FLP/FRT位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展

来源于酵母2μm质粒的FLP/FRT位点特异性重组系统已经被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、线虫等高等真核模式生物,正逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。笔者综述了FLP/FRT系统的重组原理及其在高等真核生物中的应用,系统地概述了该系统在转基因植物、哺乳动物、昆虫以及其它相关高等真核模式生物中的研究现状,讨论了FLP/FRT系统在研究中存在的主要问题、应用前景和发展方向。

Cre/lox位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展

来自于P1噬菌体的Cre/lox系统通过位点特异性重组可以迅速而有效地实现各种生理环境下的基因定点插入、删除、替换和倒位等操作。Cre/lox系统作为目前基因打靶技术的核心工具,已被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、斑马鱼等高等真核模式生物。文章较为全面地介绍了Cre/lox系统的基本概况及其在高等真核生物中的应用,讨论了Cre/lox系统在研究中存在的主要问题和今后的发展方向,为利用该系统在不同高等生物中进行基因操作提供有用的参考。

Cre/loxP位点特异性重组系统在植物中应用的研究进展

Cre/loxP位点特异性重组系统自发现以来,在植物基因重组领域得到了广泛应用,已成为提高转基因植物安全性的有效方法。本文介绍了该系统的基本概况及其在转基因植物表达载体构建方面的应用,尤其是在基因删除、定点整合、多基因表达以及杂种优势利用等方面的应用做了重点阐述。

单子叶植物的FLP/frt位点特异性重组系统的构建

来自于啤酒酵母2μm质粒的FLP/frt位点特异性重组系统可用于转基因植物(细胞)筛选完成后去除选择标记基因.水稻肌动蛋白actin基因启动子和玉米泛素ubiquitin基因启动子可有效驱动单子叶植物中外源基因的转录.为培育去除选择标记基因的抗盐耐旱单子叶转基因植物,构建了适合于单子叶植物的FLP/frt位点特异性重组系统.该系统由含有FLP重组酶基因的植物表达载体pCAMBIA3300-Ubi-FLP-bar和含有frt位点的植物双抗(抗除草剂、抗盐耐旱)表达载体pCAMBIA1300-Ubi-TsPPasef-rt-alsf-rtm以及pCAMBIA1300-Actin1-AtNHX1f-rt-alsf-rtm组成.

Cre/loxP位点特异性重组系统及其在口腔医学领域中的应用

Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗传信息的重要的试验工具。本文主要就Cre/loxP系统的结构、重组机制、特点及其在口腔医学领域中的应用作一综述。

位点特异性重组技术研究进展

位点特异性重组技术是现代生命科学中研究基因敲除与靶向整合的工具。它的应用实现了外源基因可预测、可重复的高效表达;对于利用模型动物进行基因分析更是具有划时代的意义;在转基因植物中的运用价值同样不可忽视。

位点特异性重组技术在繁殖普通核雄性不育系中的利用潜力

在作物杂种优势利用中普通核雄性不育性有着独特的优越性 ,但其不育系繁殖问题需要解决。通过利用普通核雄性不育性的可育基因 ,或利用人工核雄性不育性的不育基因和可育基因 ,借助位点特异性重组技术和遗传转化 ,可能实现普通核雄性不育系的商业化繁殖。

利用Cre／loxP位点特异性重组酶系统从转基因植物生产非转基因食品

转基因植物中的外源基因是引起转基因植物食品安全性问题的主要原因。通过对Cre／loxP系统介导转基因植物中外源基因选择性切除的最新研究成果进行综述分析，指出利用果实、花粉等组织特异性启动子对重组酶基因的表达进行调控，将转基因植物食用部位的外源基因选择性的切除，是将转基因植物转化为非转基因食品的一条有效途径。

位点特异性重组系统及其应用

位点特异性重组系统可在重组酶参与下介导特异性位点间的 DNA发生切除、整合或易位 ,该系统可克服传统基因工程技术的一些局限性 ,对基因进行定时、定位的改造 ,并可进行大片段的染色体改造工程。应用较多的有 Cre/ lox P、FL P/FRT和 R/ RS系统 ,本文主要介绍了这三个系统的结构特点并以 Cre/ lox P系统为例介绍其在转基因小鼠、基因剔除小鼠、基因替换小鼠和染色体工程中的应用 。

位点特异性重组酶Cre的克隆、表达、纯化及体外活性鉴定

克隆了Cre基因 ,分别构建了真核表达载体 pEF EBFP Cre和 pGEX Cre,在大肠杆菌中表达了Cre重组酶 ,并证明了重组酶的删除特性 。

Cre/LoxP系统介导的位点特异性重组技术

Cre/LoxP系统是一种对转入基因进行定点操作的基因重组系统,在遗传操作中具有重要作用。该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片断删除。

XerCD/dif位点特异性重组

大约10%~15%的大肠杆菌在染色体复制过程中会形成染色体二聚体。大肠杆菌染色体编码的重组酶XerC和XerD作用于染色体复制终点区的dif序列,以同源重组的方式将染色体二聚体解离为单体,使细菌得以正常复制分裂。编码霍乱毒素的噬菌体CTXΦ以位点特异的方式整合入霍乱弧菌染色体,但其基因组中不含有任何重组酶基因,其整合过程需要细菌染色体编码的XerC和XerD重组酶,且整合位点与大肠杆菌dif序列相似。XerCD重组酶基因和dif位点在细菌染色体广泛存在,表明其可能是染色体二聚体解离,噬菌体及其他外源基因成分整合入染色体过程中一种广泛存在的途径。文章对XerCD/dif位点特异性重组在细菌染色体二聚体解离。

位点特异性重组技术在分子生物学中的应用

位点特异性重组技术系统通过对ＤＮＡ进行准确切割和重新连接，能够导致ＤＮＡ发生包括切离、倒位或相互易位等形式的重排，从而使得在染色体水平对真核生物基因组进行遗传改造，以及对转基因动物和植物中转基因的表达进行有效的控制成为可能。来自大肠杆菌Ｐ１噬菌体的Ｃ...

Cre／loxp位点特异性重组系统在转基因植物中的应用

位点特异性重组系统能够在植物遗传转化中更准确、可靠的操纵外源DNA的引入或删除,已成为植物遗传操作中的重要工具。本文简要介绍目前应用最为广泛的Cre/loxp位点特异性重组系统的重组机制,并着重阐述Cre/loxp系统在删除转基因植物中标记基因及定点整合等方面的应用。

热诱导的位点特异性重组植物表达载体构建及烟草转化

选择标记基因安全性问题是限制转基因植物商品化种植的重要因素。为了从转基因后代中诱导性剔除选择标记基因,本研究克隆了拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因启动子,并构建了Hsp18.2启动子诱导表达的CinH/Rs位点特异性重组删除植物表达载体。结果表明,利用农杆菌介导法进行了烟草转化,转化后的烟草经过除草剂筛选和PCR检测,得到转基因阳性植株。本研究为利用位点特异性重组建立植物无标记基因转化体系奠定了基础。

柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展

基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有效清除选择标记基因,但同样存在删除不完全的缺点。组成型表达启动子驱动Cre/loxP系统表现出极高的删除效率,且极少有嵌合体的发生。FLP/FRT系统已被成功用于转基因植物选择标记基因的删除,但在柑桔上还没有相关的报道。

位点特异性重组系统的机理和应用

位点特异性重组酶识别特定的位点形成联会复合体,并发生DNA链的切割与交换,实现靶位点之间的整合、切离或倒位.这一过程由位于重组酶催化活性中心的酪氨酸或丝氨酸向DNA磷酸骨架发起攻击,形成共价中间体,不需要高能量辅助因子的参与.由于位点特异性重组系统具有高效精确的优点,在基因工程领域得到了广泛的应用.本文从识别位点的性质、重组酶的组成与结构及催化反应的特点三方面对位点特异性重组的机理进行了全面的阐述,并对当前重组酶的应用研究之现状、热点及存在的问题作了深入剖析,并讨论了未来的发展趋势.

基因组中双重位点特异性重组体系的建立及应用

应用重组DNA技术 ,将FRT FRT和LoxP LoxP两套重组酶特异的识别位点构建在一个名为C4LFY的载体中 ,并依次在载体中构建了P因子、果蝇yellow基因的两个外显子和一个内含子、顺式作用元件 (启动子和增强子 )和侧翼区DNA ,组成了双重位点特异性重组体系 .通过转基因技术将该体系整合到果蝇基因组中 ,再分别与特异的FLP和Cre重组酶相互作用后 ,成功地在基因组同一位点上完成了FLP/FRT和Cre/LoxP双重的重组反应 .应用这一体系 ,对yellow基因在发育中的表达调控进行了分子剖析 .结果表明 ,yellow基因的组织特异性表达是受增强子直接调控的结果 .还对yellow基因 5′和 3′侧翼区DNA进行了初步分析 .

位点特异性重组系统及其在植物转基因研究中的应用

随着植物转基因研究的不断深入,对基因重组系统提出了新的要求。位点特异性重组系统具有高效、精确等的优点,在植物基因工程领域的应用越来越广泛。对常用的三类位点特异性重组系统的作用机制、优缺点及其应用进展进行了全面的综述,期望为植物转基因研究提供技术参考。对于目前研究较为热点的基因编辑技术CRISPR-Cas系统作了简要概述。

位点特异性重组技术及其在寄生虫学研究中的应用

位点特异性重组是一种高效、准确地对目地基因进行遗传学操作的技术。位点特异性重组系统包括特异性重组酶及特异性位点。本文就位点特异性重组技术的原理及其在寄生虫学研究中的应用做一综述。