参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死大鼠NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响

目的探讨参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组(0.9 mg/kg)和联合组(倍他乐克0.9 mg/kg联合参附注射液6 mL/kg),每组10只,连续灌胃3周。检测造模前、造模后和治疗3周时大鼠血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。造模后和治疗3周时,比较各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)等心脏彩超参数以及心肌梗死面积。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及Western blot检测心肌梗死面积NLRP3、Caspase-1的mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组造模后和治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,倍他乐克组和联合组治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均降低,且联合组上述指标均低于倍他乐克组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附注射液辅助治疗AMI能够进一步减轻心肌细胞损伤,缩小梗死面积,抑制炎症反应和细胞焦亡活性。

血清SUMO特异性蛋白酶1/低氧诱导因子-1α通路对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者心血管事件结局的预测价值

目的探讨血清SUMO特异性蛋白酶1(SENP-1)/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者发生心血管事件(CVE)结局的预测价值。方法选取2018年1月至2021年3月于医院确诊为OSAHS的男性患者80例,根据睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)将其分为轻度组(43例)、中度组(22例)和重度组(15例),另选择同期在本院体检中心进行体检的43例正常健康男性为正常组。另外,根据随访1年期间内是否发生心血管事件(CVE)将80例OSAHS患者分为CVE组(28例)和非CVE组(52例)。比较患者临床基线资料、常规生化指标;采用ELISA法检测患者血清中SENP-1/HIF-1α通路相关蛋白SENP-1、HIF-1α及VEGF水平;采用多因素logistic回归分析OSAHS患者发生CVE的危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SENP-1、HIF-1α、VEGF水平对OSAHS患者发生CVE的预测价值。结果与轻度组比较,中度组和重度组患者体质指数、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、三酰甘油、血肌酐、AHI及Ts90%值均显著升高(P<0.05),LSpO2值显著降低(P<0.05),其中重度组最为显著(P<0.05)。与轻度组比较,中度组和重度组患者血清中SENP-1、HIF-1α、VEGF水平明显升高(P<0.05),其中重度组最为显著;与非CVE组比较,CVE组患者血清中SENP-1、HIF-1α、VEGF水平明显升高(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,血清SENP-1、HIF-1α、VEGF水平是OSAHS患者发生CVE的独立危险因素(OR=1.133、1.090、1.066,均P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清SENP-1、HIF-1α、VEGF水平对OSAHS患者发生CVE均有预测价值,ROC曲线下面积分别为0.890、0.837、0.802(P<0.05)。结论血清中SENP-1、HIF-1α、VEGF水平升高是OSAHS患者发生CVE的独立危险因素,对OSAHS患者发生CVE具有预测价值。

肺癌中SUMO特异性蛋白酶1相关研究进展

SUMO特异性蛋白酶1 (SENP1)目前被发现在大多数肿瘤中高表达,其异常表达可以影响癌症进展中的各种通路,进而影响肿瘤的发生发展。肺癌是目前全国发病率和死亡率最高的癌症,研究发现SENP1与肺癌放射治疗抗性、转移、铁死亡及预后等均有相关性,继续深入研究SENP1相关分子机制对肺癌治疗的发展至关重要。

SUMO特异性蛋白酶1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在胰腺癌发生、发展中的作用。方法收集胰腺癌组织及其配对癌旁正常组织各44份,采用免疫组化法、Western blotting法和RT-PCR法检测SENP1蛋白和mRNA表达,并分析其表达与患者临床病理参数的关系。结果胰腺癌组织中SENP1蛋白的相对表达量、阳性表达率分别为1.18±0.11、90.9%(40/44),其配对癌旁正常组织分别为0.57±0.04、13.6%(6/44),二者比较P均<0.01。胰腺癌组织中SENP1 mRNA的相对表达量、阳性表达率分别为79.33±2.33、93.2%(41/44),其配对癌旁正常组织分别为16.67±1.20、13.6%(6/44),二者比较P均<0.01。胰腺癌组织中SENP1阳性表达与患者病理分期、血管侵犯有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度和淋巴结转移无关(P均>0.05)。结论SENP1在胰腺癌组织中过表达,其过表达可促进胰腺癌的发生、发展。

SUMO特异性蛋白酶1在心肌组织缺血/再灌注损伤中的保护作用

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在心肌组织缺血/再灌注损伤中的保护作用。方法选取14例行体外循环心脏手术前、后的右心房组织,建立缺血再灌注小鼠模型,通过实时定量PCR检测患者和大鼠心肌组织SENP1的mRNA变化。对H9C2细胞株进行缺氧复氧处理后检测LDH释放率,观察细胞死亡情况。结果实时定量PCR结果显示,14例患者缺血再灌注后心肌组织内SENP1 mRNA含量为(4.845±1.248),较灌注前明显升高(P<0.01)。单纯缺血处理的小鼠心肌SENP1 mRNA含量较正常组小鼠略高,且随着灌注时间的延长,SENP1 mRNA含量呈逐渐递增的趋势。特异性siRNA敲除大鼠心肌细胞H9C2细胞内SENP1 48 h后SENP1mRNA水平降至对照组的30%以下,敲除SENP1的H9C2细胞在缺氧及复氧处理后LDH释放增加。结论SENP1在心肌缺血再灌注中有保护作用,缺乏SENP1可能会加重心肌损伤。

重组泛素样特异性蛋白酶1在大肠杆菌中的表达条件优化与分离纯化

目的确定重组泛素样特异性蛋白酶1(ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大肠杆菌中的最佳表达条件并进行分离纯化。方法采用DNA重组技术,构建重组质粒Ulp1-pET-28a,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导Ulp1原核表达,并从诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度方面确定其最佳表达条件,再以亲和层析法分离纯化Ulp1。结果SDS-PAGE分析表明,工程菌诱导温度为30℃、诱导时间为6 h、IPTG浓度为0.2 mmol/L时Ulp1表达量最高,表达量约为350 mg/L且成功进行了Ulp1的分离纯化。结论本研究成功进行了Ulp1原核表达条件的优化与分离纯化,为Ulp1在生物工程中的酶切应用奠定了实验基础。

小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1对脐静脉内皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及凋亡的影响。方法用20个感染复数的p LKO.1-SENP1-小发夹RNA(shRNA)-绿色荧光蛋白(GFP)干涉慢病毒(SENP1干涉组)和p PIG-U6-随机序列(scramble)-GFP对照慢病毒(GFP-SC对照组)感染HUVEC。病毒感染HUVEC 48 h后,用流式细胞仪检测慢病毒的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western蛋白质印迹法检测HUVEC内SENP1基因和蛋白表达水平。用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果 GFP-SC对照组和SENP1干涉组感染效率均>97%。与GFP-SC对照组比较,SENP1干涉组HUVEC SENP1基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。CCK8法测定结果表明,SENP1干涉组HUVEC增殖能力较GFP-SC对照组明显降低(P<0.01)。SENP1干涉组细胞迁移过Transwell小室的细胞数量明显低于GFP-SC对照组(P<0.01)。用低浓度血清(含2%胎牛血清)培养基诱导细胞凋亡24 h,SENP1干涉组细胞凋亡率即已升高到GFP-SC对照组的2倍左右(P<0.05);诱导凋亡至48 h,SENP1干涉组细胞凋亡率升高到对照组的3.2倍左右(P<0.05)。结论 HUVEC内SENP1表达水平的降低不仅可以显著抑制细胞增殖和迁移能力,亦可促进细胞凋亡。

SUMO特异性蛋白酶1和ERα在Ⅰ型子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)特异性蛋白酶1(SUMO specific protease 1,SENP1)和ERα在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达,并分析两者之间的相互关系。方法:收集Ⅰ型子宫内膜癌组织及其配对癌旁组织各50例,采用免疫组织化学法检测SENP1蛋白及雌激素受体(ERα)的表达,分析其表达与患者临床病理参数的关系。结果:Ⅰ型子宫内膜癌中SENP1蛋白在癌旁组织中的表达明显高于肿瘤组织。SENP1蛋白在高分化肿瘤中的表达明显高于低分化肿瘤组织。SENP1阳性表达与ERα表达呈正相关,而与患者的年龄、肿瘤浸润的深度、肿瘤分期及淋巴结转移无关。结论:SENP1在Ⅰ型子宫内膜癌的发生、发展中发挥重要作用,有望成为治疗子宫内膜癌的新靶点。

SUMO特异性蛋白酶1在动脉粥样硬化发病机制中的作用

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在小鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法采用主动脉整体和主动脉根部油红O染色以及主动脉根部巨噬细胞标志物MOMA-2的免疫组织化学染色,观察SENP1+/+X Apoe-/-(n=5)与SENP1+/-XApoe-/-(n=4)两组小鼠在饲喂高胆固醇高脂食物后动脉粥样硬化病理改变。采用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)诱导巨噬细胞RAW264.7泡沫化,油红O染色检测RAW264.7 si-ns及RAW264.7 si-SENP1的泡沫细胞形成能力。采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测RAW264.7 si-ns和RAW264.7 si-SENP1中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)mRNA和蛋白的相对表达量。结果饲喂高胆固醇高脂食物后,油红O染色显示,SENP1+/-X Apoe-/-小鼠的斑块相对面积(斑块面积/血管总面积)和主动脉弓斑块面积均大于SENP1+/+X Apoe-/-小鼠,分别为(6.716±1.442)%和(5.952±2.332)%以及(364 249±45 838)和(273 486±158 814)μm2;免疫组织化学染色显示,主动脉根部巨噬细胞面积/斑块面积分别为(41.00±0.05)%和(40.47±0.07)%,差异无统计学意义(P=0.954)。Real-Time PCR和Western blotting检测以及油红O染色结果显示,RAW264.7 si-SENP1的FABP4表达水平及泡沫细胞形成能力均较RAW264.7 si-ns高。结论 SENP1通过下调FABP4的表达,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成,从而抑制动脉粥样硬化的发生。

SUMO特异性蛋白酶1的小分子抑制剂JK043的合成与生物学活性的初步研究

目的通过虚拟筛选的方法发现SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)新的小分子抑制剂,并对其生物学活性进行体外验证。方法通过对小分子数据库虚拟筛选,得到可能的SENP1小分子抑制剂。化学合成筛选得到的JK043,经SENP1的体外测试体系验证该小分子的抑制活性,计算IC50。构建对接模型,观察JK043与SENP1的作用模式。结果通过体外活性测试发现,化学合成的JK043能够抑制SENP1的活性,IC50值为1.339μmol/L。通过对接模型发现,JK043与SENP1蛋白的465W、468D、529H、597Q存在相互作用关系。结论发现并合成JK043,其对SENP1有一定的体外抑制活性。

抑制SUMO特异性蛋白酶1在小鼠急性肺损伤中的保护作用

目的:探讨抑制SUMO特异性蛋白酶1/低氧诱导因子-1α(SUMO-specific protease 1/hypoxia-inducible factor-1α,SENP1/HIF-1α)信号通路在减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致小鼠急性肺损伤中的作用及机制。方法:建立小鼠LPS致急性肺损伤模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time polymerase chain reaction,Real-Time PCR)法检测小鼠经LPS处理后肺组织中SENP1 mRNA的表达,采用蛋白质印迹(Western印迹)法检测HIF-1α蛋白的表达。采用小干扰RNA法敲除小鼠淋巴瘤巨噬细胞(RAW264.7)SENP1的表达,用LPS处理对照组和干扰组细胞后,采用Western印迹法检测细胞中caspase-3、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达,采用酶联免疫吸附试验法检测细胞中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性。结果:小鼠急性肺损伤后肺组织中HIF-1α蛋白和SENP1 mRNA的表达水平均升高。经LPS处理后,干扰组caspase-3、iNOS和MPO较对照组均显著降低(P<0.05)。结论:抑制SENP1/HIF-1α通路可减轻LPS致小鼠急性肺损伤。

可溶性泛素样特异性蛋白酶1的表达及活性鉴定

目的:高效可溶性表达泛素样特异性蛋白酶1(ULP1)。方法:根据大肠杆菌密码子的偏好性优化合成编码ULP1的基因片段序列,将其克隆到原核表达载体p GEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导表达8 h,观察重组蛋白ULP1的表达情况;优化诱导时间及IPTG浓度,并鉴定重组蛋白ULP1的生物学活性。结果:重组蛋白ULP1表达的最佳条件为37℃、0.1 mmol/L的IPTG诱导表达5 h,目的蛋白以可溶性表达为主;Western印迹结果表明,重组蛋白ULP1能够被His单克隆抗体识别,重组蛋白ULP1能够特异性酶切SUMO-GFP。结论:表达了具有生物学活性的SUMO蛋白酶ULP1。

靶向泛素特异性蛋白酶1小分子抑制剂的研究进展

泛素特异性蛋白酶1(ubiquitin-specific protease 1,USP1)是在癌症研究中越发受关注的去泛素化酶之一。USP1在许多肿瘤中过度表达,现已发现USP1能通过调控与肿瘤相关的多种蛋白质的表达来控制肿瘤的发生和进展,如SIK2、GSK-3β和Bcl-2等。基因敲除或药物抑制USP1能有效抑制肿瘤,同时还有望解决顺铂以及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂耐药性问题。本综述介绍了USP1的结构、功能以及USP1靶点与肿瘤的关系,并系统地总结2013年至2023年公开的USP1小分子抑制剂的结构、活性以及构效关系。最后,本综述讨论了开发USP1小分子抑制剂的挑战和机遇。

SUMO特异性蛋白酶1诱导蛋白质去小泛素相关修饰增加子宫内膜癌侧群细胞化疗敏感性

目的探讨通过诱导蛋白质广泛去类泛素化修饰途径抑制子宫内膜癌的干性维持潜能,达到子宫内膜癌侧群细胞化疗增敏的目的。方法流式细胞术分选培养CD133^(+)CD44^(+)的KLE子宫内膜癌侧群细胞克隆球,Western blot法检测小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)及肿瘤侧群细胞干性维持基因八聚体结合转录因子4(Oct4)和性别决定区Y-box2(Sox2)蛋白的表达情况。慢病毒介导KLE侧群细胞稳定转染SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)基因,Western blot法检测SENP1、SUMO1、Oct4和Sox2的蛋白表达;比较过表达与未过表达SENP1基因的KLE侧群细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期变化,四甲基偶氮唑蓝实验和流式细胞术检测子宫内膜癌侧群细胞对顺铂的化疗敏感性,子宫内膜癌荷瘤鼠模型检测SENP1过表达对顺铂的化疗敏感性影响。结果CD133^(+)CD44^(+)和CD133-CD44-子宫内膜癌KLE细胞克隆形成率分别为(23.64±5.03)%和(4.64±1.25)%,差异有统计学意义(P=0.003),CD133^(+)CD44^(+)子宫内膜癌KLE细胞中SUMO1、Oct4和Sox2蛋白表达水平高于CD133-CD44-子宫内膜癌KLE细胞(均P<0.05)。与未转染SENP1基因的KLE侧群细胞比较,SENP1过表达的KLE侧群细胞SUMO1、Oct4、Sox2蛋白表达水平降低,细胞克隆形成率由(25.67±5.44)%下降至(7.46±1.42)%,细胞周期发生由G0/G_(1)期向G_(2)期的偏移,顺铂半数抑制浓度由(55.46±6.14)μg/ml下降至(11.55±3.12)μg/ml,细胞凋亡率由(9.76±2.09)%上升至(16.79±3.44)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达SENP1能够降低KLE侧群细胞增殖能力,增加化疗敏感性。结论通过过表达SENP1能够诱导蛋白质去SUMO化修饰,抑制子宫内膜癌侧群细胞的干性维持潜能,进而增强其化疗敏感性。

重症溃疡性结肠炎患者血清NOD样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1和核因子κB mRNA表达水平及临床意义

目的探讨重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(CASP1)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平及临床意义。方法选取温州市中西医结合医院消化内科收治的重症UC患者116例作为重症UC组,同期健康体检者50例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测受试者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测所有受试者血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18表达水平,采用Pearson相关分析重症UC组患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β、IL-18表达的相关性。结果重症UC组患者血清NLRP3 [(6.3±1.1)vs.(1.2±0.3)]、CASP1 [(5.4±1.1)vs.(1.1±0.3)]和NF-κB [(6.73±1.13)vs.(0.51±0.15) mRNA表达水平均显著高于对照组(t=32.016、27.873、38.710,P均<0.001)。重症UC组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级患者NLRP3[(2.4±0.6)、(4.5±1.1)、(6.8±1.2)]、CASP1 [(2.2±0.4)、(3.9±1.0)、(5.9±1.1)]及NF-κB [(2.5±0.6)、(5.4±1.2)、(7.2±1.4)] mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(F=49.852、43.224、33.293,P均<0.001)。进一步两两比较发现,Ⅱ级、Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅰ级患者(P均<0.05),Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅱ级患者(P均<0.05)。重症UC组患者血清IL-1β[(90±7)ng/L vs.(69±7)ng/L]、IL-18 [(121±4)ng/L vs.(102±6)ng/L]表达水平较对照组均显著升高(t=16.555、24.249,P均<0.001)。重症UC患者血清NLRP3 mRNA与CASP1、及NF-κB mRNA表达均呈正相关(r=0.767、0.676,P均<0.001),而CASP1 mRNA与NF-κB mRNA表达无相关性(r=0.263,P=0.175)。重症UC患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β表达均呈正相关(r=3.372、3.724、3.424,P=0.035、0.011、0.026),与IL-18表达亦均呈正相关(r=2.963、3.513、3.312,P=0.043、0.018、0.023)。结论重症UC患者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平均显著升高,且NLRP3 mRNA与CASP1、NF-κB mRNA表达呈正相关。NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA参与重症UC病理过程,临床上可通过检测NLRP3、CASP1和NF-κB表达水平判断UC病程进展。

SUMO特异性蛋白酶1对hPXR调控P-gp基因表达的影响

孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）属于核受体（nuclear receptors,NRs）超家族的一员,是一个配体依赖性的转录调节因子[1]。配体激活后的PXR进入细胞核,与视黄醛X受体（retinoid X receptor,RXR）形成异二聚体,随后结合到靶基因的PXR反应元件上,进而介导该基因的转录表达。PXR下游靶基因的表达产物主要是一类与外源性药物及内源性物质代谢转运相关的酶及蛋白，包括I相代谢酶如细胞色素P450同工酶家族中的CYP3A、CYP2B和CYP2C。II相代谢酶如尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因（UGT）和谷胱甘肽S转移酶（GST），III相药物转运蛋白如P-糖蛋白（p-gP）、多药耐药相关蛋白（MRP）和乳腺癌耐药蛋白（BCRP）等。

泛素特异性蛋白酶1、核转运蛋白α2在子宫内膜异位症患者异位内膜组织中表达及临床意义

目的 探究泛素特异性蛋白酶1(USP1)、核转运蛋白α2(KPNA2)在子宫内膜异位症患者在位、异位内膜组织中表达及临床意义。方法 选取海南妇产科医院2019年2月至2021年10月住院的67例子宫内膜异位症患者为研究对象,取其在位内膜组织和异位内膜组织,收集患者剖宫产分娩次数、囊肿直径等临床指标;同期选取行全子宫切除的70例患者的正常子宫内膜组织作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time qPCR)法检测组织USP1mRNA、KPNA2 mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测组织USP1、KPNA2蛋白表达水平;采用Pearson法及Spearman等级相关分析异位内膜组织中USP1 mRNA与KPNA2 mRNA及其蛋白表达的相关性。结果 正常子宫内膜组织、在位内膜组织、异位内膜组织中USP1 mRNA、KPNA2 mRNA表达水平及蛋白阳性率依次升高(P<0.05)。异位内膜组织中USP1 m RNA与KPNA2 m RNA表达呈正相关(r=0.646,P<0.05)。异位内膜组织中USP1与KPNA2蛋白表达呈正相关(r=0.589,P<0.05)。子宫内膜异位症患者异位内膜组织中USP1、KPNA2蛋白表达与年龄、剖宫产分娩次数、痛经无关(P>0.05),与囊肿直径、浸润深度有关(P<0.05)。结论 USP1与KPNA2在子宫内膜异位症患者异位内膜组织中呈高表达,且二者与囊肿直径、浸润深度有密切联系。

泛素特异性蛋白酶1在肿瘤中作用研究进展

泛素特异性蛋白酶1(ubiquitin specific protease 1,USP1)属于去泛素化酶家族成员,具有异肽酶裂解活性和内肽酶裂解活性。DNA损伤修复功能缺陷可引起包括肿瘤在内的多种疾病,而USP1通过调节范可尼贫血互补群D2、范可尼贫血互补群I、增殖细胞核抗原等蛋白泛素化修饰参与DNA损伤修复。本文就USP1的结构和功能及在肿瘤中作用的研究进展作一综述。

高氧、维甲酸对早产鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、-9及特异性组织抑制物-1、-2表达的影响

目的探讨基质金属原蛋白-2(MMP-2)、MMP-9、基质金属蛋白酶特异性组织抑制物-1(TIMP-1)和TIMP-2在高氧肺损伤中的作用及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法建立高氧(FiO285%)暴露早产SD大鼠肺损伤模型,应用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2mRNA表达,采用明胶酶谱检测MMP-2和MMP-9酶原及活酶表达,采用Western blot技术检测TIMP-1和TIMP-2蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4、7、14d,MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达均显著升高(P均<0.01),MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶和TIMP-1蛋白的表达明显上调(P<0.05);RA对空气暴露下它们的表达均无明显影响(P均>0.05),但不同程度下调高氧暴露后MMP-2、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达和MMP-2活酶、MMP-9酶原及活酶的表达,进一步提高TIMP-1蛋白表达;高氧、RA对TIMP-2 mRNA和蛋白的表达均无明显影响(P均>0.05)。结论高氧暴露明显改变MMPs/TIMPs的表达,在肺泡形成关键时期,MMPs/TIMPs之间平衡关系的破坏是造成肺发育受阻和纤维化的重要因素;通过协调MMPs/TIMPs之间的表达,改善肺泡结构,降低肺纤维化程度,从而逆转高氧所致肺损伤,是RA发挥保护作用的重要机制之一。

大鼠SUMO特异性蛋白酶1催化区蛋白制备及功能鉴定

目的:制备大鼠SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease,SENP1)催化结构域(SENP1C)蛋白,并鉴定其酶活性。方法:分别以大鼠SENP1-pcDNA3.1和EGFP-pcDNA3.1重组体为模板,PCR扩增目的基因,克隆入pGEM-T载体;酶切鉴定后,再亚克隆入原核表达载体pET-28a;阳性重组体导入原核表达细胞BL-21,异丙基硫半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达;SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质的表达。Ni-NTA吸附纯化蛋白质并透析处理,SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质的纯度;1μmol/L及5μmol/L Tat-EGFP分别孵育HT22细胞不同时间,荧光显微镜下观察细胞转染情况。采用5μmol/L Tat-SENP1C预孵育HT22细胞10 h,免疫印迹检测整体蛋白质的SUMO化水平;用5μmol/L Tat-SENP1C预孵育HT22细胞或过表达Myc-Akt1和HA-SUMO1的HT22细胞10 h后,免疫沉淀和免疫印迹检测内源性和外源性Akt1与SUMO1的结合(SUMO化)。结果:Tat-SENP1C-pET-28a和Tat-EGFP-pET-28a重组原核表达载体成功构建,IPTG可以诱导蛋白质高表达;采用Ni-NTA纯化和透析可获得较高纯度的蛋白质;5μmol/L Tat-EGFP孵育HT22细胞10 h后,蛋白质穿膜效率较高;Tat-SENP1C重组蛋白可以显著降低HT22细胞中整体蛋白质的SUMO化以及内源性和外源性Akt1 SUMO化。结论:Tat-SENP1C-pET-28a和Tat-EGFP-pET-28a重组原核表达载体构建成功,且被IPTG诱导后可高效表达蛋白质;纯化的Tat-SENP1C蛋白具有较强的穿膜能力及酶活性。