长链非编码RNA X非活性特异性转录物(XIST)在心房颤动患者中的表达与临床意义

目的:研究长链非编码RNA X非活性特异性转录物(XIST)在心房颤动(AF)患者中的表达特征与临床意义。方法:选取2021年6月至2022年5月在山东第一医科大学第一附属医院心内科治疗的75例AF患者,并选取同期75例体检窦性心律者作为健康对照者。采集清晨空腹静脉血并分离血清,通过实时荧光定量PCR检测XIST表达水平。采用t和F检验分析XIST表达与年龄、性别、慢性病(糖尿病、高血压及冠心病)患病情况、AF类型(阵发性、持续性及永久性)、AF评分(CHA2DS2-VASc评分)及心功能分级(I、II、III及IV)之间的关系。采用Spearman检验分析XIST表达与左心室射血分数(LVEF)和左心房内径(LAD)的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析XIST表达检测AF的诊断价值。结果:AF患者血清中XIST表达水平低于健康对照者(P < 0.05)。持续性和永久性AF患者血清中XIST表达水平低于阵发性AF患者(P < 0.05)。CHA2DS2-VASc评分 ≥ 2的AF患者血清中XIST表达水平低于CHA2DS2-VASc评分 < 2的AF患者(P < 0.05)。心功能III~IV级AF患者血清中XIST表达水平低于心功能I~II级AF患者(P < 0.05)。XIST表达与LVEF呈正相关(r = 0.48, P < 0.05),而与LAD负相关(r = −0.73, P < 0.05)。XIST表达诊断AF、阵发性AF、持续性AF及永久性AF的曲线下面积分别为0.66、0.69、0.77及0.82 (P < 0.05)。结论:AF患者血清中XIST表达水平下调,与AF类型、CHA2DS2-VASc评分、心功能分级、LVEF及LAD相关。XIST表达对协助AF诊断具有一定的作用。

多发性骨髓瘤患者树突状细胞介导的特异性抗瘤活性的体外诱导

目的 :观察U2 6 6 细胞及其可溶性抗原激发的多发性骨髓瘤 (MM)患者树突状细胞 (DC)体外诱导U2 6 6 特异性CTL的作用。方法 :将MM患者外周血来源的单核细胞在rhGM CSF 80 0U ml与IFNα 6 0 0U ml条件下利用无血清技术培养生成DC ,应用丝裂霉素C处理的U2 6 6 细胞及用U2 6 6 细胞制备的可溶性抗原预刺激DC ,然后与自体淋巴细胞共同孵育 5～ 7d以诱生特异性CTL ,采用MTT法检测对U2 6 6 细胞的特异性杀伤效果。结果 :MM患者外周血单核细胞在GM CSF IFNα条件下培养 8d后生成具有典型特征的DC ,高度表达CD86、CD5 4及MHCII类分子HLA DR。应用MTT法检测U2 6 6 细胞及其可溶性抗原激发的DC诱导特异性CTL对靶细胞U2 6 6 的杀伤率分别为 2 1 2 %± 5 4 %和 2 8 0 %± 7 6 % ,对照组未用抗原刺激组都为 11 7%±4 3%。而以抗原直接刺激自体淋巴细胞组为 15 6 %± 4 8%和 13 1%± 5 5 % (P <0 0 1)。结论 :U2 6 6 细胞及其可溶性抗原激发的DC与自体淋巴细胞孵育能诱导抗U2 6 6 特异性CTL。

拟南芥非特异性磷脂酶C2的磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C活性研究

在拟南芥中有6个非特异性磷脂酶C（NPC1-NPC6）。GUS染色显示NPC2在根中主要是在根尖分生区和伸长区表达，在成熟区主要是在维管组织中表达；在叶中，NPC2主要在发育的叶片中表达，随着叶片成熟进程，NPC2基因的表达量逐渐降低。npc2—1突变体的PC—PLC活性比野生型降低47．7％，互补的植物能不同程度地恢复突变体的PC—PLC酶活性。这说明NPC2具有PC—PLC酶活性。NPC2基因在侧根形成位点的表达虽然与IAA诱导的侧根形成紧密相关，但外源IAA处理野生型和突变体之间的侧根密度、主根长度和侧根总长无明显区别。

特异性免疫活性细胞联合替比夫定治疗难治性乙型肝炎的临床研究

目的分析特异性免疫活性细胞联合替比夫定治疗难治性乙型肝炎的临床疗效，旨在为临床治疗难治性乙型肝炎提供临床依据。方法收集2012年1月至2015年12月在本院确诊的难治性乙型肝炎患者共160例作为受试对象，随机分为对照组和观察组。对照组单独使用替比夫定，共持续24周；观察组患者使用DC-CIK回输治疗联合替比夫定治疗。分析治疗前后两组患者的谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、白蛋白（ALB）等肝功能指标；HBeAg定量以及HBV-DNA定量，并评价两组患者的疗效差异。结果对照组和观察组治疗前后ALT、AST、TBIL和ALB水平差异有统计学意义（P＜0.05），观察组治疗后ALT、AST、TBIL和ALB水平显著低于对照组（P＜0.05）。对照组和观察组治疗后HBV-DNA定量和HBeAg定量均显著低于治疗前（P＜0.05），观察组治疗后HBV-DNA和HBeAg定量显著低于对照组（P＜0.05）。对照组治疗后总有效率为60.00%，观察组治疗后总体有效率87.50%，两者相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论联合使用特异性免疫活性细胞和替比夫定较单独使用替比夫定能够显著增加患者的肝功能指标，并显著降低患者的乙肝病毒数量，提高疗效，值得临床推广使用。

猪脾乙肝特异性转移因子的研制

探索猪脾乙肝特异性转移因子（ＰＳＨＢＶ－ＴＦ）的制备方法，为临床提供合格的ＰＳＨＢＶ－ＴＦ制品。方法：用乙肝疫苗辅以佐剂对猪进行全程免疫，然后从猪脾中提制ＰＳＨＢＶ－ＴＦ；采用小鼠皮肤试验检测制品的特异性活性，并按卫生部规程要求对制品进行全检。结果：ＰＳＨＢＶ－ＴＦ具有抗乙肝特异性活性，即能转移针对乙肝病毒的特异性细胞免疫反应； ３批制品所有项目符合规程要求。结论：本法可制备出合格的 ＰＳＨＢＶ－ＴＦ制品，且适合于大规模化生产。

绵羊棘球蚴病的特异性预防

作者取当年出生的羔羊分成4组。每组5只,第一组接种H-多价苗2,每只5mg,注射2次,间隔21天;第二组接种H-多价苗1,用量方法同前;第三组作感染对照;第四组单纯对照。在第2次接种后过了14天作感染试验,分别给各组别每只羔羊按1000+675条棘球蚴六钩蚴感染,随后则同母羊一起赶至牧场。试验前后第5、15、30、45、60、90、120、180、210、270、360天分别检测E-POK的绝对含量,免疫调节指数,巨噬细胞的吞噬活性和EAC-POK的绝对含量。试验结果表明,第一、二组较之第四组有着显著差异(P【0.05),例如,

抗乙肝特异胎盘因子的制备

目的探索制备抗乙肝特异胎盘因子的方法。方法用乙肝疫苗作为抗原 ,体外免疫健康产妇胎盘白细胞 ,然后从白细胞中提取抗乙肝特异胎盘因子 ,采用小鼠皮肤试验检测制品的特异性活性。结果体外免疫法制备的抗乙肝特异胎盘因子能转移针对乙肝病毒的特异性细胞免疫反应。

血清lncRNAXIST和SIRT1水平与DR的关系及其诊断价值

目的:检测2型糖尿病(T2DM)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异性转录本(XIST)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达水平,并探讨其与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性及其诊断价值。方法:前瞻性研究。选取2022-01/2023-02在我院收治T2DM患者214例作为研究对象。根据是否发生视网膜病变,分为非DR组126例126眼,DR组88例88眼。另选取同期体检健康者130例为对照组。检测三组血清lncRNA XIST、SIRT1水平并进行比较。采用Pearson法分析lncRNA XIST和SIRT1表达与DR的关系,受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST、SIRT1单独及联合对DR的预测价值,多因素Logistic回归分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:与对照组比较,非DR组和DR组血清lncRNA XIST、SIRT1水平依次降低(均P<0.05);DR患者血清lncRNA XIST和SIRT1水平呈正相关(r=0.639,P<0.05);ROC分析显示,血清lncRNA XIST、SIRT1联合预测DR的曲线下面积(AUC)为0.940,高于血清lncRNA XIST、SIRT1单独检测的AUC(0.855、0.875)。Logistic回归分析显示,lncRNA XIST(OR=0.752)、SIRT1(OR=0.694)是DR发生的影响因素(均P<0.01)。结论:DR患者血清lncRNA XIST、SIRT1水平均降低,lncRNA XIST联合SIRT1对DR发生有较好的评估效能。

长链非编码RNA在膜性肾病中的作用研究进展

在基因组非编码基因特异性的RNA分子表达产物中,长链非编码RNA(lncRNA)广泛参与代谢、免疫等关键病理生理过程,与肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病等的发生发展密切相关。随着lncRNA种类数量的不断增加,其在肾脏疾病中的作用越来越受到关注。膜性肾病(MN)是我国常见的原发性肾小球肾炎,严重威胁人们的健康和生命。lncRNA,尤其是X非活性特异性转录物、浆细胞瘤变体易位1参与MN的发生发展。但目前关于lncRNA在MN中的作用机制研究较少,深入研究lncRNA在MN中的作用机制,可能为MN的诊断及治疗提供新的治疗靶点。

子宫内膜癌组织中lncRNA XIST、miR-132-3p的表达及与病理参数和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中长链非编码RNA X非活性特异性转录本(lncRNA XIST)、微RNA-132-3p(miR-132-3p)的表达及与病理参数和预后的关系。方法选取2016年2月至2019年12月江苏省南通市第六人民医院及江苏省南通市肿瘤医院收治的100例EC患者,采用q PCR检测癌组织与癌旁正常组织中lncRNA XIST、miR-132-3p表达。Star Base数据库预测lncRNA XIST与miR-132-3p的关系,Pearson相关性分析lncRNA XIST与miR-132-3p的相关性。随访3年,根据EC组织中lncRNA XIST、miR-132-3p的平均表达量将患者分为高表达组和低表达组,采用K-M法绘制不同lncRNA XIST、miR-132-3p表达患者的生存曲线。结果癌组织中lncRNA XIST表达高于癌旁正常组织,miR-132-3p表达低于癌旁正常组织(P<0.05)。lncRNA XIST与miR-132-3p存在互补序列,lncRNA XIST与miR-132-3p表达呈负相关(r=-0.694,P<0.01)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、脉管侵犯和淋巴结转移EC组织中lncRNA XIST、miR-132-3p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA XIST高表达组3年累积生存率低于lncRNA XIST低表达组,miR-132-3p高表达组3年累积生存率高于miR-132-3p低表达组(P<0.05)。结论EC组织中lncRNA XIST高表达和miR-132-3p低表达,两者与分化程度、FIGO分期、脉管侵犯、淋巴结转移及预后有关。

血清lncRNA XIST与老年膝关节骨性关节炎病情严重程度及炎性因子水平的相关性

目的分析血清长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异性转录本(XIST)水平与老年膝关节骨性关节炎(KOA)患者病情严重程度及炎性因子水平的相关性。方法选择2019年3月至2021年4月确诊的96例KOA患者为研究对象(研究组),同期健康体检者100例作为对照(对照组),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血清中XIST水平,酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL-6)水平。根据X线片评估,参考Kellgren-Lawrence(K-L)分级标准对所有受试者病情严重程度进行分级;Spearman分析KOA患者病情严重程度与血清中XIST、IL-1β、TNF-α、IL-6水平关系;Pearson分析KOA患者血清中XIST与IL-1β、TNF-α、IL-6水平关系。结果与对照组比较,研究组血清中XIST、IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)。K-L分级判定结果:对照组均为0级,研究组Ⅰ级19例、Ⅱ级24例、Ⅲ级36例、Ⅳ级17例。Spearman分析发现KOA患者血清中XIST、IL-1β、TNF-α、IL-6水平与病情严重程度呈正相关(r值分别为0.784、0.791、0.657、0.703,P<0.05);Pearson分析发现KOA患者血清中XIST水平与IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(r值分别为0.635、0.525、0.414,P<0.05)。结论老年KOA患者血清中XIST水平升高,且其与病情严重程度、炎性因子水平关系密切,可能对于指导临床治疗老年KOA患者具有一定意义。

携带结核杆菌Ag85B靶细胞的构建、鉴定及应用

目的构建表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的靶细胞以便评定结核疫苗的特异性细胞毒(CTL)作用。方法将携带有Ag85B基因的重组质粒pTB30s转入小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),用RT-PCR及免疫组化染色法鉴定阳性克隆细胞胞内的Ag85B基因转录和蛋白表达水平;同时,用接种过BCG,pTB30s或生理盐水(NS)小鼠脾脏单个核细胞作为效应细胞,G418高压筛选的阳性克隆细胞为靶细胞,用MTT法检测各组CTL杀伤活性。结果RT-PCR以及免疫组化结果显示,阳性细胞能稳定表达Ag85B。CTL杀伤实验:BCG、pTB30s及NS对照组杀伤率分别为28.14%、45.18%和5.13%。结论含有Ag85B靶细胞构建成功及应用,为研究结核疫苗的免疫效果提供了较好的研究手段。

植物凝集素及其研究现状

本文就有关凝集素的特性及并近年来植物凝集素的研究现状进行阐述。

小分子干扰RNA下调HIF-2α基因表达对人肝癌细胞HepG2体外凋亡的机制

目的 探讨小分子干扰RNA下调缺氧诱导因子-2α基因表达对人肝癌细胞株HepG2体外凋亡的影响,并研究其可能的分子机制.方法 采用不同浓度的氯化钴诱导细胞模拟缺氧,设计合成的特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA转染缺氧环境下HepG2细胞48 h后,采用逆转录聚合酶链式反应、免疫蛋白印记方法检测细胞中缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达,流式细胞术观察细胞凋亡率,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9试剂盒检测细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性;免疫蛋白印记法检测凋亡相关因子B淋巴细胞/白血病-2、白血病-2相关x蛋白的表达.结果 低氧环境下,缺氧诱导因子-2α表达上调;特异性缺氧诱导因子-2αsiRN A转染HepG2细胞48 h后,转染组缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达下调(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率升高(P<0.05),活性检测显示半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性升高,免疫蛋白印记法检测显示白血病-2表达下调,x蛋白表达上调(P<0.05).结论 特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA可针对性的下调HepG2细胞中缺氧诱导因子-2α的表达,促进HepG2细胞体外凋亡,这一过程可能与下调白血病-2表达、上调x蛋白的表达及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性有关.

结核分枝杆菌Rv0440 CTL表位肽的免疫原性研究

目的体外鉴定结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv0440蛋白序列中表位肽362-370aa和369-377aa的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性,为基于表位的结核疫苗研究提供实验依据。方法根据T2细胞HLA-A*0201分子与多肽结合力分析实验结果,选取结核分枝杆菌Rv0440蛋白质氨基酸序列中对HLA-A*0201分子高亲合力的Rv0440-1(362-370aa,KLQERLAKL)和Rv0440-2(369-377aa,KLAGGVAVI)作为候选表位肽。用候选表位肽刺激PPD(+++)健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)检测细胞分泌IFN-γ的水平。用候选表位肽诱导特异性CTL细胞,检测特异性CTL细胞对负载表位肽的T2细胞的杀伤活性,观察Rv0440-1和Rv0440-2的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位的免疫原性。结果 ELISPOT实验结果显示,表位肽Rv0440-1能够明显诱导HLA-A*0201(+)、PPD(+++)健康志愿者PBMC分泌IFN-γ(P<0.05);且表位肽Rv0440-1负载DC诱导的CTL在效靶比为10∶1时对负载相应表位肽的T2细胞的特异性杀伤活性高于对照组(P<0.05);与对照组相比,表位肽Rv0440-2没有诱导能力。结论表位肽Rv0440-1(362-370aa,KLQERLAKL)具有良好的免疫原性,是有效的结核分枝杆菌的HLA-A*0201限制性CTL表位。

肉毒杆菌毒素的标准剂量

目前,肉毒杆菌毒素的临床应用正日趋广泛。为使这一制剂使用安全,必须确定其临床使用的标准剂量。Quinn和Hallet曾指出这一问题的重要性,并认为美国和英国生产的肉毒杆菌毒素的生物学活性单位需要使用统一标准。治疗斜颈所需的小鼠LD50活性单位在英国为875～1200IU（Dys-port）,而在美国为100～280IU（Botox）,同样,治疗原发性睑痉挛所需剂量也不相同。因为两种制品的特异性活性单位(小鼠LD50u/ng),有显著性差异。Schantz和Johnson指出,用质量（ng）表示毒素的剂量毫无意义。他们呼吁,小鼠LD50生物测定应该更加标准化。

Xist lncRNA介导X染色体失活及应用研究进展

在哺乳动物胚胎发育过程中,雌性胚胎细胞中一条X染色体转录沉默,导致两性间的剂量补偿称为X染色体失活(X chromosome inactivation,XCI)。X染色体失活中心(X chromosome inactivation center,XIC)是XCI的主要调控区域,X-非活性特异性转录物(X-inactive specific transcript,Xist)位于该区域中且是XCI的关键部分。Xist长链非编码RNA(long chain non-coding RNA,lncRNA)是一种非活性的特异性转录物,能够招募如RNA互作结合蛋白(RNA interaction binding protein,RBP)、染色质修饰因子等一系列辅助因子,促使染色体和细胞核空间结构、染色质组成及X连锁基因转录水平发生改变,从而将有活性的染色体转化为无活性的染色体。对小鼠、人及其他物种研究显示,XCI普遍存在于哺乳动物胚胎发育中,是胚胎存活的基础,然而不同物种胚胎中却存在一些特异性差异。此外,癌症、肿瘤等一些人类疾病也与XCI有关。目前关于XCI机制研究比较零散,作者就Xist lncRNA介导XCI的主要分子机理、调控机制及在不同物种中的研究进行概述。

“生物导弹”定点消灭癌细胞 细胞免疫治疗给肿瘤患者带来希望

近年来,随着生物医学科技的飞速发展,细胞免疫治疗被越来越广泛应用到肿瘤治疗中,被视为手术、放疗、化疗后的第四种肿瘤治疗手段。今年4月29日,美国食品和药物管理局(FDA)批准了第一支细胞免疫治疗疫苗——前列腺癌疫苗,而307医院也在肿瘤细胞免疫治疗科研上取得成果。肿瘤细胞免疫治疗通过人为干预。