比较

F-特异性RNA噬菌体是一种寄生于细菌体内的病毒,它普遍存在于人和动物粪便及其两者污染的水源中,因此可作为污染源的检测指标。一般认为,人粪比动物粪便污染的危害性更大,所以准确鉴别水样中污染粪便的来源十分重要。已知F-RNA噬菌体是通过F-质粒编码的纤毛感染细菌的。

PCR和核酸探针检测猪源沙门氏菌四环素耐药基因tetC的研究

对沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测,结果表明,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%,对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验结果阳性符合率75%,具有较高的检出率。用光生物素对PCR产物进行标记,制备核酸探针,采用菌落原位杂交的方法对沙门氏菌进行检测,结果表明13株阳性、3株阴性,杂交结果与PCR结果阳性符合率为93.75%,具有较高的特异性。通过条件的优化,建立的四环素耐药基因tetC的PCR和核酸探针检测技术,为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了有效的途径。