特异性的蛋白小分子荧光探针及其标记技术

活体蛋白荧光标记技术已经被广泛应用于蛋白质功能的可视化研究中。荧光蛋白常被用来研究蛋白质在生物体内的表达和定位,但由于它本身体积比较大,往往会影响目标蛋白的生物活性。特异性的小分子荧光探针以其体积小、膜透性好、背景噪音低以及制备方便的优点成为蛋白质研究的一个有力工具。本文将简要介绍近几年来各类特异性小分子蛋白荧光探针的研究进展。

基于新型材料的化学生物学探针特异性标记肝细胞

由中科院上海药物研究所与华东理工大学的研究人员组成的一个研究小组，合作开发了基于氧化石墨烯一糖分子，可识别肝细胞表面特异性糖受体的开关型生物传感器。利用细胞表面糖结合蛋白和明星材料“石墨烯”多元性开发建立了经济型、特异性“糖簇石墨烯”生物探针，为糖组学与新型材料有效结合建立基于糖分子的新型探针实现生物分子特异性识别提供了新方向。该项研究论文被国际顶级刊物Advanced Materials选为杂志封面论文。

天津稻基因组分析与特异性探针制作 Ⅰ.水稻育种特异性探针制作

用ＰｓｔＩ酶切水稻总ＤＮＡ，制作了单拷贝随机探针。用这些探针以及水稻基因组计划提供的不同来源的分子探针进行ＲＦＬＰ分析，获得籼粳特异性以及与某些重要农艺性状密切相关的育种特异性探针。分子标记转变以及相关分析表明。

ADV特异性糖蛋白GP50基因片段的核酸探针

新疆军区后勤部卫生防疫大队生物医学研究室进行了用光敏生物素标记核酸探针检测伪狂犬病的研究,他们利用分子生物学方法,将伪狂犬病毒(ADV)的特异性糖蛋白GP50基因片段制备成光敏生物素探针,经过杂交试验,灵敏度高达46.8Pg水平。该探针与HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ及CMV杂交阴性,证明特异性强。通过检测感染乳猪及屠宰场随机样品,证明此探针能有效地用于临床检测AD,换言之。用ADV

地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用

利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、猪肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌等细菌的核酸杂交均为阴性。对胸膜肺炎放线杆菌的最低检出限量为10×102 个放线杆菌。对疑似胸膜肺炎放线杆菌感染病变组织检测结果表明,在扁桃体、鼻腔、气管、肺脏均可检测出胸膜肺炎放线杆菌,以扁桃体的检出率最高。为猪胸膜肺炎放线杆菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。

荧光标记寡核苷酸探针检测变形链球菌

[目的]建立应用荧光标记寡核苷酸探针BC73快速检测变形链球菌的方法。[方法]应用流式细胞仪检测荧光标 记寡核苷酸探针EUB338和BC73与模式菌株和牙菌斑样品荧光原位杂交后的荧光强度和荧光计数。[结果]荧光标记寡核苷 酸探针BC73与变形链球菌S. mutans 10449杂交的荧光强度7倍于S.mitis 15914和E. coli K12。变形链球菌占牙菌斑中细 菌总数的1.7％。[结论]荧光标记寡核苷酸探针BC73能特异性检测牙菌斑中的变形链球菌数。

PCR制备地高辛配基标记的探针检测登革病毒核酸

用聚合酶链反应(PCR)技术,以重组质粒PDEⅡ305 DNA为模板,在底物中补充标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(DIG-dUTP),经扩增反应制备了地高辛配基标记的登革病毒2型(DEN_2)cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针有DEN_2型特异性,可检出0.1Pg DEN_2-RNA。PCR扩增标记只用10 ng模板DNA,数小时内可制备约Iug标记的cDNA探针,而用六聚核苷酸随机引物(RHP)标记,从质粒DNA酶切、片段回收到标记获得探针,至少需数10 h。可见PCR技术直接制备地高辛配基标记的cDNA探针较方便,快速、标记率高、特异性强,具有一定的应用前景。

罗丹明类荧光探针进行小分子信标物标记的研究进展

罗丹明类荧光探针基于吡喃型氧杂蒽母体结构,兼具有共轭结构与刚性平面,表现可见光区至近红外光区的长波激发与发射,进行光学性能分析时背景荧光干扰较少、检测过程直观可视,此外,因其结构的可修饰特性,罗丹明具有数量众多的衍生物,在小分子信标物的荧光标记研究中表现良好,具有广泛的应用前景。综述了近年来罗丹明类荧光探针进行改性修饰的类型和方法,探讨了罗丹明衍生物的结构与光学特性,并对其在化学、生物学、医学等多学科领域与实际工作中的荧光标记研究进行了分析展望。

生物素标记核酸探针染色体原位杂交及其临床应用

采用随机引物法使生物素标记DNA探针PY3·4，对正常男性、女性及两例47，XYY患儿的染色体进行原位杂交，免疫荧光检测系统检测，结果显示PY3·4有高度特异性，可作为Y染色体的标记探针。此方法具有稳定、安全、价廉、特异性强，降低本底等优点，可取代同位素标记的方法用于染色体上基因定位，检出染色体畸变以及癌变机理等研究。

荧光标记DNA探针用于水溶液中Hg^2＋的检测

Hg^2＋是存在于水溶液中一种最常见、最稳定的汞污染方式。目前尽管已有大量的Hg^2＋检测方法见诸报道，但对于大多数方法而言，要么选择性差，要么设计复杂、操作困难，要么易产生假阳性信号。最近，Wang等开发了一种新型的Hg^2＋荧光传感器，该传感器可以实现Hg^2＋的高灵敏度、高特异性检测。本实验在文献基础上，提出了一种探针设计方案。研究结果表明，该探针设计方案同样可用于Hg^2＋的高特异性定量检测。

前列腺癌特异性近红外荧光探针的研究进展与展望

近年来,世界范围内的肿瘤发病率和死亡率有所增高,在我国,肿瘤已经成为致死的重要原因之一[1,2]。其中,前列腺癌(prostate cancer,PCa)是男性泌尿系统发病率最高的恶性肿瘤[3,4]。在美国,PCa是发病率最高的癌症,死亡率仅次于肺癌[3]。其他国家PCa的发病率亦居高不下。因此,PCa是威胁中国乃至全球男性健康的一项不容忽视的疾病。

地高辛配基标记DNA探针检测HLAⅡ类基因技术的建立

本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针杂交;条件洗涤、化学发光显影等一系列步骤。该实验方法具有用血量少、结果精确稳定、操作简便安全、不污染环境等优点。作者对模板DNA的提取、杂交缓冲液制备、标记探针的使用剂量以及条件洗涤等多个环节作了改良,使实验方法和结果进一步优化。

用量子点标记的抗体作为免疫荧光探针检测药物中的大肠杆菌

本研究利用量子点卓越的光学性能,建立了一种可快速、特异地检测药物中大肠杆菌的方法。兔抗山羊抗体通过交联反应与水溶性的ZnS/CdSe量子点共价结合,将形成的结合物命名为IgG-QDs,并采用琼脂糖凝胶电泳对其进行验证。利用山羊抗大肠杆菌抗体和兔抗山羊抗体的特异性结合力,成功地对大肠杆菌进行了量子点标记,进一步建立了特异性检测大肠杆菌的方法。结果表明,抗体的生物学活性和生物识别能力未受标记反应的影响,IgG-QDs可特异性识别大肠杆菌。大肠杆菌细胞在盐酸氯米帕明中的回收率分别为82.90%和73.64%,整个检测过程所用时间不到4h。该方法已被证明是快速和特异性的,也可用来检测压力和损伤的细胞等。

光生物素标记探针检测乙型肝炎病毒DNA

近年来,生物素的应用越来越广泛,它不但用于病理技术,而且在临床检验和生物学领域内的用途也日益广泛。目前,进行的斑点杂交法,大多用同位素标记探针,由于同位素对人体有损伤,故生物素的利用日趋兴旺,而光生物素标记探针,既简便、省时,又快速、安全,是检验系统检测液状物质内核酸的最佳选择。有关这方面的文献,国内报道甚少。本文应用光生物素标记探针检测血清中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA,获得了满意的结果。现介绍如下:(一)材料1.HBV DNA:带有 HBV:DNA

动物蓝舌病病毒非放射性基因探针研究——全核酸生物素化学标记光生物素标记初报

基因探针是一种重要的分子生物学技术,目前已应用于病毒基因的检测,由于具有高度特异性及敏感性,用于检测感染材料中的微量病毒更为合适,但因传统的基因探针是用放射性同位素标记,需要复杂的仪器设备及技术,加之对人体危害,受半衰期限制,难于推广。生物素标记探针的问世。

新型荧光探针高灵敏高选择性检测H2O2成功实现宫颈癌细胞线粒体靶向定位

最近，由兰州化学物理研究所邵士俊带领的一个研究绍设计合成了一种具有线粒体靶向功能、优良生物相容性以及OFF—ON型荧光响戍的H2O2荧光探针，成功实现了对细胞线粒体的靶向定位，以及对肿瘤细胞线粒体中外源和内生H2O2的快速、高灵敏、特异性检测与成像分析，有望改善当前H2O2特异性检测荧光探针十分匮乏的现状。

山羊卵母细胞体外成熟过程中线粒体的动态分布

目的研究山羊卵母细胞减数分裂过程中线粒体的动态分布。方法收集山羊卵母细胞,在M199中分别培养4、8、12、16、20和24 h,用特异性线粒体标记探针进行标记,用激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体的分布情况。结果生发泡期线粒体多分散在卵母细胞的胞质内,并且距生发泡有一定的距离;生发泡破裂期线粒体逐渐移向染色质;第一次减数分裂中期与第二次减数分裂中期线粒体成簇密布在染色体周围。排出的第一极体中也含有大量的线粒体。结论同其他哺乳动物卵母细胞体外成熟过程中线粒体分布情况相比,线粒体在山羊卵母细胞中的分布具有明显的相似性。线粒体密布在成熟卵母细胞染色体周围可能与极体的排出和受精后染色体的迁移有关。

核酸探针的研究进展

随着分子生物学技术的发展,疾病诊断技术特别是病毒病的诊断,已经进入到基因组诊断的分子生物学水平。有人称核酸探针为“神奇”的探针;有人称之为“八十年代发展起来的第三代诊断技术”;J.A.Miller认为,疾病诊断到了最根本的地步,往往是一个遗传学问题,从病人或传染源微生物的基因着手进行医学诊断,也许是最直接的诊断方法(引自《美国科学新闻》)。近年来,核酸探针的研究应用也十分活跃,许多疾病特别是遗传病和病毒病的诊断都迅速地应用了这一根本而又准确的新技术。