骨形态发生蛋白/维甲酸诱导的神经特异性蛋白3在丙戊酸钠诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用

目的探讨骨形态发生蛋白/维甲酸诱导的神经特异性蛋白3(Brinp3)在丙戊酸钠(VPA)诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用。方法体外培养大鼠海马神经干细胞,运用Real-time PCR和Western blotting技术在VPA诱导神经干细胞分化后24 h和48 h检测Brinp3的表达;Real-time PCR检测Brinp3在成年大鼠各组织中以及在神经干细胞、星形胶质细胞和神经元中的表达水平;在神经干细胞中转染Brinp3小干扰RNA(siRNA)并诱导分化24 h后,运用Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光技术检测Brinp3和神经元标志分子的表达。以上实验均包含5次生物学重复。结果与对照组相比,VPA处理组中Brinp3的mRNA和蛋白水平在24 h和48 h均显著上调(P<0.05);Brinp3在脑组织中呈优势表达;Brinp3在星形胶质细胞中表达较低,而在神经元中表达较高(P<0.001);在神经干细胞中转染Brinp3 siRNA,诱导分化24 h后,Brinp3的表达被显著抑制(P<0.001),神经元标志分子的表达均显著下调(P<0.01),第4天分化成的神经元比例减少(P<0.001)。结论Brinp3表达的上调可能介导了VPA促神经干细胞向神经元分化的功能。

甲基苯丙胺诱导大鼠神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达

目的:探讨甲基苯丙胺对实验大鼠神经元凋亡的诱导以及凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。方法:选择Wistar♂大鼠20只,将动物随机分为4组,每组5只。4组中随机选3组为甲基苯丙胺实验组(B、C、D),1组为对照组(A)。B组给予甲基苯丙胺,20mg·kg-1,单次ip;C组给予甲基苯丙胺,每次20mg·kg-1,每天2次(8:00,20:00)ip,连续2d;D组给予甲基苯丙胺,每次20mg·kg-1,每天2次(8:00,20:00)ip,连续4d;A组给予等体积生理盐水。采用TUNEL法检测神经元凋亡,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达。结果:给予甲基苯丙胺后,大鼠各脑区有凋亡细胞形成,凋亡相关因子Caspase-3有不同程度的表达。结论:甲基苯丙胺可导致神经元的凋亡,并诱导凋亡相关因子Caspase-3的表达。

肺缺血再灌注损伤模型大鼠肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化(英文)

背景:肺缺血再灌注损伤过程中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化及其可能的作用机制有待观察。目的:观察大鼠肺缺血再灌注损伤中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化,并分析细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤中作用及可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:南京医科大学附属南京第一医院急诊中心。材料:实验于2006-04/2006-09在南京医科大学附属南京第一医院动物实验室及南京市放射免疫检测中心完成。选用28只雄性健康清洁级SD大鼠,体质量250￣350g,鼠龄49￣76d,由南京医科大学实验动物中心提供。随机数字表法将大鼠分为实验组及对照组,每组14只。方法:①实验干预:实验组大鼠参照Eppinger等的方法进行建立肺缺血再灌注模型,大鼠给予阻断肺门45min(观察肺无舒缩为阻断标准),再开放3,6h(再灌注以肺恢复舒缩为标准)后取材,每次取7只,对照组仪行开胸术,于相同时间点同样方法分离肺组织。②实验评估:采用Annexin-V-PI双染法通过流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞,计算凋亡率;采用免疫组织化学法及图像分析法观察肺脏天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达;计算2组大鼠左肺湿干质量比;计算肺泡损伤数比值进行肺组织损伤定量评价;光镜下苏木精-伊红染色观察肺脏的病理形态学变化。主要观察指标:①肺组织细胞凋亡率及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达。②肺湿干质量比及肺组织损伤定量评价结果。③肺组织病理形态学变化。结果:纳入大鼠28只均进入结果分析,无脱落。①实验组肺缺血再灌注3,6h肺组织细胞凋亡率较对照组有明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),实验组缺血再灌注6h凋亡率较3h有所降低(P<0.05)。②实验组大鼠肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达3h达到最高,6h稍有下降,较对照组各时间点表达增加(P<0.01)。③实验组肺缺血再灌注3,6h肺泡损伤数比值及肺脏湿干质量比值较对照组均明显增加(P<0.01),实验组缺血再灌注6h两比值较3h有所增加(P<0.05)。④实验组肺泡结构破坏、塌陷、消失,肺泡间隔有大量的炎性细胞浸润,肺缺血再灌注6h较3h更严重。对照组无明显改变。结论:肺缺血再灌注早期可能通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的改变,激活细胞的凋亡途径,诱导肺组织细胞凋亡的发生,从而导致肺损伤的发生。

银杏叶提取物对惊厥性脑损伤大鼠天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响及意义

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在惊厥性脑损伤发病机制中的作用及银杏叶提取物对脑损伤的可能保护机制。方法将20日龄健康SD大鼠108只随机分为3组:对照组、惊厥组及银杏叶提取物干预组。通过三氟乙醚反复吸入制备大鼠惊厥模型。干预组在每次惊厥后立即腹腔注射银杏叶提取物50 mg/kg,12 h后再重复注射1次,其他两组注射等量生理盐水。各组动物于末次惊厥后1、3和7 d采用免疫组化法检测海马组织中caspase-3蛋白表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织中caspase-3 mRNA表达。结果末次惊厥后1、3和7 d海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较对照组显著升高,3 d时达峰值(P均<0.01)。银杏叶提取物干预组各时间点海马caspase-3的蛋白及mRNA表达均较惊厥组显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠反复惊厥后海马caspase-3表达显著增高,提示caspase-3参与了惊厥性脑损伤的病理过程。银杏叶提取物能下调惊厥后海马caspase-3的异常表达,提示其对惊厥性脑损伤的保护机制可能与抑制海马caspase-3异常表达有关。

葛根素对缺血/再灌注损伤兔肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化的影响

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在兔肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中的变化及葛根素的保护作用机制。方法健康日本大耳白兔30只,随机分为对照组、缺血/再灌注(I/R)组及葛根素组,每组10只。复制单侧LIRI模型。对比观察各组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、肺湿/干重(W/D)比值及肺泡损伤指数(IQA);用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定肺组织细胞凋亡指数(AI);用免疫组化及原位杂交技术分别检测肺组织caspase-3蛋白和mRNA表达。结果与对照组比较,I/R组血清SOD活性和NO含量降低,MDA含量、W/D比值、IQA、AI值及caspase-3表达均上调(P均<0.01)。与I/R组比较,葛根素组SOD、NO显著升高,MDA、W/D比值、IQA、AI值及caspase-3表达明显下降(P均<0.01)。相关分析显示:AI值与SOD、NO呈明显负相关,与MDA、caspase-3 mRNA及caspase-3蛋白呈明显正相关(P均<0.01);caspase-3 mRNA与SOD、NO呈明显负相关,与MDA含量呈明显正相关(P均<0.01)。结论葛根素可通过提高体内NO水平、降低氧自由基水平、减轻脂质过氧化反应,下调caspase-3的mRNA和蛋白表达,从而抑制肺再灌注后肺组织细胞的异常凋亡,减轻LIRI。

Rspo3/Lgr5促进N-钙黏蛋白表达参与小鼠肝损伤

目的本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤。方法采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法以及免疫荧光染色方法测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5的RNA干扰实验以确定Rspo3是否通过作用于Lgr5上调Ncad表达。结果在损伤小鼠肝组织中,Rspo3及其受体Lgr5显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3及Lgr5表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降。结论在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤。

糖尿病大鼠血蛋白激酶C和骨骼肌Bax/B细胞淋巴瘤-2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3变化及其意义

目的:探讨糖尿病大鼠血蛋白激酶C(PKC)和骨骼肌Bax/Bcl-2、Caspase3变化及意义。方法:建立糖尿病大鼠模型,16只SD大鼠随机分成正常对照组和糖尿病组,采用ELISA法测定血PKC值,取后肢腓肠肌HE染色后行组织学观察,并用免疫组化方法测定Bax、Bcl2和Caspase3值。结果:糖尿病组大鼠骨骼肌普遍萎缩,肌纤维萎缩变细,纤维变性、水肿,部分区域坏死,纤维断裂,肌丝走行紊乱,核固缩,横纹模糊消失,间质脂肪组织略增生。糖尿病组和正常对照组大鼠的血PKC值分别为110.60±5.94ng·mL-1和74.72±7.19ng·mL-1,骨骼肌Bax值分别为26311±3698.30μm2和16764±6116.10μm2,Bcl2值分别为18573±8529.90μm2和35533±485.52μm2,Caspase3值为32419±3201.50μm2和12123±1919.60μm2。糖尿病大鼠血中PKC值较正常对照组显著升高,糖尿病组肌肉中Caspase3及Bax值显著升高,而Bcl2值明显下降,Bax/Bcl2值升高,两组间比较均有显著差异。结论:氧化应激中的PKC途径及细胞凋亡通路共同参与了糖尿病骨骼肌病变的发生,可能是糖尿病骨骼肌病变的重要发病机制之一。

尖锐湿疣组织中增殖细胞核抗原和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达及相关性分析

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)在尖锐湿疣(CA)组织角质形成细胞中的表达与相关性。方法采用免疫组化SP法分别检测36例初发性CA患者(CA组)和10例正常包皮组织(对照组)角质形成细胞PCNA、Caspase-3蛋白的表达。结果CA组标本角质形成细胞PCNA及Caspase-表达水平明显高于对照组(P<0.05),但两者在尖锐湿疣组织角质形成细胞中的表达无相关性(P>0.05)。结论PCNA和Caspase-3的表达上调可能参与了CA的发病,但两者的表达并无相关性。

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3mRNA在人脑挫裂伤后神经细胞中的表达

目的研究天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3mRNA在脑挫裂伤患者神经细胞中的表达与预后的关系。方法应用原位杂交技术检测脑组织15例Caspase-3mRNA的表达情况。结果均有不同程度的Caspase-3mRNA表达,死亡组表达值较存活组明显升高。两组之间表达差异有显著性意义。结论脑挫裂伤后Caspase-3mRNA表达程度较高,Caspase-3mRNA过度表达在脑挫裂伤后神经细胞凋亡的调控中起一定的作用。

小胶质细胞中小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3参与小鼠光化学栓塞法缺血性脑卒中早期的疾病进展

目的探讨小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3(SENP3)在光化学栓塞法缺血性脑卒中小鼠小胶质细胞中的表达变化,以及与光化学法栓塞缺血性脑卒中疾病进展的关系。方法实验小鼠分对照组、缺血性脑卒中1 d组和缺血性脑卒中7 d组(每组3只),应用Western blotting检测各组纹状体诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(ARG-1)和SENP3的表达和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平;应用免疫荧光双标法检测小鼠纹状体小胶质细胞中iNOS和ARG-1的表达。结果与对照组相比,缺血性脑卒中1 d组SENP3的表达与JNK的磷酸化水平均显著上升,同时M1型小胶质细胞的标志物iNOS的表达水平显著上升;缺血性脑卒中7 d组M2型小胶质细胞的标记物ARG-1的表达显著增高。纹状体小胶质细胞特异性抗体1(Iba1)与iNOS、Iba1与ARG-1的免疫荧光双标结果与免疫印迹结果一致。结论光化学栓塞法缺血性脑卒中早期,小胶质细胞SENP3表达增加,进而影响JNK磷酸化的水平和小胶质细胞的极化,促进大脑炎症反应,参与缺血性脑卒中的疾病进展。

SUMO特异性蛋白酶3通过调控巨噬细胞极化促进磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤形成

目的:探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)调控巨噬细胞极化在磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤(AAA)形成中的作用。方法:(1)分离C57BL/6背景的Senp3flox/flox(野生型,WT)小鼠和Senp3flox/flox;Lyz2-Cre(SENP3单核细胞特异性敲除,即条件性敲除,c KO)小鼠骨髓来源的单核细胞(BMDMs),分别诱导其M1/M2型分化,采用RT-q PCR、Western blot和细胞免疫荧光比较SENP3表达以及M1/M2型巨噬细胞分布差异。(2)8~12周龄雄性WT小鼠和c KO小鼠用改良型磷酸钙诱导14 d构建小鼠AAA模型,比较两组小鼠的成瘤率和生存率;RT-q PCR和Western blot检测SENP3、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6及基质金属蛋白酶9(MMP-9)在两组小鼠AAA组织中的表达差异;二氢乙啶染色检测组织中活性氧簇(ROS)生成差异。(3)为探讨其中机制,通过Western blot和免疫共沉淀验证SENP3与丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)的相互作用;在BMDMs中转染FlagMKK7野生型(Flag-MKK7 WT)和SUMO修饰位点K18突变体(Flag-MKK7 K18R mutant)后诱导BMDMs进行M1极化,用Western blot检测p-JNK和MMP-9表达的差异。结果:(1)SENP3在M1型巨噬细胞中表达显著升高(P<0.01),在M2型巨噬细胞中显著下调(P<0.01);SENP3在M1向M2型巨噬细胞转化过程中表达显著下降(P<0.01),而在M2向M1型巨噬细胞转化时表达显著上调(P<0.01);c KO组BMDMs经M1/M2型诱导后,巨噬细胞M1型少于WT组,而M2型多于WT组;(2)SENP3在AAA组织中表达上调(P<0.05);c KO小鼠磷酸钙诱导后成瘤率显著降低(P<0.01),生存率显著提高(P<0.05),最大腹主动脉外直径显著减小(P<0.01);c KO小鼠AAA组织中IL-1β、IL-6和TNFα表达显著下调(P<0.01),ROS生成减少,MMP-9表达也显著下调(P<0.05)。(3)M1巨噬细胞中,MKK7的SUMO2/3修饰减少,与SENP3的相互作用增强;突变回补实验说明,转染Flag-MKK7 K18R mutant的M1型巨噬细胞中p-JNK和MMP-9表达显著上调(P<0.05)。结论:SENP3通过去SUMO化修饰MKK7,激活MAPK/JNK通路,调控巨噬细胞的极化,上调MMP-9的表达,从而促进AAA形成。

脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3活性和细胞凋亡的影响

目的:观察中药复方制剂脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)活性和细胞凋亡的影响。方法:将55只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。向双肾双夹肾血管性高血压大鼠右侧尾状核注入Ⅶ型胶原酶诱导脑出血。注射后2h开始,每日灌胃给予脑脉Ⅱ号口服液(8mL/d)或等容积蒸馏水直至处死。注射后6、12h,1、3、7d取脑,用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用荧光分光计测定caspase-3活性。结果:与假手术组比较,模型组细胞凋亡百分率在注射6h后显著增加(P<0.01),3d达到高峰,持续增加至7d以后;模型组caspase-3活性值在注射6h后开始增加(P<0.01),1d后达到峰值,之后开始下降,持续增加至7d以后。注射后12h～7d各时间点,治疗组细胞凋亡百分率和caspase-3活性值均较模型组显著降低(P<0.05)。结论:抑制caspase-3活化可能是脑脉Ⅱ号口服液抗高血压脑出血后细胞凋亡作用机制之一。

SUMO特异性蛋白酶3在HBV复制中的作用机制

目的初步探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)在HBV感染中的作用机制。方法体外培养HepG2.2.15细胞,或利用HBV转基因小鼠肝脏组织,通过表达SiRNA干扰等,经蛋白质印迹、实时PCR、免疫组织化学染色等实验技术,检测SENP3在HBV感染细胞模型中的表达。结果 HBV DNA与其PBMC中SENP3的含量呈反比。健康对照组PBMC中SENP3的平均蛋白水平是CHB患者的7.4倍(P<0.05)。HBV转基因小鼠肝脏中SENP3表达显著降低,小鼠肝脏组织中AKT磷酸化水平增高,是健康对照组的4.1倍(P<0.01)。SENP3在HBV DNA全基因重组质粒转染的HepG2受体细胞(HepG2.2.15)中表达量显著低于未转染HBV DNA的HepG2细胞。与HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞中AKT磷酸化水平显著增高,其含量平均是HepG2细胞的5.2倍(P<0.01);在HepG2.2.15细胞中转染SENP3质粒使其过表达,则AKT磷酸化水平降低,HBV DNA含量降低,并与SENP3质粒浓度呈负相关性;分别向HepG2.2.15细胞转染100ng和500ng的SENP3质粒,则细胞中HBV DNA含量由对照组中的7.983.03×106 IU/mL降低至3.45×106 IU/mL和1.92×106 IU/mL;应用siRNA干扰SENP3在HepG2.2.15细胞中的表达,则Akt磷酸化水平升高,其浓度是对照组的5.6倍(P<0.01)。结论机体HBV DNA载量与SENP3的表达量呈负相关,SENP3可通过抑制肝细胞AKT磷酸化水平,降低HBV DNA载量。

血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3及高迁移率族蛋白B1在不同程度急性胰腺炎中的表达及意义

目的:探讨血清微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在不同程度急性胰腺炎(AP)中的表达及意义。方法:选取AP患者135为病例组,根据病情严重程度又分为轻症急性胰腺炎(MAP)组、中度重症急性胰腺炎(MSAP)组以及重症急性胰腺炎(SAP)组三个亚组,每组45例。选取同期体检健康者135例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平进行测定。采用急性生理学和慢性健康状况评估Ⅱ(APACHEⅡ)对病例组患者进行评估。比较病例组与对照组血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平。比较不同程度AP患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分。采用Spearman法分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP的预测价值。结果:与对照组相比,病例组患者血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平明显升高(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1表达水平及APACHEⅡ评分在不同程度AP患者中由高到低依次为SAP组、MSAP组、MAP组,各组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1与AP患者APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.704、0.642、0.723,均P<0.05)。血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1对AP具有良好的预测价值。结论:血清LC3-Ⅱ、Caspase-3、HMGB1水平在AP患者中升高,且与病情严重程度呈正相关,对AP具有良好的预测价值。

嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症SUMO特异性蛋白酶3表达降低促进替代激活巨噬细胞极化

目的探讨SUMO特异性蛋白酶3(SENP 3)在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症中对巨噬细胞极化产生的影响。方法嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症患者鼻黏膜组织中CD68、CD206、SENP3免疫荧光染色共定位。用白细胞介素-4(IL-4)和IL-13刺激SENP3基因敲除小鼠和对照小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM),体外诱导巨噬细胞极化。利用SENP3基因敲除小鼠建立嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症动物模型,用免疫荧光共定位检测F4/80、CD206。结果在SENP3基因敲除小鼠建立的嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症模型中,鼻黏膜中CD206^(+)细胞数量显著增加。在体外诱导BMDM极化过程中,敲除SENP3使F4/80^(+)CD206^(+)细胞数量增加。同时,在对照组小鼠提取的BMDM极化的过程中,SENP3蛋白表达量明显下降。在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症患者鼻黏膜内检测到不表达SENP3的CD68^(+)CD206^(+)细胞数量显著多于表达SENP3的CD68^(+)CD206^(+)细胞。结论在嗜酸性粒细胞浸润性鼻黏膜炎症中,巨噬细胞SENP3表达的下调促进替代激活巨噬细胞的极化。

肿瘤坏死因子-α与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤中的作用及意义。方法:大鼠胰腺被膜下均匀注射质量分数5%的牛磺胆酸钠建立ANP动物模型。建模后12、24和48 h检测肺组织TNF-α水平和Caspase-3蛋白表达水平,同时观察肺组织病理改变并给予常规病理评分。结果:大鼠肺组织TNF-α水平和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),肺组织呈现典型炎性损伤性改变,常规病理评分升高(P<0.01)。结论:TNF-α和Caspase-3可能参与了大鼠ANP肺损伤,其水平的高低与ANP肺损伤严重程度密切相关。

补阳还五汤对脑梗死患者天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3影响的研究

目的探讨补阳还五汤对脑梗死患者天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响。方法选择2007年12月至2009年12月60例脑梗死患者，随机分为中西医结合治疗组（32例）和常规西医对照组（28例）。两组均给予常规西医治疗，治疗组加用补阳还五汤（黄芪60g，当归20g，地龙15g，赤芍10g，红花10g，川芎10g，桃仁6g），每日1剂，两组疗效均为2周。治疗前和治疗2周后观察两组患者脑脊液caspase-3变化、脑水肿体积以及症状、体征改善情况。结果中西医结合组治疗后脑脊液caspase-3[（3．4±1．7）U／L]、脑水肿体积[（2．4±1．3）ml]均明显低于对照组[（6．8±1．5）U／L、（3．8±1．3）ml，均P〈0．01]，临床总有效率（93．8％）明显优于对照组（75．0％，P〈0．01）。结论补阳还五汤有助于减轻脑水肿，提高临床疗效，是脑梗死的理想用药之一。

小泛素样修饰物特异性蛋白酶3通过调节脂滴水平体外促进HepG2细胞丙型肝炎病毒复制

目的探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响。方法以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平。采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平。以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平。结果在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4%,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01)。结论在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制。

半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3和Beclin1在腹部创伤大鼠组织的表达及其意义

目的探讨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Beclin1在腹部创伤大鼠组织中的表达及意义。方法20只SD大鼠建立腹部创伤大鼠模型,按照数字表法分为对照组和腹部创伤组,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹分析两组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析两组大鼠肠道组织细胞凋亡水平;采用免疫荧光分析两组大鼠肠道组织LC3点的数量;采用免疫组织化学分析两组大鼠肠道组织裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组大鼠肠道组织炎性因子水平。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1 mRNA表达水平(0.96±0.11、1.08±0.12)明显低于腹部创伤组大鼠(1.82±0.12、1.77±0.18),差异有统计学意义(t=16.910、10.120,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平[(18.82±3.56)pg/ml]明显低于腹部创伤组大鼠[(71.98±11.80)pg/ml],差异有统计学意义(t=13.640,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织Caspase-3和Beclin1蛋白相对表达水平(0.60±0.08、0.89±0.08)明显低于腹部创伤组大鼠(1.34±0.18、1.56±0.16),差异有统计学意义(t=12.170、12.230,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织cleaved Caspase-3蛋白相对表达水平(97.66±11.25)明显低于腹部创伤组大鼠(191.33±24.47),差异有统计学意义(t=10.990,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织TUNEL染色阳性率[(2.83±1.10)%]明显低于腹部创伤组大鼠[(50.59±10.15)%],差异有统计学意义(t=14.790,P<0.05)。对照组大鼠肠道组织LC3点数量[(45.20±14.91)个]明显低于腹部创伤组大鼠[(82.81±13.17)个],差异有统计学意义(t=5.977,P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示,对照组大鼠肠道组织自噬底物p62蛋白表达水平(1.26±0.11)明显高于腹部创伤组大鼠(0.62±0.11),差异有统计学意义(t=12.940,P<0.05)。结论腹部创伤后肠道组织中Caspase-3和Beclin1表达水平显著增加,导致肠道细胞凋亡和自噬水平显著增加,肠道损伤加剧。

脑胶质瘤组织中ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白表达变化及其意义

目的观察脑胶质瘤组织中酸性神经酰胺酶(ASAH1)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达变化,并探讨其意义。方法脑胶质瘤组织70例份[观察组,按WHO胶质瘤分类标准分为低级别者(Ⅰ~Ⅱ级)32例、高级别者(Ⅲ~Ⅳ级)38例)],癌旁组织70例份(对照组),采用免疫组化SP法检测两组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较观察组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白阳性表达者及阴性表达者的生存时间;Spearman相关分析法分析观察组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白表达的相关性。结果观察组ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白阳性率分别为81.42%、87.14%、75.71%,对照组分别为16.67%、33.33%、25.00%,两组比较,P均<0.05。观察组低、高级别者ASAH1蛋白阳性率分别为68.75%、92.10%,TGF-β_1蛋白阳性率分别为81.25%、92.10%,Caspase-3蛋白阳性率分别为87.50%、65.79%,两者比较,P均<0.05。ASAH1蛋白表达阳性者(57例)与阴性者(13例)中位生存时间分别为10、23个月,TGF-β_1蛋白表达阳性者(61例)与阴性者(9例)中位生存时间分别为10、20个月,Caspase-3表达阳性者(53例)与阴性者(17例)中位生存时间分别为13个月、6个月,两者比较,P均<0.05。观察组ASAH1蛋白与TGF-β_1表达呈正相关(r=0.652,P<0.05),ASAH1、TGF-β_1与Caspase-3表达均呈负相关(r=-0.427、-0.317,P均<0.05)。结论脑胶质瘤组织中ASAH1、TGF-β_1、Caspase-3蛋白表达升高,检测上述蛋白有助于脑胶质瘤的病情判断及预后评估。