肝癌细胞特异性结合抗体的筛选及序列测定

目的 通过噬菌体展示技术筛选与肝癌细胞特异性结合的抗体。方法 用肝癌细胞系SMMC772 1免疫小鼠 ,提取脾细胞总RNA ,构建单链抗体库 ,从中筛选特异性结合的抗体。结果 构建了一个库容量为 2× 10 5的单链抗体库 ,并筛选到 1个与肝癌细胞系HepG2特异性结合的噬菌体 单链抗体。此单链抗体与HepG2细胞结合滴度比正常肝细胞低 12 5倍以上。结论 本研究成功构建了单链抗体库并筛选到与靶细胞特异性结合的噬菌体 单链抗体。

增殖细胞核抗原蛋白在Spodoptera frugiperda昆虫细胞中的表达及纯化

目的：利用昆虫细胞表达系统生产重组的人增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）,并进行纯化和抗体结合特性鉴定。方法：以HeLa细胞逆转录的cDNA为模板,扩增人PCNA基因,并插入杆状病毒载体AcMNPV。利用昆虫细胞得到PCNA基因的重组杆状病毒。病毒感染细胞表达蛋白,联合镍柱亲和层析和离子交换层析获得高纯度的重组人PCNA蛋白。ELISA法测定抗体结合特异性。结果：以HeLa细胞cDNA为模板得到的基因序列同GenBank的人PCNA基因序列一致。草地贪夜蛾细胞（Spodoptera frugiperda,Sf9）表达重组人PCNA（recombinant human PCNA,rPCNA）的最佳感染值（MOI）和感染时间分别为0.05h和144h。rPCNA的产量高达110mg/L细胞,纯度〉95%。间接ELISA法检测抗体结合特性,rPCNA的敏感性和特异性分别为93.3%和85.0%。结论：建立了rPCNA的表达和纯化方法,获得了高效表达、高度抗体结合特异性的PCNA蛋白,该蛋白质能进一步开发为PCNA相关疾病的体外诊断试剂盒,具较大的应用价值。