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谷氨酰内切酶的催化特性研究与应用进展 被引量:2
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作者 李礼 姜旭淦 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2012年第1期83-85,89,共4页
谷氨酰内切酶(glutamyl endoproteinase,EC3.4.21.19)属于丝氨酸蛋白酶,具有严格的底物特异性,能水解多肽链中谷氨酸和(或)天冬氨酸残基的α羧基形成的肽键[1],主要来自于金黄色葡萄球菌V8菌株,故又称为金黄色葡萄球菌V8蛋白酶(Sta... 谷氨酰内切酶(glutamyl endoproteinase,EC3.4.21.19)属于丝氨酸蛋白酶,具有严格的底物特异性,能水解多肽链中谷氨酸和(或)天冬氨酸残基的α羧基形成的肽键[1],主要来自于金黄色葡萄球菌V8菌株,故又称为金黄色葡萄球菌V8蛋白酶(Staphylococcus aureusV8 protease)、 展开更多
关键词 谷氨酰内切酶 水解异性 糖化血红蛋白
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黄曲霉产β-1,4-木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学特性 被引量:4
2
作者 陈瑶瑶 陈洲 +3 位作者 刘璐 刘杨柳 李思霆 贾英民 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期131-137,共7页
研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶... 研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶最佳培养基为:麸皮3.5%、磷酸氢二铵3.0%、吐温-60 1.0%、NaCl 0.5%、MgSO_4·7H_2O 0.05%和KH_2PO_4 0.075%;黄曲霉在35℃下培养5 d达到最高酶活力115.08 U/mL,为未优化时的9.4倍。该菌能分泌两种β-1,4-木聚糖酶,分子量约为20.1和31.0 kDa,均不同于已有报道。粗酶的最适pH和最适温度分别为MOPS 7.5和55℃,在pH5.5~9.0及30~50℃范围内能保持酶活力的稳定。该酶不仅能水解榉木木聚糖产生低聚木糖,还能微弱降解大麦葡聚糖,有助于它在木质纤维素降解领域中的应用。 展开更多
关键词 黄曲霉 β-1 4-木聚糖酶 发酵条件 酶学 水解异性
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长庆油气田压裂用生物酶破胶技术及其应用 被引量:31
3
作者 管保山 刘静 +3 位作者 周晓群 薛小佳 张燕明 谢旋 《油田化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期126-129,共4页
利用核磁共振技术研究了用APS破胶的硼交联瓜尔胶压裂液对长庆低渗岩心的伤害机理,认为主要伤害因素是压裂液的黏滞力和大分子聚合物。指出了长庆油气田使用APS破胶的不足之处。基于引进产品开发了酶破胶剂GLZ-1,该剂含β-1,4-和α-1... 利用核磁共振技术研究了用APS破胶的硼交联瓜尔胶压裂液对长庆低渗岩心的伤害机理,认为主要伤害因素是压裂液的黏滞力和大分子聚合物。指出了长庆油气田使用APS破胶的不足之处。基于引进产品开发了酶破胶剂GLZ-1,该剂含β-1,4-和α-1,6-糖苷键特异水解酶,可将半乳甘露聚糖最终分解为单糖和二糖。根据酶活力测定,该剂适用温度范围为40-90℃,适用pH范围为6~10,盐度在2%~10%范围内对酶活力基本上无影响,该剂与压裂液添加剂配伍。与APS相比,破胶液残渣含量较低,破胶液滤液中总含糖量较高且随破胶时间的升幅较大,4、24、48h破胶液中聚糖相对分子质量(M)主要分布区域分别为1300~5500、1200-4800、250~3800,而用APS破胶时,破胶液中检测不到M〈5000的聚糖分子。GLZ-1破胶液对岩心渗透率的伤害小于20%,而APS破胶液的伤害为27.7%~30.2%。在鄂尔多斯盆地苏力格气田8口井、西峰油田20口井压裂中使用GLZ-1破胶,油井返排液黏度〈2mPa·s,返排率〉65%,气田一次喷通,返排液黏度〈3mPa·s,平均返排率90.2%。图1表6参3。 展开更多
关键词 硼/瓜尔胶压裂液 酶破胶剂 半乳甘露聚糖 糖苷键 特异性水解 压裂液破胶 水力压裂 鄂尔多斯盆地
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去泛素化酶与伴侣分子互作的病理生理及研究进展 被引量:2
4
作者 程中玉 谢嘉豪 +2 位作者 蒋耀萱 陈阳 赵文 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2019年第3期167-174,共8页
去泛素化酶(DUBs)通过逆转泛素激活酶(E1)-泛素结合酶(E2)-泛素连接酶(E3)介导的泛素化过程,参与包括DNA复制、DNA损伤修复、炎症、贫血、凋亡、内吞等机体的生理病理过程。USP52,USP25,USP19属DUBs中的泛素特异性水解酶家族(USPs),与... 去泛素化酶(DUBs)通过逆转泛素激活酶(E1)-泛素结合酶(E2)-泛素连接酶(E3)介导的泛素化过程,参与包括DNA复制、DNA损伤修复、炎症、贫血、凋亡、内吞等机体的生理病理过程。USP52,USP25,USP19属DUBs中的泛素特异性水解酶家族(USPs),与不同的伴侣分子相关联,USP52可去泛素化伴侣分子ASF1A,促进组蛋白H3-H4二聚体入核和DNA复制、修复顺利进行,两者高表达可使肿瘤的增殖能力和DNA损伤耐受性增强。USP52(别名PAN2)又可与PAN3形成复合物参与mRNA的代谢。牛痘相关激酶(VRK2)调节USP25的活性,影响后者对伴侣分子TRiC的稳定性,进而影响蛋白错误折叠。USP19(b亚型)和Hsp90,CHIP(E3连接酶)形成复合物调节错误折叠蛋白的命运。本文系统综述了去泛素化酶(DUBs)家族相关成员及其通过与伴侣分子相互作用在肿瘤等疾病的发生发展中所起的作用及其相关研究进展。 展开更多
关键词 泛素特异性水解 伴侣分子 肿瘤
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去泛素化酶USP33通过下调SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭和转移 被引量:6
5
作者 王玉环 张淑华 +2 位作者 穆淑坤 张柏深 马树东 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期956-961,共6页
目的探讨去泛素化酶USP33参与调节SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭转移的机制。方法采用q PCR、免疫组化的方法检查USP33在肺腺癌中的表达,利用A549、SPC-A-1细胞,以沉默USP33后作为沉默组,空白组作为对照,72 h后用q PCR与Western ... 目的探讨去泛素化酶USP33参与调节SLIT2/ROBO1信号通路抑制肺腺癌的侵袭转移的机制。方法采用q PCR、免疫组化的方法检查USP33在肺腺癌中的表达,利用A549、SPC-A-1细胞,以沉默USP33后作为沉默组,空白组作为对照,72 h后用q PCR与Western blot检测USP33的沉默效果,利用划痕实验、细胞迁移和侵袭基质胶法检测USP33沉默后对细胞侵袭转移的影响,利用Western blot检测USP33的沉默后SLIT2和ROBO1表达,IL6刺激后USP33的表达。结果 q PCR、免疫组化显示与肺腺癌癌组织相比,癌旁组织USP33表达量明显增加(P<0.05);与空白组相比,qPCR、Western blot结果显示沉默组USP33的表达量明显下降(P<0.05);划痕实验,Transwell迁移实验,Boyden侵袭实验提示USP33沉默后细胞迁移、侵袭转移率明显增加(P<0.05);抑制USP33后,SLIT2和ROBO1表达均下调;IL6刺激使USP33的表达增加(P<0.05)。结论 USP33抑制A549、SPC-A-1细胞迁移、侵袭转移,其侵袭转移的机制可能与炎症因子IL6、SLIT2/ROBO1信号通路存在交叉作用。 展开更多
关键词 肺腺癌 泛素异性蛋白水解酶33 SLIT2/ROBO1 白介素6
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脓毒症所致脑功能障碍患者血清caspase-1、NLRP3变化及临床意义 被引量:4
6
作者 曾礼 吴小波 +4 位作者 张轶行 廖鹏 田劲 余政 邓超 《疑难病杂志》 CAS 2022年第3期267-271,共5页
目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患... 目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。 展开更多
关键词 脓毒症 脑功能障碍 半胱氨酸天冬氨酸异性蛋白水解酶-1 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3
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熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织Cyt-C及Caspase-3基因表达的影响 被引量:11
7
作者 梁颖 李冀 +3 位作者 郭盛磊 李大然 徐放 蔡文辉 《中医药信息》 2017年第3期24-27,共4页
目的:探讨熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)及天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinases,Caspase-3)基因表达的影响。方法:采用Real-time PCR法检测肿瘤组织中Cyt-C m ... 目的:探讨熟地黄多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)及天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinases,Caspase-3)基因表达的影响。方法:采用Real-time PCR法检测肿瘤组织中Cyt-C m RNA及Caspase-3 m RNA的表达情况,采用Western blot法检测Cyt-C及Caspase-3蛋白质的表达情况。结果:熟地黄多糖低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组和联合用药组肿瘤组织中Cyt-C和Caspase-3 m RNA的表达量分别是模型对照组的0.46、0.76;4.82、1.26;0.43、0.60;13.91、4.65;20.17、9.23倍。Cyt-C和Caspase-3蛋白质的表达量分别是模型对照组的0.31、0.90;1.82、1.46;0.62、0.87;2.60、1.54;2.80、1.60倍。结论:熟地黄多糖能促进肿瘤组织中Cyt-C和Caspase-3基因的表达。 展开更多
关键词 熟地黄多糖 细胞色素C 天冬氨酸异性的半胱氨酸蛋白水解
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热疗通过提高活性caspase-3的表达促进食管癌EC109细胞凋亡 被引量:3
8
作者 王希方 秦思达 +4 位作者 杜宁 许崇文 李硕 刘玉刚 任宏 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第11期2236-2239,共4页
目的:探讨不同温度热疗诱导食管癌EC109细胞的生长抑制、细胞凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白表达变化的关系。方法:采用PCR仪精确控制温度,对食管癌EC109细胞行37℃(对照),43℃,45℃,47℃热疗处理,四甲... 目的:探讨不同温度热疗诱导食管癌EC109细胞的生长抑制、细胞凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白表达变化的关系。方法:采用PCR仪精确控制温度,对食管癌EC109细胞行37℃(对照),43℃,45℃,47℃热疗处理,四甲基偶氮唑蓝(Tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞生长抑制率,碘化丙啶(Propidium iodide,PI)/磷脂结合蛋白V(Annexin V)双染流式细胞仪测定细胞凋亡率,蛋白印迹(Western bolt)法检测caspase-3蛋白表达。结果:食管癌细胞在37℃,43℃,45℃处理下,细胞生长抑制率随温度升高而增多,并有显著性差异,43℃细胞凋亡率达到最高,三者差异显著。45℃和47℃生长抑制及凋亡率均无明显差异。总-caspase-3(pro-caspase-3)表达随温度升高而增多,而活性csapase-3(actived-caspase-3)在43℃表达最多。结论:热疗通过提高活性caspase-3表达诱导食管癌EC109细胞凋亡,在43℃凋亡率达到最高。 展开更多
关键词 热疗 食管癌 EC109细胞 凋亡 天冬氨酸异性半胱氨酸蛋白水解酶-3
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采用高效液相色谱法测定萘敏维滴眼液中玻璃酸钠的含量
9
作者 解钰 许东辉 刘建祯 《山西医科大学学报》 CAS 2021年第6期775-779,共5页
目的采用高效液相色谱法测定萘敏维滴眼液中玻璃酸钠的含量。方法用玻璃酸酶(来源于Streptococcus zooepi-demicus)特异性水解玻璃酸钠生成不饱和双糖,反应体系为0.3 mol/L的醋酸钠溶液(pH 6.0),37℃水浴1 h,酶解液用流动相稀释后进样... 目的采用高效液相色谱法测定萘敏维滴眼液中玻璃酸钠的含量。方法用玻璃酸酶(来源于Streptococcus zooepi-demicus)特异性水解玻璃酸钠生成不饱和双糖,反应体系为0.3 mol/L的醋酸钠溶液(pH 6.0),37℃水浴1 h,酶解液用流动相稀释后进样。色谱柱为Dikma Platisil NH 2(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为0.4 mol/L磷酸二氢钠溶液;检测波长为232 nm。结果线性方程为Y=21020ρ+13.432,线性范围0.005-0.100 mg/ml(n=5,r=0.9991),精密度、重复性良好,平均回收率为99.0%,RSD为0.2%。测定结果不被样品主成分及其他辅料干扰。结论该方法简便、准确、专属性强,可用于测定萘敏维滴眼液中玻璃酸钠的含量。 展开更多
关键词 萘敏维滴眼液 玻璃酸钠 特异性水解 高效液相色谱法
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caspase-9在结肠肿瘤中的表达与意义
10
作者 木尔扯尔 文彬 +1 位作者 黄一凡 刘钧 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期2045-2048,共4页
目的探讨天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-9在原发性结肠肿瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学Envision法检测caspase-9蛋白在138例结肠肿瘤(48例含癌旁组织)、37例结肠腺瘤组织及66例结肠正常黏膜中的表达;应用... 目的探讨天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-9在原发性结肠肿瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学Envision法检测caspase-9蛋白在138例结肠肿瘤(48例含癌旁组织)、37例结肠腺瘤组织及66例结肠正常黏膜中的表达;应用实时荧光定量PCR检测caspase-9基因在37例新鲜原发性结肠肿瘤标本及其配对37例正常结肠中的表达;分析caspase-9蛋白、基因表达与临床病理的关系。结果 caspase-9蛋白在正常结肠、结肠腺瘤、癌旁组织及结肠肿瘤中阳性率分别为92.9%、81.1%、85.1%、87.0%;但各组间阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结肠肿瘤中caspase-9蛋白表达与临床病理均无关(P>0.05);结肠肿瘤中caspase-9mRNA平均表达水平是其在正常结肠中的1.587倍(P>0.05)。结论 caspase-9在结肠癌分型等中的作用尚不清楚。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 天冬氨酸异性的半胱氨酸蛋白水解酶-9 免疫组化 实时定量聚合酶链反应
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Caspase-1在眼科疾病中的研究进展 被引量:3
11
作者 李华章 李志坚 《中国医药导报》 CAS 2020年第19期35-37,共3页
半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(Caspase-1)作为一种炎症调节因子,已被证明是炎症调控与细胞凋亡的关键环节.大量研究显示,Caspase-1广泛参与心血管疾病、代谢性疾病及肝硬化等全身疾病的分子机制中.Caspase-1与多种眼科疾病的发... 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(Caspase-1)作为一种炎症调节因子,已被证明是炎症调控与细胞凋亡的关键环节.大量研究显示,Caspase-1广泛参与心血管疾病、代谢性疾病及肝硬化等全身疾病的分子机制中.Caspase-1与多种眼科疾病的发生同样密切相关,在年龄相关性白内障、年龄相关性黄斑变性、糖尿病视网膜病变等常见疾病中作用重大.本文主要对Caspase-1在上述疾病中的作用进行总结. 展开更多
关键词 半胱氨酸天冬氨酸异性蛋白水解酶-1 细胞凋亡 细胞焦亡 炎症
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重新认识细胞焦亡 被引量:7
12
作者 杨慧 李继喜 《科学》 2018年第3期9-13,共5页
生老病死是生物个体的必经过程,也是自然界的基本规律。细胞作为生物体结构和功能的基本单位,也有增殖、分化、衰老和死亡的历程。研究表明,细胞焦亡在细菌病毒感染、动脉粥样硬化、神经退行性疾病及免疫系统缺陷类疾病中发挥着重要作用。
关键词 程序性细胞死亡 细胞焦亡 GSDMD 含半胱氨酸的天冬氨酸异性蛋白水解
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A description of alkaline phosphatases from marine organisms 被引量:2
13
作者 田继远 贾鸿冰 于娟 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2016年第4期795-809,共15页
Alkaline phosphatases(APs) are non-specifi c phosphohydrolases, and they are widely used in clinical diagnostics and biological studies. APs are widespread in nature and exhibit dif ferent structural formulations. Bas... Alkaline phosphatases(APs) are non-specifi c phosphohydrolases, and they are widely used in clinical diagnostics and biological studies. APs are widespread in nature and exhibit dif ferent structural formulations. Based on the diversity of biogenetic sources, APs exhibit temperature-propensity traits, and they are classifi ed as psychrophilic, mesophilic, and thermophilic. In this article, the characteristics of psychrophilic APs from marine organisms were described, accompanied by a simple description of APs from other organisms. This review will facilitate better utilization of marine APs in the biotechnology fi eld. 展开更多
关键词 alkaline phosphatase disulfide bond INTERFACE HYDROPHOBICITY PSYCHROPHILIC
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子痫前期不同病情患者USP22与Th1/Th22/Th17水平变化及相关性研究 被引量:2
14
作者 王彩云 薛秀珍 代娟霞 《华南国防医学杂志》 CAS 2022年第1期20-23,32,共5页
目的探讨子痫前期(preeclampsia, PE)不同病情患者泛素特异性水解酶22(ubiquitin-specific protease 22,USP22)与辅助性T细胞1(helper T cell 1,Th1)/Th22/Th17水平变化及关联性。方法选取2020-01/2021-03月,作者医院收治的77例PE患者,... 目的探讨子痫前期(preeclampsia, PE)不同病情患者泛素特异性水解酶22(ubiquitin-specific protease 22,USP22)与辅助性T细胞1(helper T cell 1,Th1)/Th22/Th17水平变化及关联性。方法选取2020-01/2021-03月,作者医院收治的77例PE患者,其中32例重度PE患者为重度PE组,其余45例非重度PE患者为非重度PE组,并选取同期77例健康孕妇作为对照组。比较各组临床资料、USP22蛋白、Th1、Th22、Th17水平。采用多因素Logistic回归方程分析PE的相关影响因素。采用Pearson分析USP22蛋白与Th1、Th22、Th17关系。结果重度PE组、非重度PE组、对照组的收缩压(systolic blood pressure, SBP)、舒张压(diastolic blood pressure, DBP)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, Scr)、血小板(platelet, PLT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、肺水肿、心功能衰竭情况比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。重度PE组、非重度PE组USP22蛋白均低于对照组,且重度PE组USP22蛋白低于非重度PE组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。对照组、非重度PE组、重度PE组Th1、Th22、Th17依次升高,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。调整了SBP、DBP、BUN、Scr、PLT、AST、ALT、肺水肿、心功能衰竭后,USP22蛋白、Th1、Th22、Th17仍与PE发生相关(P<0.05);USP22蛋白与Th1、Th22、Th17呈负相关(r值依次为-0.434、-0.548、-0.607,P均<0.001)。结论 Th1/Th22/Th17细胞免疫增强造成及加重PE,USP22蛋白与Th1/Th22/Th17有负向调控关系,有望成为防治PE的一个新靶点。 展开更多
关键词 子痫前期 泛素特异性水解酶22 细胞免疫 辅助性T细胞1 关联性
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过表达SOD_1 G41S和G41D的重组腺相关病毒载体构建及其在体外N2a细胞中的作用研究 被引量:1
15
作者 史明超 赵慧慧 +1 位作者 牛琦 金庆文 《中国临床神经科学》 2017年第2期125-134,共10页
目的研究家族性肌萎缩侧索硬化(fALS)超氧化物歧化酶1(SOD_1)上G41S和G41D两种突变型所致神经元电压门控性钠通道(Na_v)电生理特性的差异及其可能的分子机制。方法构建过表达SOD_1野生型(WT)、SOD_1G41S及SOD_1G41D重组腺相关病毒(rAAV... 目的研究家族性肌萎缩侧索硬化(fALS)超氧化物歧化酶1(SOD_1)上G41S和G41D两种突变型所致神经元电压门控性钠通道(Na_v)电生理特性的差异及其可能的分子机制。方法构建过表达SOD_1野生型(WT)、SOD_1G41S及SOD_1G41D重组腺相关病毒(rAAV)载体后,体外感染小鼠神经瘤母细胞(N2a),并分为3个实验组:SOD_1WT组、SOD_1G41S和SOD_1G41D组,并以无目的基因rAAV感染的N2a细胞为阴性对照组。利用全细胞膜片钳技术分别记录4组细胞Na_v电流,绘制通道快速激活和稳态失活曲线后分析相关参数。比较各组细胞凋亡分子cleaved caspase-3在感染后24、48和72 h不同时间点的表达情况。结果与对照组和SOD_1WT组比较,感染过表达SOD_1G41S组、SOD_1G41D组rAAV的细胞峰值电流显著增加(P<0.05),且SOD_1G41S组显著高于SOD_1G41D组(P<0.01)。SOD_1G41S组和SOD_1G41D组细胞半数激活电压和半数失活电压显著高于对照组和SOD_1WT组(P<0.05);但SOD_1G41S组半数激活电压高于SOD_1G41D组(P<0.05);SOD_1G41S与SOD_1G41D组半数失活电压比较差异无显著性(P>0.05);各组激活、失活曲线斜率差异无显著性(P>0.05)。虽然24和48h,SOD_1WT、SOD_1G41 S、SOD_1G41D组cleaved caspase-3表达量差异无显著性;但转染72 h后,SOD_1G41S组和SOD_1G41D组cleaved caspase-3表达量高于SOD1WT组,且SOD_1G41S组高于SOD_1G41D组。结论SOD_1G41S和SOD_1G41D突变通过加快Na_v快速激活和抑制失活过程提高神经元活性,SOD_1G41S突变Na_v活性显著高于SOD_1G41D。SOD_1G41S突变导致cleaved caspase-3表达水平高于SOD_1G41D突变。 展开更多
关键词 家族性肌萎缩侧索硬化 超氧化物歧化酶1 重组腺相关病毒 全细胞膜片钳技术 电压门控性钠通道 剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸异性蛋白水解
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Caspase基因多态性与恶性肿瘤易感性关系的研究进展 被引量:1
16
作者 姜侠 陈坤 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期519-522,共4页
恶性肿瘤是全世界范围内威胁人类健康的一大类疾病。“中国癌症预防与控制规划纲要”(2004—2010)指出,2000年全球新发癌症病例约1000万,死亡620万,现患病例2200万。预计到2020年癌症新发病例将达到1500万,死亡1000万,现患病例3... 恶性肿瘤是全世界范围内威胁人类健康的一大类疾病。“中国癌症预防与控制规划纲要”(2004—2010)指出,2000年全球新发癌症病例约1000万,死亡620万,现患病例2200万。预计到2020年癌症新发病例将达到1500万,死亡1000万,现患病例3000万。 展开更多
关键词 恶性肿瘤 天冬氨酸异性半胱氨酸蛋白水解 凋亡 单核苷酸多态性 易感性
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冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的研究 被引量:5
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作者 刘殿雷 龙景培 +1 位作者 卜贺启 林胜璋 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第15期4773-4780,共8页
目的 探讨冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的机制。方法 选取胰腺癌SW1990和Panc-1细胞株作为研究对象。采用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况,蛋白印迹法检测内质网应激... 目的 探讨冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的机制。方法 选取胰腺癌SW1990和Panc-1细胞株作为研究对象。采用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况,蛋白印迹法检测内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-12(cleaved cystein aspartate specific proteinase-12,cleaved Caspase-12)、活化的(active)Caspase-3、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸多聚酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]的蛋白表达水平,实时荧光定量RCR检测GRP78、CHOP、Caspase-12的m RNA表达水平。结果 冬凌草甲素浓度和时间相关性抑制SW1990和Panc-1细胞增殖,冬凌草甲素可诱导SW1990和Panc-1细胞凋亡,可增加SW1990细胞中cleaved Caspase-3和cleaved PARP的蛋白表达水平(P<0.05);进一步研究发现冬凌草甲素能上调GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA及GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12的蛋白表达水平,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。且在内质网应激抑制剂4-PBA的作用下,冬凌草甲素处理后细胞凋亡率和GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、active Caspase-3蛋白表达水平均被逆转,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草素对SW1990和Panc-1细胞的促凋亡作用依赖于内质网应激的激活,冬凌草甲素可通过激活内质网应激介导胰腺癌细胞凋亡,为冬凌草甲素治疗胰腺癌中的抗肿瘤活性研究提供了新的思路。 展开更多
关键词 冬凌草甲素 胰腺癌 内质网应激 凋亡 葡萄糖调节蛋白78 环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白 天冬氨酸异性半胱氨酸蛋白水解酶-12
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Characterization of β-glucosidase from Aspergillus terreus and its application in the hydrolysis of soybean isoflavones 被引量:1
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作者 Feng-ying YAN Wei XIA +3 位作者 Xiao-xu ZHANG Sha CHEN Xin-zheng NIE Li-chun QIAN 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期455-464,共10页
An extracellular β-glucosidase produced by Aspergillus terreus was identified, purified, characterized and was tested for the hydrolysis of soybean isofiavone. Matrix-assisted laser desorption/ionization with tandem ... An extracellular β-glucosidase produced by Aspergillus terreus was identified, purified, characterized and was tested for the hydrolysis of soybean isofiavone. Matrix-assisted laser desorption/ionization with tandem time-of- flight/time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF/TOF MS) revealed the protein to be a member of the glycosyl hydrolase family 3 with an apparent molecular mass of about 120 kDa. The purified 13-glucosidase showed optimal activity at pH 5.0 and 65℃ and was very stable at 50℃. Moreover, the enzyme exhibited good stability over pH 3.0-8.0 and possessed high tolerance towards pepsin and trypsin. The kinetic parameters Km (apparent Michaelis- Menten constant) and Vmax (maximal reaction velocity) for p-nitrephenyl-β-D-cjlucopyranoside (pNPG) were 1.73 mmol/L and 42.37 U/mg, respectively. The Krn and Vmax for cellobiose were 4.11 mmol/L and 5.7 U/mg, respectively. The enzyme efficiently converted isoflavone glycosides to aglycones, with a hydrolysis rate of 95.8% for daidzin, 86.7% for genistin, and 72.1% for glycitin. Meanwhile, the productivities were 1.14 mmol/(L.h) for daidzein, 0.72 mmol/(L.h) for genistein, and 0.19 mmol/(L.h) for glycitein. This is the first report on the application of A. terreus β-glucosidase for converting isoflavone glycosides to their aglycones in soybean products. 展开更多
关键词 Β-GLUCOSIDASE Aspergillus terreus CHARACTERIZATION HYDROLYSIS Soybean isoflavones
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肺炎克雷伯菌肺炎对小鼠NLRP3炎症通路的影响 被引量:6
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作者 张国荣 刘楠 刘莉 《世界临床药物》 CAS 2019年第2期95-100,共6页
目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取... 目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测无细胞上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6、趋化因子配体1(KC)的水平,迈格林华-姬姆萨染色计数细胞沉淀中的中性粒细胞数;取肺部病理切片并进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病变;提取肺部总蛋白,蛋白质印迹法检测NLRP3、核因子(NF)-κB p65、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、人白介素-1β前体(pro-IL-1β)表达水平。结果成功建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,小鼠在144 h内死亡率达到百分之百,肺部有大量细菌负载,肺部中性粒细胞浸润增加,支气管肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6、KC分泌升高,肺组织IL-1β、p-p65表达升高。结论通过将肺炎克雷伯菌液接种到小鼠肺部的方法所建立的肺炎小鼠模型稳定性高、可重复性好,肺部NLRP3炎症通路反应强烈。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌肺炎 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路 核因子(NF)-κB P65 凋亡相关微粒蛋白 天冬氨酸异性半胱氨酸蛋白水解 人白介素-1β前体
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