CEA迷你基因原核表达及其诱导小鼠特异性淋巴细胞增殖的研究

目的在原核细胞中表达人癌胚抗原（CEA）的迷你基因短肽，纯化及鉴定目的蛋白，并检测其在小鼠体内的抗原性。方法利用PCR技术从人基因组中得到一段来源于CEA的DNA序列，其中包含两个编码分别能被HLA—DR4／9、HLA—DR53以及HLA-DR4／7／9型别的人群所识别辅助性T细胞（HTL）表位的迷你基因，构建重组表达质粒pQE30-CEA625-667，在大肠杆菌M15中诱导表达。Westren Blot杂交鉴定、镍凝胶亲和层析法纯化目的蛋白。3H—TdR掺入法检测目的短肽诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应。结果CEA625-667短肽在大肠杆菌M15中以包涵体形式表达。Western—blot结果显示，在相对分子质量约6700处有表达产物与6×hismAb特异性结合带。镍柱纯化后可得到纯化的目的蛋白.3H-TdR掺入实验所得不同浓度的CEA625-667与小鼠脾细胞共孵育7～9d后的刺激指数相继达到对照组的10倍以上。结论成功诱导了CEA625-667短肽的原核表达，通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的CEA625-667短肽，并证明在一定浓度下目的短肽可于体外诱导小鼠的特异性淋巴细胞增殖。为CEA625-667迷你基因作为表位疫苗在抗肿瘤方面的进一步研究提供条件。

人乳头瘤病毒16型E7DNA疫苗的构建及其诱导特异性淋巴细胞增殖的研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )E7DNA疫苗诱导机体特异性细胞免疫应答的情况。方法 :采用分子克隆技术 ,构建HPV16野生型E7基因的真核表达重组体 ,将其转化大肠杆菌JM10 9进行筛选 ,通过限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析 ,证明重组质粒中目的基因插入片段及载体DNA大小、方向、插入位点均正确 ,获得HPV16E7DNA疫苗 ,将E7DNA疫苗经皮内注射免疫动物 ,MTT比色法体外检测特异性淋巴细胞增殖反应。结果 :野生型E7DNA疫苗免疫组脾淋巴细胞在体外受到E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应。结论 :野生型E7DNA疫苗可诱导特异性的细胞免疫应答 。

重组人乳头瘤病毒核酸疫苗诱导特异性淋巴细胞增殖

采用分子克隆技术 ,将人乳头瘤病毒 16型E7(HPV 16E7)基因重组于真核表达载体上 ,构建了HPV 16E7核酸疫苗。将该疫苗通过皮内注射方式免疫Balb/c纯系小鼠。基因免疫后制备小鼠脾淋巴细胞悬液 ,经体外E7蛋白再次刺激后用MTT比色法检测出了特异性淋巴细胞增殖反应。由于特异性淋巴细胞增殖是反映细胞免疫功能的简便有效方法 ,所以本实验表明HPV 16E7核酸疫苗构建正确 。

山茱萸总苷抗类风湿关节炎免疫作用机理的初步研究

目的 :探讨山茱萸总苷抗Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的类风湿关节炎的免疫作用机理。方法 :建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎 (CIA)大鼠模型 ,对山茱萸总苷对大鼠在免疫诱导期、关节炎急性期、慢性缓解期血清中CⅡ抗体的水平、腹股沟引流淋巴结细胞IFN γ的自发分泌和刺激性分泌以及淋巴结细胞的特异增殖能力的影响进行动态观察。结果 :山茱萸总苷对类风湿关节炎有明显的防治作用 ,特异性抑制免疫大鼠抗CⅡ抗体的产生、腹股沟淋巴结Th1型细胞因子IFN γ的分泌及细胞增殖。结论 :山茱萸总苷抗类风湿关节炎的免疫作用机理之一是抑制CⅡ特异性体液免疫和Th1型细胞免疫。

扶正清瘿方治疗桥本氏甲状腺炎实验研究

目的 :探讨扶正清瘿方治疗桥本氏甲状腺炎的免疫学机制。方法 :建立实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型 (EAT ) ,以地塞米松、雷公藤多甙片、优甲乐为对照组 ,检测甲状腺淋巴细胞浸润分级指数 ,自身甲状腺抗体Tg -Ab ,T淋巴细胞亚群分类 ,免疫细胞因子IFN -γ ,以SPSS10 .0软件做T检验分析结果。结果 :扶正清瘿方能明显降低模型动物的自身免疫反应 ,其作用优于雷公藤多甙片和优甲乐组 ,与地塞米松相似。讨论 :扶正清瘿方治疗桥本氏甲状腺的机制可能是抑制了T淋巴细胞亚群的免疫功能。