精子性别化对乳牛性别控制的研究试验

试验于1991年在华南农业大学实验乳牛场进行,初步成功地获得了乳牛雌性控制率达81.8％的国内外先进水平,计有10头乳牛产犊:2雄、9雌,其中1头产异性双犊。研究试验结果包括三个方面:一是研制成具有一定的纯度和工作效价的H-Y抗血清;二是这种H-Y抗血清IgG确实存在有抑制牛Y染色体精子的基因抗体;三是掌握H-Y抗血清IgG与牛精液发生“感作”和导致正常受胎的技术方法。试验应用免疫遗传学原理,进一步证明H-Y抗血清IgG有抑制牛Y染色体精子的受精能力而获得较高的雌性控制率,具有很大的生物科学与经济价值。

不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测

目的研究模拟肺癌患者血浆DNA中APC基因甲基化最低检测限,确定不同甲基化检测技术在早期肺癌诊断中的价值。方法用普通甲基化特异性基因扩增(methylation specific PCR,MSP)方法检测肺癌细胞株NCI-H460细胞APC基因,以酚-氯仿经典方法提取NCI-H460细胞DNA,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入相同的健康人血浆200μl中去,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟血浆样本中提取血浆DNA。对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以Sybr-GreenⅠ为染料进行实时荧光定量MSP检测,同时进行普通MSP检测。结果NCI-H460细胞中的APC基因启动子1A区719位点存在甲基化,实时荧光定量MSP检测模拟肺癌患者血浆APC基因甲基化的最低检测限为在200μl血浆中能检测出102个肿瘤细胞的DNA,而以普通MSP检测,200μl血浆中需投入103个以上肿瘤细胞的DNA才有弱阳性条带。实时荧光定量MSP检测技术比普通MSP检测的敏感性至少高出10倍。结论实时荧光定量MSP比普通MSP检测灵敏度高,该技术用于肺癌患者血浆DNA甲基化检测,可能有助于肺癌早期诊断。

胃腺癌患者术前腹腔冲洗液细胞中APC基因异常甲基化状态分析

目的探讨胃腺癌(GAC)患者术前腹腔冲洗液细胞DNA中结肠腺瘤性息肉(APC)基因启动子区域5'-CpG岛异常甲基化及其临床意义。方法用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应(real time-MSP)检测92例GAC患者术前腹腔冲洗液细胞中APC基因异常甲基化状况,分析APC基因异常甲基化与患者临床病理因素及预后之间的关系。结果在92例GAC患者术前腹腔冲洗细胞标本中,有49例(53.26%)APC基因异常甲基化,其中28例(30.43%)完全甲基化,21例(22.83%)半甲基化。APC基因异常甲基化分别与GAC的生长方式、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有统计学意义(P<0.05);生存分析表明,胃癌患者中APC基因异常甲基化组的中位生存时间为21.5个月,非甲基化组为41.5个月,差异有统计学意义(P<0.05),COX回归分析显示APC基因异常甲基化与淋巴结转移、远处转移及TNM分期影响GAC患者的预后。结论术前腹腔冲洗液细胞DNA中APC基因异常甲基化可反映GAC进展状况,并提示患者预后不良。

Wnt通路基因启动子甲基化在非小细胞肺癌诊断中的作用

目的:对Wnt信号通路中的基因进行分析以改善其作为诊断非小细胞肺癌(NSCLC)生物标志物的作用。方法:使用荧光定量甲基化特异性聚合酶链式反应(qMSP)分析SFRP1、SFRP2、PRKCB和WIF14种基因启动子在111例NSCLC组织及其配对的癌旁组织中甲基化水平表达,并结合临床资料及TCGA数据库进行分析。结果:SFRP1、SFRP2、PRKCB和WIF1甲基化水平在肺癌组织中的表达较相应配对的癌旁组织中的表达高,且SFRP1、SFRP2的表达水平在男性患者较女性高;结合4种基因启动子甲基化水平对NSCLC诊断的敏感性和特异性分别为83.3%和96.0%。结论:结合分析Wnt信号通路的4种基因的甲基化水平可用于NSCLC的早期诊断。

食管癌中hMSH2启动子区CpG岛过甲基化研究

[目的]探讨hMSH2甲基化在食管癌发生发展中的作用。[方法]应用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应(real-time MSP)分别检测130例食管癌患者癌组织及癌旁正常组织中hMSH2甲基化情况,并分析其与临床病理等参数及预后之间的关系。[结果]在130例原发性食管癌组织中,hMSH2甲基化的有63例(48.5%),与之相对应的癌旁正常组织中甲基化的有18例(13.8%)(P<0.05)。hMSH2高甲基化分别与患者的年龄、肿瘤远处转移及不良预后有关(P<0.05),而与患者性别、淋巴结转移及临床分期等无关(P>0.05)。[结论]hMSH2高甲基化是食管癌频发的分子事件,也是导致其错配修复功能缺陷的重要原因之一。hMSH2基因启动子区甲基化可能在老龄化及食管癌的发生发展过程中发挥重要作用,是一个潜在的预后相关因子。