特异性顶部盘状底板反应蛋白3在结直肠腺癌中的表达

目的探讨特异性顶部盘状底板反应蛋白3(RSPO3)在结直肠腺癌中的表达。方法取30例结直肠腺瘤组织及瘤旁5 cm处正常组织、30例结直肠腺癌组织及癌旁5 cm处正常组织。蛋白质印迹法(Western blot)检测RSPO3、β-catenin、Bcl-2相关X蛋白(BAX)的相对表达量。免疫组化法检测RSPO3、BAX、β-catenin蛋白的表达情况。Spearman相关性分析法分析RSPO3的表达与β-catenin、BAX表达的相关性。结果结直肠腺癌组织中RSPO3、β-catenin的相对表达量均高于结直肠腺癌癌旁正常组织,结直肠腺瘤组织中RSPO3、β-catenin的相对表达量均高于结直肠腺瘤瘤旁正常组织,结直肠腺癌组织中RSPO3、β-catenin的相对表达量均高于结直肠腺瘤组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠腺癌组织中BAX的相对表达量低于结直肠腺癌癌旁正常组织,结直肠腺瘤组织中BAX的相对表达量低于结直肠腺瘤瘤旁正常组织,结直肠腺癌组织中BAX的相对表达量低于结直肠腺瘤组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结直肠腺癌组织、结直肠腺癌癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织中RSPO3、β-catenin、BAX蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);结直肠腺癌组织中RSPO3、β-catenin蛋白高表达率均高于结直肠腺癌癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织,BAX蛋白高表达率低于结直肠腺癌癌旁正常组织及结直肠腺瘤组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Spearman相关分析结果显示,结直肠腺癌组织中RSPO3的表达与β-catenin的表达呈正相关(r=0.936,P﹤0.05),RSPO3的表达与BAX的表达无相关性(P﹥0.05)。结论RSPO3在结直肠腺癌组织中高表达,可能作为结直肠腺癌临床治疗的潜在靶点。

Rspo3/Lgr5促进N-钙黏蛋白表达参与小鼠肝损伤

目的本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤。方法采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法以及免疫荧光染色方法测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5的RNA干扰实验以确定Rspo3是否通过作用于Lgr5上调Ncad表达。结果在损伤小鼠肝组织中,Rspo3及其受体Lgr5显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3及Lgr5表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降。结论在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤。

特异性顶部盘状底板反应蛋白在骨关节炎中的研究进展

骨关节炎(OA)是中老年人群常见的慢性退行性关节疾病,其病理特征主要是关节软骨变性、软骨下骨硬化、骨赘形成、滑膜组织炎症和增生、韧带和半月板变性以及关节囊肥大.特异性顶部盘状底板反应(RSPOs)蛋白是一种分泌型糖蛋白,主要通过激活Wnt/β-连环蛋白信号通路发挥其生理功能.近年来,随着RSPOs在OA领域的不断探索,越来越多的证据揭示了RSPOs在骨关节炎中的作用及影响.本文总结了RSPOs在OA领域的作用机制及研究现状,并且还讨论了RSPOs在OA多种细胞中的影响,为OA的发病机制和治疗提供参考.

RSPO2过表达人肝星状细胞株LX-2中差异表达蛋白的筛选及生物学功能分析

目的 筛选特异性顶部盘状底板反应蛋白2(RSPO2)在人肝星状细胞株LX-2中过表达后的差异表达蛋白,并进行差异表达蛋白的生物学功能分析。方法 通过分子生物学手段构建RSPO2过表达载体并转染进人肝星状细胞,利用RT-PCR验证RSPO2的过表达状态,细胞划痕实验观察过表达RSPO2肝星状细胞的生长及迁移能力。通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术检测RSPO2过表达人肝星状细胞和正常人肝星状细胞的差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果 通过RT-PCR验证,在人肝星状细胞株LX-2中成功过表达了RSPO2蛋白;通过LC-MS/MS技术对比RSPO2过表达肝星状细胞和正常肝星状细胞,获得候选差异表达蛋白共计233个,其中115个蛋白在RSPO2过表达细胞中表达下调,118个表达上调,这些差异表达蛋白参与了很多与细胞转录、复制、增殖相关的信号通路。结论 RSPO2过表达LX-2细胞差异表达蛋白共计233个,其中115个蛋白在RSPO2过表达细胞中表达下调,118个表达上调,这些差异表达蛋白大多参与到RNA的转录与翻译过程。

Rspo1、LGR5、NF-κB/p65在胃癌中的表达及其临床意义

目的通过检测特异性顶部盘状底板反应蛋白1(Rspo1)、富含亮氨酸的重复G蛋白偶联受体5(LGR5)与核转录因子κB/p65(NF-κB/p65)在人胃癌中的表达水平及与临床病理因素及预后之间的关系,并分析三者在胃癌发生发展中发挥的作用。方法免疫组织化学SP法测定Rspo1、LGR5及NF-κB/p65在115例胃癌组织标本及20例正常组织标本中的表达。结果Rspo1、LGR5、NF-κB/p65在胃癌中表达较正常组织增高;Rspo1、LGR5、NF-κB/p65的表达与浸润深度、TNM分期、淋巴结及远处转移有关,同时Rspo1表达与肿瘤大小、LGR5表达与肿瘤大小及分化程度有关;胃癌组织中Rspo1与LGR5、NF-κB/p65的表达呈正相关;Kaplan-Meier分析显示Rspo1、LGR5和NF-κB/p65表达阳性组3年生存率均低于阴性组;单因素Cox分析提示肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、Rspo1、LGR5、NF-κB/p65阳性是影响胃癌患者预后的危险因素;多因素Cox分析提示淋巴结转移、远处转移、Rspo1及LGR5阳性是影响胃癌患者预后的独立危险因素。结论Rspo1、LGR5、NF-κB/p65的表达与胃癌的发生发展有关;Rspo1-LGR5在激活Wnt/β-catenin通路的同时可能激活NF-κB通路,二者对胃癌发展有协同作用。

Rspos和消化系统肿瘤的关系

特异性顶部盘状底板反应蛋白(roof plate specific spondins,Rspos)是新近发现的Wnt信号通路的重要激活因子,包括Rspo1~4四种分泌蛋白质。Rspos主要通过调节经典Wnt/β-catenin信号通路来调控细胞的增殖与分化,其主要生理功能包括调节性别选择、肢体发育和器官形成与发育等。此外,Rspos还参与了部分恶性肿瘤的发病过程,且在不同类型肿瘤中的作用并不一致。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的作用

目的:本研究旨在探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及其作用机制。方法:受试动物设正常对照组、模型对照组、环黄芪醇20 mg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+IWR-1(Wnt通路抑制剂)8.2μg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+STF-31(GLUT1抑制剂)5.8 mg/kg组。除正常对照组外,其余大鼠经腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,剪去大鼠背部标记区域的皮肤和皮下组织建立皮肤溃疡模型。大鼠按分组灌胃给药14 d,并在给药第5、10、14 d测定大鼠创面愈合率;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量;HE染色检测创面组织的病理变化;免疫组化法检测创面组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)和内皮型一氧化氮合酶(ENOS)的表达情况;细胞划痕法检测环黄芪醇对脐静脉内皮细胞(HUVEC)在LPS诱导的炎症状态下迁移率的影响;Western blot法检测给药第10 d的创面组织和LPS诱导后的HUVEC细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、特异性顶部盘状底板反应蛋白-3(RSPO3)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药第5、10 d时创面愈合率显著降低(P<0.01),创面组织中ENOS的表达和血清SOD活力明显降低(P<0.05或P<0.01),血清MDA含量明显升高(P<0.05或P<0.01);在给药第10 d时,β-catenin、Cyclin D1和MMP2蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇20 mg/kg组大鼠在给药第10 d时创面愈合率显著升高(P<0.01),在给药第5、10 d时血清中SOD活力和创面组织中ENOS的蛋白表达显著升高(P<0.01),β-catenin、cyclin D1和MMP2蛋白的表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,模型对照组细胞的迁移率明显降低(P<0.05或P<0.01),Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇25μg/m L组细胞的迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),Cyclin D1和MMP9蛋白的表达显著上调(P<0.01)。结论:环黄芪醇能促进糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠的创面愈合,其作用机制涉及Wnt/β-catenin信号通路的激活。

Rspos在泌尿生殖系统恶性肿瘤中的研究进展

来源于中胚层的泌尿生殖系统恶性肿瘤十分常见。膀胱癌占我国泌尿系统恶性肿瘤的首位,前列腺癌死亡率在男性恶性肿瘤中排名第二。在女性生殖系统恶性肿瘤中卵巢癌死亡率最高,此外,危及女性生命常见的还有宫颈癌。随着分子生物学技术突飞猛进,研究者不断挖掘肿瘤特异性致癌基因及相关蛋白,为恶性肿瘤早期、准确诊断提供了依据。