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应用噬菌体肽文库筛选mAbF3特异性结合肽(英文) 被引量:2
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作者 王长军 唐家琪 +4 位作者 王登高 陶开华 李先富 潘秀珍 郭恒彬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期605-607,610,共4页
目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗 (mAb)F3特异性结合的配体肽。方法以F3mAb为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行 3轮生物亲和淘选 ;用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ,并进一步对... 目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗 (mAb)F3特异性结合的配体肽。方法以F3mAb为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行 3轮生物亲和淘选 ;用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过 3轮生物淘选 ,能被抗体捕获的噬菌体克隆为 2 1/ 2 2。ELISA测定显示 ,筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明 ,7个阳性克隆氨基酸序列相同 ,均为 MHGPTKNQMWHT ;同源性分析显示 ,该序列与HTNV/SEOVM蛋白G2区第 75 0~ 75 9位氨基酸有较高的同源性。结论 本研究为基于表位水平的HFRSV特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要的依据分析。结果 通过 3轮生物淘选 ,能被抗体捕获的噬菌体克隆为 2 1/ 2 2。ELISA测定显示 ,筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明 ,7个阳性克隆氨基酸序列相同 ,均为 MHGPTKNQMWHT ;同源性分析显示 ,该序列与HTNV/SEOVM蛋白G2区第 75 0~ 75 9位氨基酸有较高的同源性。 展开更多
关键词 MAB F3 特异性结合肽 汉坦病毒 噬菌体展示文库 抗原表位 ELISA
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利用体内噬菌体展示技术筛选及鉴定肺癌特异性结合肽 被引量:2
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作者 潘琴 石磊 +7 位作者 潘雪刁 冯冰虹 巫玮 王素军 王桂香 王来友 金桂芳 臧林泉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期68-71,共4页
目的利用体内噬菌体展示技术筛选并鉴定与肺癌特异性结合的多肽。方法用肺癌细胞A549接种裸鼠复制荷瘤动物模型,将随机肽库尾静脉注入裸鼠体内,循环15 min后取肿瘤组织中结合的噬菌体,如此进行3轮体内筛选后挑取噬菌体克隆,ELISA初步鉴... 目的利用体内噬菌体展示技术筛选并鉴定与肺癌特异性结合的多肽。方法用肺癌细胞A549接种裸鼠复制荷瘤动物模型,将随机肽库尾静脉注入裸鼠体内,循环15 min后取肿瘤组织中结合的噬菌体,如此进行3轮体内筛选后挑取噬菌体克隆,ELISA初步鉴定噬菌体克隆对肺癌细胞的亲和力、特异性。将阳性噬菌体克隆扩增、测序获得外源多肽氨基酸序列,化学方法合成多肽,鉴定多肽对肺癌细胞和组织的亲和力、特异性。结果ELISA结果显示,随机挑选的20个噬菌体单克隆中,1个对A549具有很强亲和力。测序获得多肽,命名为zp2。化学合成多肽zp2。竞争抑制、细胞免疫荧光和组织免疫荧光实验结果表明多肽zp2与肺癌细胞A549及肺癌组织特异性结合。结论利用体内噬菌体展示技术筛选出与肺癌细胞A549特异性结合的多肽,为肺癌诊断及治疗药物的研制奠定基础。 展开更多
关键词 体内噬菌体展示技术 A549 噬菌体随机 特异性结合肽
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噬菌体展示技术筛选人乳腺髓样癌细胞特异性结合肽 被引量:3
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作者 张帆 贾昕 +3 位作者 姚红 逯晓青 郭超 杨晓峰 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第2期159-162,共4页
目的利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽。方法培养人乳腺髓样癌Bcap-37细胞作为靶细胞,人正常乳腺上皮细胞MCF-10A为吸附细胞,将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞进行减性体... 目的利用噬菌体随机七肽库体外筛选与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽。方法培养人乳腺髓样癌Bcap-37细胞作为靶细胞,人正常乳腺上皮细胞MCF-10A为吸附细胞,将噬菌体展示随机七肽库与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞进行减性体外筛选,用ELISA法鉴定噬菌体对人乳腺癌Bcap-37细胞的亲和力。提取亲和力较高的单克隆噬菌体DNA,测定DNA序列并翻译出相应的氨基酸序列,进行同源性分析。结果利用噬菌体随机七肽库通过4轮减性筛选获得了与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞特异结合的小分子多肽。ELISA法表明,第1,3,5,6,8,12,14,16,17,18和20号单克隆噬菌体与人乳腺髓样癌Bcap-37细胞有很强的亲和力和特异性。测序结果显示,重复性最高的序列为LXRNTNX。结论利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合的小分子多肽LXRNTNX,经检索该肽段与已知蛋白尚无同源性,因此它很有可能成为乳腺癌的早期诊断和靶向治疗新的靶点。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 乳腺癌 BCAP-37 体外筛选 特异性结合肽
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丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶特异性结合肽的筛选和鉴定 被引量:1
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作者 杜桂鑫 侯利华 +2 位作者 陈万荣 张永国 王海涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期298-304,共7页
丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶在病毒复制和包装中的重要作用使其成为特异性抗病毒药物研究的首选靶标。根据丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,用柔性连接子连接NS3丝氨酸蛋白酶结构域和NS4A的核心序列 ,构建成单链丝氨酸蛋白酶基因并且在大肠杆... 丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶在病毒复制和包装中的重要作用使其成为特异性抗病毒药物研究的首选靶标。根据丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,用柔性连接子连接NS3丝氨酸蛋白酶结构域和NS4A的核心序列 ,构建成单链丝氨酸蛋白酶基因并且在大肠杆菌中获得高水平的可溶性表达 ,纯化后的目的蛋白能够切割重组蛋白底物NS5ab。随后 ,以单链丝氨酸蛋白酶为靶分子对噬菌体展示的随机十二肽库进行了三轮淘筛 ,挑选的 44个克隆中有 3 7个克隆能够特异性地结合丝氨酸蛋白酶 ,并且这种结合作用为竞争性ELISA试验结果所支持。对 1 3个克隆进行序列测定 ,得到 6种序列 ,它们在氨基酸组成上存在明显偏性 ,富含组氨酸和色氨酸 ,缺乏酸性氨基酸 ; 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丝氨酸蛋白酶 特异性结合肽 筛选 鉴定 噬菌体展示
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肺癌细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定 被引量:1
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作者 潘琴 石磊 +3 位作者 潘雪刁 巫玮 金桂芳 臧林泉 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第33期27-28,共2页
目的筛选能与肺癌细胞特异性结合的多肽并初步鉴定其亲和力和特异性。方法用人肺癌细胞A549使裸鼠致瘤,尾静脉注射肽库。取荷瘤鼠的肿瘤组织,用体内噬菌体展示技术进行筛选;经过3轮体内筛选,获得在肿瘤组织中富集的噬菌体;利用ELISA和... 目的筛选能与肺癌细胞特异性结合的多肽并初步鉴定其亲和力和特异性。方法用人肺癌细胞A549使裸鼠致瘤,尾静脉注射肽库。取荷瘤鼠的肿瘤组织,用体内噬菌体展示技术进行筛选;经过3轮体内筛选,获得在肿瘤组织中富集的噬菌体;利用ELISA和细胞免疫化学DAB染色法初步鉴定各克隆亲和力、特异性;对阳性克隆行DNA测序,利用生物信息学对此多肽进行分析、比对。结果随机挑选的10个单克隆中,8个均对A549细胞具有较高亲和力,其中3号克隆亲和力最高,其可特异性结合肺癌细胞A549和NCI-H1299,且对A549的亲和力强于NCI-H1299。DNA测序结果显示该序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank DNA序列数据库和Swiss-Prot蛋白数据库中的已知基因和蛋白无同源性。结论筛选出了能与肺癌细胞特异性结合的多肽。 展开更多
关键词 噬菌体体内展示技术 噬菌体库 肺癌细胞 特异性结合肽
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肝癌特异性结合肽的筛选及鉴定
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作者 朱小华 吴华 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期340-343,i002,共5页
目的 探讨利用噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合多肽或肝癌细胞优势结合多肽的可行性。方法 ①利用噬菌体随机十二肽库 ,对人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L0 2进行 4轮差异筛选、富集 ,获得与肝癌细胞亲和的噬菌体克隆。②... 目的 探讨利用噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合多肽或肝癌细胞优势结合多肽的可行性。方法 ①利用噬菌体随机十二肽库 ,对人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L0 2进行 4轮差异筛选、富集 ,获得与肝癌细胞亲和的噬菌体克隆。②用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定其与肝癌细胞、正常肝细胞的亲和力 ,进一步筛选出高度亲和肝癌细胞的特异性阳性噬菌体克隆。比较其与其他肿瘤细胞的亲和力。③提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定 ,获得与肝癌细胞亲和的多肽序列。④用免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示阳性多肽序列的噬菌体与肝癌细胞的结合部位。⑤根据筛选的多肽序列合成十六肽WH16 ,利用竞争抑制实验鉴定其与肝癌细胞的结合。结果 筛选及ELISA结果示得到与肝癌细胞特异性结合并内化入肝癌细胞的噬菌体克隆 ,测序结果示 5 6 6 7%的被检噬菌体展示相同的多肽序列FLLEPHLMDTSM ,推测FLEP是肝癌细胞特异性结合肽的基序。免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体与肝癌细胞特异性结合并内化入细胞内。竞争抑制实验示WH16能有效抑制展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体克隆与肝癌细胞的结合。结论 利用噬菌体随机肽库获得能与肝癌细胞特异性结合的多肽序列FLLE PHLMDTSM 。 展开更多
关键词 肝癌细胞 噬菌体 体克 序列 特异性结合肽 阳性 筛选 克隆 竞争抑制 DNA序列
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骨肿瘤细胞特异性结合肽修饰固体脂质纳米粒的肿瘤靶向性研究
7
作者 宋玉光 《中国生化药物杂志》 CAS 北大核心 2014年第4期53-55,共3页
目的制备骨肿瘤细胞特异性结合肽—SLT肽修饰的固体脂质纳米粒(SLT peptide modified solid lipid nanoparticles,SLT-SLNs),研究其与人骨肉瘤MG63细胞的亲和力和肿瘤靶向性。方法细胞摄取实验研究肿瘤细胞对SLT-SLNs的摄取。构建骨肿... 目的制备骨肿瘤细胞特异性结合肽—SLT肽修饰的固体脂质纳米粒(SLT peptide modified solid lipid nanoparticles,SLT-SLNs),研究其与人骨肉瘤MG63细胞的亲和力和肿瘤靶向性。方法细胞摄取实验研究肿瘤细胞对SLT-SLNs的摄取。构建骨肿瘤裸鼠异位模型,研究不同固体脂质纳米粒的体内靶向性。结果 SLT-SLNs的平均粒径为(115.7±8.7)nm,多分散性系数为0.12,Zeta电位为(13±2.25)mV。细胞摄取实验结果显示MG63细胞对SLT-SLNs的摄取效率是SLNs的4.4倍(P<0.01);体内活体成像实验结果显示SLT-SLNs组荷瘤裸鼠肿瘤组织的荧光强度明显强于SLNs组。结论 SLT肽修饰的固体脂质纳米粒具有良好的骨肉瘤细胞亲和力,是一种潜在的高效骨肿瘤靶向给药系统。 展开更多
关键词 骨肿瘤细胞特异性结合肽 SLT 固体脂质纳米粒 药物靶向
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利用体内噬菌体展示技术筛选膀胱癌特异性结合肽 被引量:12
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作者 罗俊茜 张帆 +5 位作者 杨晓峰 罗芳 刘杰昊 庞建智 闫三华 张小雷 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期509-513,共5页
目的:利用体内噬菌体展示技术筛选与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽。方法:将人膀胱移行细胞癌细胞BIU87接种于裸鼠体内,制备膀胱癌荷瘤小鼠模型,尾静脉注射噬菌体展示环七肽库,然后筛选与膀胱移行细胞癌特异性结合的含外源多... 目的:利用体内噬菌体展示技术筛选与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽。方法:将人膀胱移行细胞癌细胞BIU87接种于裸鼠体内,制备膀胱癌荷瘤小鼠模型,尾静脉注射噬菌体展示环七肽库,然后筛选与膀胱移行细胞癌特异性结合的含外源多肽的噬菌体,经过3轮体内筛选后,免疫组织化学法及ELISA法鉴定单克隆噬菌体对BIU87的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体单链DNA进行测序,并推导出外源多肽氨基酸序列,化学合成多肽、制备分子探针后采用激光扫描共聚焦显微镜术及流式细胞术鉴定多肽对膀胱癌细胞和组织的特异性。结果:3轮体内筛选后,噬菌体富集率达到4.334×102倍。免疫组化结果显示,肿瘤组织中噬菌体肽的含量随着每一轮筛选呈增长趋势,且结合逐渐增强,同时由于噬菌体经肝、肾代谢,可见肝脏结合大量非特异性的噬菌体。ELISA结果显示,随机挑选的30个单克隆噬菌体斑中,有24个阳性噬菌体,其中10个噬菌体对BIU87有较强的亲和力,对其测序并推导出3种多肽序列,重复率最高的序列CSSPIGRHC(8/10)命名为NYZL1。化学合成FITC-C6-NYZL1,通过激光扫描共聚焦显微镜术、流式细胞术均证明多肽NYZL1可以特异性结合膀胱癌细胞。结论:利用体内噬菌体展示技术筛选出了与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽NYZL1,为膀胱癌早期诊断和靶向治疗提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 膀胱癌 特异性结合肽
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内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定 被引量:4
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作者 袁利华 刘承武 +5 位作者 姚琦 牛茂昌 李志杰 邓鹏 刘靖华 姜勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2191-2194,共4页
目的:利用体内噬菌体展示技术筛选能与内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合的短肽。方法:尾静脉注射噬菌体环七肽库至内毒素休克小鼠体内,循环10min后,回收肝脏中的噬菌体。将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此为起始物进行下一轮筛选。经过... 目的:利用体内噬菌体展示技术筛选能与内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合的短肽。方法:尾静脉注射噬菌体环七肽库至内毒素休克小鼠体内,循环10min后,回收肝脏中的噬菌体。将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此为起始物进行下一轮筛选。经过4轮筛选后,将所得文库与正常小鼠做一次差减筛选。随机挑取噬菌体单克隆进行测序,序列分析后,进行噬菌体的体内回输实验及免疫组化分析,验证所筛得噬菌体克隆的导向情况。结果:经过4轮体内筛选,肝脏中噬菌体回收率逐步提高,证明噬菌体文库在肝脏血管中得到有效富集。DNA测序后发现,10条序列中有5条为LTTWAPA,体内回输实验和免疫组化实验均证实表达该序列的噬菌体能有效地靶向于休克小鼠肝脏血管内皮细胞。结论:筛选到的短肽LTTWAPA能特异性结合于内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞,有可能对内毒素休克的治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 噬菌体展示 休克 脓毒性 内皮细胞 特异性结合肽
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人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞特异性结合肽的筛选及鉴定 被引量:3
10
作者 左琪 郭超 +2 位作者 樊卫平 杨晓峰 张帆 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1023-1030,共8页
背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一。多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率。本研究旨在利用体内噬菌体展示技... 背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是最常见的肺癌组织学类型,也是病死率最高的恶性肿瘤之一。多肽作为光学分子成像探针的主体可以实现肿瘤的早期筛查及诊断,提高患者存活率。本研究旨在利用体内噬菌体展示技术筛选与人NSCLC细胞NCI-H1299高度结合的小分子多肽并通过体外实验鉴定其结合特异性。方法制备NCI-H1299细胞荷瘤裸鼠模型,用噬菌体展示环七肽库进行3轮体内筛选后随机挑取噬菌体克隆,免疫组织化学法及酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)鉴定噬菌体克隆对NCI-H1299细胞的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体DNA测序获得外源多肽氨基酸序列,将重复率最高的序列化学合成多肽并进行异硫氰酸荧光素(fluorescein,FITC)标记,制备光学分子探针,初步鉴定其对NCI-H1299细胞的特异性。结果经3轮体内筛选后噬菌体富集率是首轮的341.3倍;免疫组织化学染色显示随着筛选次数增加,肿瘤组织中结合的噬菌体不断增加,且结合量明显高于正常组织;ELISA结果显示随机挑取的30个噬菌体克隆中20个为阳性克隆,经测序后将重复率最高的序列合成多肽并命名为NSP1;四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT)、细胞划痕实验表明NSP1不会影响细胞增殖、迁移;流式细胞术、细胞免疫荧光结果表明NSP1可与NCI-H1299细胞特异性结合。结论利用体内噬菌体展示技术成功得到了与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽NSP1,为NSCLC的早期诊断及靶向治疗奠定了研究基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 肺肿瘤 NCI-H1299细胞 特异性结合肽
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宫颈癌HeLa细胞特异性结合肽的筛选及鉴定 被引量:1
11
作者 何晓娟 郭彩霞 +1 位作者 杨陈 梁晓秋 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期173-176,共4页
背景与目的:宫颈癌的分子靶向治疗具有很好的疗效,同时可以显著减少抗癌药物对人体自身的损伤,因此备受关注。本研究利用噬菌体体内展示技术筛选及鉴定宫颈癌特异性结合肽,将有可能成为化疗药物的靶向载体,为宫颈癌靶向药物治疗奠定基... 背景与目的:宫颈癌的分子靶向治疗具有很好的疗效,同时可以显著减少抗癌药物对人体自身的损伤,因此备受关注。本研究利用噬菌体体内展示技术筛选及鉴定宫颈癌特异性结合肽,将有可能成为化疗药物的靶向载体,为宫颈癌靶向药物治疗奠定基础。方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞接种裸鼠,建立肿瘤动物模型。将随机肽库尾静脉注入裸鼠体内,循环15 min,心脏灌注后回收肿瘤组织噬菌体扩增、纯化并以此作为起始物进行第2轮的筛选,如此进行3轮体内筛选后挑取噬菌体克隆,进行免疫组化及ELISA实验,初步鉴定噬菌体克隆对宫颈癌细胞的亲和力及特异性,并将具有强亲和力的克隆进行测序。结果:ELISA结果显示,随机挑选10个噬菌体单克隆中8个克隆对HeLa细胞具有很强的亲和力,将这8个克隆进行测序,获得相同短肽序列LLRSTGF。结论:利用噬菌体展示技术筛选出与宫颈癌细胞HeLa特异性结合的短肽,进一步与化疗药物结合,为宫颈癌靶向治疗提供新的方法。 展开更多
关键词 噬菌体体内展示 宫颈癌 HELA细胞 噬菌体随机 特异性结合肽
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人肺癌细胞特异性结合肽的筛选与验证
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作者 樊敏杰 金瑾 韩化敏 《肿瘤基础与临床》 2017年第6期472-475,共4页
目的筛选人肺癌细胞特异性结合肽,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制提供依据。方法以正常人支气管上皮细胞16HBE为吸附细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,利用噬菌体展示肽库经4轮差减吸附淘筛,采用细胞ELISA鉴定噬菌体与肺癌细胞结合的特异... 目的筛选人肺癌细胞特异性结合肽,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制提供依据。方法以正常人支气管上皮细胞16HBE为吸附细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,利用噬菌体展示肽库经4轮差减吸附淘筛,采用细胞ELISA鉴定噬菌体与肺癌细胞结合的特异性并测序获得多肽序列。结果经4轮筛选噬菌体富集率逐级递增,共挑选394株噬菌体利用ELISA验证,将特异性较好的5株噬菌体克隆基因测序,获得重复率最高的序列(4/5)。结论利用噬菌体展示技术筛选出了与人肺癌细胞癌特异性结合的小分子多肽,为肺癌患者的早期诊断和靶向治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示 肺癌 异性结合
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利用体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性结合肽 被引量:11
13
作者 杜冰 于静 +3 位作者 周忠良 章平 郁萌 钱旻 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期645-647,共3页
目的筛选人源肝癌组织特异性结合短肽。方法体外培养人源肝癌细胞株BEL-7402,建立荷瘤裸鼠模型。尾静脉注射噬菌体12肽文库至荷瘤裸鼠体内,循环20 m in后回收肿瘤组织中噬菌体,同时取正常对照组织进行噬菌体效价测定和免疫组化观察。将... 目的筛选人源肝癌组织特异性结合短肽。方法体外培养人源肝癌细胞株BEL-7402,建立荷瘤裸鼠模型。尾静脉注射噬菌体12肽文库至荷瘤裸鼠体内,循环20 m in后回收肿瘤组织中噬菌体,同时取正常对照组织进行噬菌体效价测定和免疫组化观察。将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此作为起始物进行下一轮筛选。经过3轮体内筛选,得到与肝癌组织或细胞特异结合的肽段。随机挑选噬菌体单克隆进行测序,分析序列同源性后进行体外细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)和体内回输实验,验证噬菌体克隆的导向性。结果经过3轮体内筛选,瘤组织中噬菌体的回收率逐步提高,回收量随着输入量的增加迅速增加,而每轮筛选肝组织中的噬菌体回收量始终保持在一个恒定范围,并不随输入量的增加而增加。免疫组化结果显示,第3轮筛选后,瘤组织中的噬菌体得到高水平富集,同时其他组织的非特异性结合降至最低。肝癌细胞特异性结合最强的是A54号单克隆,A67、B2号单克隆次之。B2的导向效果最好,A54次之。通过对噬菌体单克隆的序列分析,初步确定了PSS/PTT基序。结论利用体内噬菌体展示技术,可以成功筛选到与肝癌细胞或组织特异结合的噬菌体肽。 展开更多
关键词 体内噬菌体展示技术 肝肿瘤 特异性结合肽
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应用噬菌体肽文库筛选McAb F3特异性结合肽 被引量:3
14
作者 王长军 唐家琪 +3 位作者 李先富 潘秀珍 白薇 郭恒彬 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期63-66,共4页
目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽。方法 采用protein A亲和层析纯化的F3单抗为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行生物亲和淘洗 ;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ... 目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽。方法 采用protein A亲和层析纯化的F3单抗为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行生物亲和淘洗 ;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过 3轮生物淘洗 ,能被抗体捕获的噬菌体克隆为 91.7% (11 12 ) ;ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽能与F3单抗特异性结合 ;序列分析表明 7个阳性克隆氨基酸序列相同 ,均为 MHGPTKNQMWHT ,同源性分析显示该序列与HTNV SEOVM蛋白G2区第 75 0~ 75 9位氨基酸有较高的同源性。结论 获得了具有良好结合活性的模拟表位肽 ,为基于表位水平的HFRSV(肾病综合征出血热病毒 )特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要依据。 展开更多
关键词 噬菌体展示文库 McAbF3 特异性结合肽 汉滩病毒 中和抗体
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体内筛选骨肉瘤血管内皮特异性结合肽 被引量:4
15
作者 管明强 史占军 +2 位作者 姜勇 李朋 杨澜波 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1763-1763,共1页
体内噬菌体技术则将噬菌体展示技术与动物模型相结合,可以更好地进行肿瘤组织特异性结合肽的筛选。Pasqualini等和Wadih等利用该方法筛选出了特异结合脑和肾的噬菌体克隆,1997年他们成功筛选到一条恶性黑色素瘤及乳腺癌上整合蛋白的... 体内噬菌体技术则将噬菌体展示技术与动物模型相结合,可以更好地进行肿瘤组织特异性结合肽的筛选。Pasqualini等和Wadih等利用该方法筛选出了特异结合脑和肾的噬菌体克隆,1997年他们成功筛选到一条恶性黑色素瘤及乳腺癌上整合蛋白的特异性亲和短肽,把该肽与化疗药物耦联后进行动物实验,收到了很好的抗肿瘤效果。本研究首先制作骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型,然后利用体内噬菌体技术,筛选骨肉瘤血管内皮的特异性结合肽。 展开更多
关键词 特异性结合肽 体内筛选 血管内皮 骨肉瘤 噬菌体展示技术 恶性黑色素瘤 荷瘤裸鼠模型 抗肿瘤效果
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体内噬菌体展示技术筛选人髓样乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合肽及其性质、结合效果研究 被引量:1
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作者 郭超 左琪 +1 位作者 杨晓峰 张帆 《肿瘤研究与临床》 CAS 2020年第2期79-84,共6页
目的探讨体内噬菌体展示技术筛选的人髓样乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合肽的性质和结合效果,为乳腺癌早期诊断提供分子靶向探针。方法制备人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型,采用噬菌体环七肽库进行3轮体内筛选。免疫组织化学法检测... 目的探讨体内噬菌体展示技术筛选的人髓样乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合肽的性质和结合效果,为乳腺癌早期诊断提供分子靶向探针。方法制备人髓样乳腺癌Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型,采用噬菌体环七肽库进行3轮体内筛选。免疫组织化学法检测筛选的噬菌体在肿瘤及正常组织中的分布情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定单克隆噬菌体对Bcap-37细胞的亲合力。提取阳性单克隆噬菌体DNA并测序,选取重复率高的序列合成多肽,制备光学分子探针,应用荧光分子成像验证合成的多肽在荷瘤小鼠体内对乳腺移植瘤的特异性和靶向性。结果第3轮体内筛选的噬菌体回收率为第1轮的107.2倍。免疫组织化学结果显示,随筛选轮次增加,肿瘤组织中结合的噬菌体依次增加;肿瘤组织结合的噬菌体多于正常组织(肺脏、骨骼肌、肝脏、肾脏),肿瘤组织切片扫描图像的吸光度(A)值均较正常组织高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。ELISA结果显示,随机选取的50个单克隆噬菌体中,22个为阳性(亲合力≥2)。阳性单克隆噬菌体DNA测序分析后,得到4条有重复的氨基酸序列,选择重复率最高的氨基酸序列CSPLNTRFC,化学合成异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CSPLNTRFC多肽。Bcap-37细胞荷瘤裸鼠模型体内验证实验显示,FITC-CSPLNTRFC多肽能明显富集在乳腺移植瘤组织。结论利用体内噬菌体展示技术能够筛选出可与人髓样乳腺癌Bcap-37细胞特异性结合的多肽CSPLNTRFC,有助于进行乳腺癌早期诊断的体外研究。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 噬菌体展示 特异性结合肽
原文传递
肺癌血清中特异性结合多肽的筛选
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作者 周捷 臧林泉 +6 位作者 冯文彬 潘雪刁 王军业 郭桐 王秀芳 田亮 刘海洋 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期936-939,共4页
目的以肺癌血清从噬菌体展示肽库中筛选出能够用于血清学筛查和肺癌病理分型的多肽。方法利用M13噬菌体随机12肽展示肽库对24例临床确诊肺癌患者的血清和24例体检者的血清进行4轮吸附-洗脱的筛选。挑取筛选后的噬菌体单克隆,皆以血清和... 目的以肺癌血清从噬菌体展示肽库中筛选出能够用于血清学筛查和肺癌病理分型的多肽。方法利用M13噬菌体随机12肽展示肽库对24例临床确诊肺癌患者的血清和24例体检者的血清进行4轮吸附-洗脱的筛选。挑取筛选后的噬菌体单克隆,皆以血清和细胞株进行试验,选出特异性及确诊率较高的单克隆。目标单克隆通过DNA测序确定其所表达的多肽序列,进而人工合成带FITC标记的多肽,以肺癌细胞、正常肺细胞和肺癌组织切片进行荧光成像检测。结果随机挑取30个经过4轮筛选的噬菌体单克隆,通过血清和细胞株的试验,筛选出6个特异性和确诊率较高的单克隆,其中单克隆ZZ-8肺癌血清确诊率达到41.6%,且鳞癌的比例较高。ZZ-8经DNA测序分析,确定其表达的多肽序列为:APTPSTQMNLLP。FITC标记的多肽在细胞和组织切片的荧光成像检测中,均显示良好的特异性。结论人工合成的多肽ZZ-8能够为研发肺癌诊断试剂奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示 肺癌血清 异性结合
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人前列腺癌细胞特异性结合短肽在人体组织的分布
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作者 胡金秋 李伟 +5 位作者 张丽红 张国荣 刘志晶 董欣洁 张玉辉 李一雷 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第12期2070-2073,共4页
目的观察人前列腺癌转移相关蛋白结合短肽在人体各组织的分布,为进一步探讨前列腺癌的可能转移机制提供实验证据,为该短肽在前列腺癌抗肿瘤导向治疗的应用提供形态学依据,探讨该短肽在未来临床应用的潜能。方法收集尸检标本12例,含正常... 目的观察人前列腺癌转移相关蛋白结合短肽在人体各组织的分布,为进一步探讨前列腺癌的可能转移机制提供实验证据,为该短肽在前列腺癌抗肿瘤导向治疗的应用提供形态学依据,探讨该短肽在未来临床应用的潜能。方法收集尸检标本12例,含正常人体组织16种,前列腺活检标本11例。通过免疫组织化学方法系统地鉴定此特异性短肽在人体各种组织、器官的分布以及在前列腺增生时前列腺组织中的表达情况。结果人前列腺癌细胞转移相关蛋白的特异性结合短肽与被覆上皮、肌组织、神经组织、结缔组织无结合;与大多数腺上皮无结合,但与胰岛细胞亲和阳性率为50%、胃底腺壁细胞亲和阳性率为60%;在良性前列腺增生时无表达,但在PC-3M细胞膜上有阳性表达。结论该短肽可与前列腺癌细胞表面特异性蛋白结合,而与大部分人体正常组织无结合,具有良好的特异性,证明该短肽具有临床应用的潜能。 展开更多
关键词 PC-3M 异性结合 导向治疗
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多肽-2与阿尔茨海默病β-分泌酶特异性结合的研究
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作者 朱瑞 金丽娟 +1 位作者 高小芳 王方 《宁夏医学杂志》 CAS 2018年第9期792-794,I0001,共4页
目的在细胞水平上鉴定多肽-2(Peptide-2)与阿尔茨海默病β-分泌酶(BACE1)结合的特异性。方法合成经过二硫键修饰的Peptide-2,采用激光扫描共聚焦显微镜术及流式细胞术鉴定Peptide-2对表达BACE1的人源胚胎肾293(HEK293)细胞的结合特异性... 目的在细胞水平上鉴定多肽-2(Peptide-2)与阿尔茨海默病β-分泌酶(BACE1)结合的特异性。方法合成经过二硫键修饰的Peptide-2,采用激光扫描共聚焦显微镜术及流式细胞术鉴定Peptide-2对表达BACE1的人源胚胎肾293(HEK293)细胞的结合特异性。结果激光扫描共聚焦显微镜显示Peptide-2在表达BACE1的HEK293细胞上有高富集荧光亮点(红色荧光),流式细胞术鉴定出Peptide-2与HEK293细胞中BACE1结合的荧光强度值为102. 352,PBS对照组的荧光强度值为16. 29,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Peptide-2在细胞水平能特异结合至BACE1,为阿尔茨海默病β-分泌酶抑制剂的筛选提供了一个新的研究方向。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Β-分泌酶 特异性结合肽
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PC-3M细胞特异性结合短肽在人体组织结合情况与意义
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作者 胡金秋 杨铭 +2 位作者 宋晓环 李一雷 张玫琦 《当代医学》 2012年第5期23-24,共2页
目的观察人前列腺癌PC-3M细胞特异性结合短肽的在人体各种组织中的结合情况,为该短肽在前列腺癌抗肿瘤导向治疗的应用提供形态学依据,探讨该短肽在未来临床应用的潜能。方法用免疫组织化学染色方法鉴定此结合短肽的配体蛋白在人体各种... 目的观察人前列腺癌PC-3M细胞特异性结合短肽的在人体各种组织中的结合情况,为该短肽在前列腺癌抗肿瘤导向治疗的应用提供形态学依据,探讨该短肽在未来临床应用的潜能。方法用免疫组织化学染色方法鉴定此结合短肽的配体蛋白在人体各种组织、器官的分布情况。结果该特异性结合短肽与被覆上皮、肌组织、神经组织、结缔组织无结合;与大多数腺上皮无结合,但与胰岛细胞亲和阳性率为40.0%、胃底腺壁细胞亲和阳性率为50.0%。结论该短肽具有良好的特异性,证明其具有临床应用的潜能。 展开更多
关键词 PC-3M 前列腺癌 导向治疗 异性结合
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