靶向DNA特异性B细胞在系统性红斑狼疮中的治疗研究进展

系统性红斑狼疮（SLE）主要是由多克隆自身反应性B细胞介导的自身免疫性疾病。其直接的致病因子是多克隆自身抗体。并以免疫复合物的形式造成多种组织器官损伤。SLE患者普遍性的特点是其血清中存在多种自身抗体。其中。抗双链DNA抗体不仅具有诊断学价值。而且是导致皮肤黏膜、关节和肾脏疾病的主要致病性抗体^[1,2]。作为抗双链DNA抗体来源的DNA特异性B细胞，在发病中扮演关键角色^[3]。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

幽门螺杆菌通过诱导上调B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1(Bmi-1)表达促进人胃癌细胞的侵袭

目的验证幽门螺杆菌(H.pylori)能够通过诱导B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1(Bmi-1)高表达促进胃癌细胞的转移。方法收集82名胃癌患者手术标本,实时定量PCR和免疫组织化学染色检测胃腺癌组织Bmi-1的表达,并回顾性分析Bmi-1表达与胃癌病理特征及预后的相关性;采用pLPCX-Bmi-1质粒转染和H.pylori感染GES-1细胞,在过表达Bmi-1后,TranswellTM实验检测细胞的侵袭能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果胃癌组织中Bmi-1的mRNA及蛋白表达均高于癌旁组织,且高表达Bmi-1与肿瘤浸润程度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移及H.pylori感染相关;转染及H.pylori感染所致的Bmi-1表达上调后,GES-1细胞具有更高的侵袭能力和较低的凋亡比率。结论H.pylori感染能上调Bmi-1表达,抑制胃癌细胞的凋亡并促进其侵袭。

类风湿性关节炎特异性B淋巴细胞的分选与鉴定

目的探讨通过免疫磁珠分选法分离类风湿性关节炎特异性B淋巴细胞效果。方法取10只正常Lewis大鼠(对照组)和10只降植烷诱导的类风湿性关节炎大鼠(实验组),取静脉血通过ELISA检测类风湿因子(RF),取脾细胞检测B细胞的数量和类风湿特异性B细胞的数量,通过免疫磁珠分选出特异性B细胞,将获得的细胞通过流式细胞仪检测分选效率。结果对照组RF的OD值比值为0.92±0.21,实验组为3.14±0.36(P<0.05),差异有统计学意义。对照组B细胞的数量为(3.26±0.91)×108,RF特异性B细胞为(1.52±1.21)×107,实验组B细胞的数量为(3.14±0.36)×108,RF特异性B细胞为(6.63±0.96)×107,实验组RF特异性B细胞明显多于对照组(P<0.05),差异有统计学意义,免疫磁珠分选效率为95%。结论通过免疫磁珠分选法能够获得类风湿性关节炎特异性B细胞。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

在中国,头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)占全部恶性肿瘤的3%,严重影响患者的生命健康。多数研究显示,B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(BMI1)基因在HNSCC中异常表达,其通过调节肿瘤细胞的干性促进肿瘤的发生发展,是一个具有巨大潜力的新型治疗靶点。本文回顾近年来的相关文献,从BMI1对肿瘤发生、增殖、迁移、免疫调节的作用及其抑制剂的应用进展等方面做一综述,为深入研究其作为治疗HNSCC的潜在靶点提供参考。

B细胞特异性激活蛋白与CD20在淋巴组织增生性疾病中的表达

目的 探讨B细胞特异性激活蛋白 (Bcell specificactivatorprotein ,BSAP)在淋巴组织增生性疾病中表达情况及在淋巴瘤鉴别诊断中的意义。方法 观察 6 3例淋巴组织增生性疾病的组织病理学形态 ,按WHO新分类方案进行淋巴瘤分型 ,采用免疫组织化学S P法同步检测比较BSAP和CD2 0的表达。结果 9例淋巴结反应性增生的B淋巴细胞 ,34例B细胞性淋巴瘤的瘤细胞均表达BSAP和CD2 0 ,但BSAP的中等到强阳性表达率 (6 9 8% )高于CD2 0 (5 3 5 % ) ,二者差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;6例霍奇金淋巴瘤H/RS瘤细胞表达阳性率为 83 2 % ;14例T细胞淋巴瘤的肿瘤细胞均不表达BSAP。结论 BSAP表达定位于B淋巴细胞的核内 ,清晰易见 ,在B细胞性淋巴瘤表达多呈强阳性 ,可用于淋巴瘤的分型与鉴别诊断 。

肺腺癌组织中B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点基因1表达与患者临床指标及预后的相关性

目的检测肺腺癌组织中B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点1（Bmil）表达，并分析其与肺腺癌患者的转移、疗效及预后的相关性。方法免疫组织化学方法检测肺腺癌组织Bmil表达。r检验分析Broil表达与临床病理指标的关系，以Kaplan—Meier生存曲线计算生存率，采用Cox分析评估各指标与患者生存之间的关系。结果126例肺腺癌组织中，72例可观察到Bmil阳性细胞，阳性率为57．1％。Broil表达与肺腺癌患者转移及化疗疗效密切相关（P=0．000或P=0．021），且与患者无病生存期和生存期呈明显负相关。多因素分析结果显示，转移、Bmil表达以及转移后化疗疗效均是影响生存时间的独立因素[β值分别为-6．212、1．015、0．867，95％置信区间分别为0．000～0．019、1．727～4．405、1．680～3．372，均P=0．000]。结论Bmil表达与肺腺癌患者的转移及化疗耐药相关，提示预后不良。

在1型糖尿病中清除自身抗原特异性B细胞用于克服免疫耐受的缺失

1型糖尿病是由免疫介导的胰岛素产生细胞——胰岛β细胞的破坏引起的。T细胞直接介导了β细胞的破坏。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1的生物学功能及肿瘤相关性的研究进展

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI1)是第一个被发现的多梳基因家族(PcG)成员,BMI1在乳腺癌、结直肠癌和食管鳞状细胞癌等多种人类恶性肿瘤中表达异常升高,参与细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的调控,与患者的临床特征、化疗耐药性和不良预后密切相关。BMI1基因与干细胞的自我更新和一系列恶性肿瘤的发生、发展及预后密切相关,可能是一个重要的肿瘤治疗靶点,因而日益被重视。本文就BMI1的结构、功能及其在肿瘤细胞中生物学作用的研究进展进行综述。

从HBV特异性免疫细胞角度谈慢性乙型肝炎功能性治愈

慢性乙型肝炎(CHB)患者实现功能性治愈代表患者获得了持久的病毒学抑制和免疫学控制,是目前国内外最新CHB防治指南推荐的理想治疗目标。CHB患者长期直接抗病毒治疗可获得病毒学抑制,但仅有极少数患者能获得功能性治愈,提示迫切需要抗病毒药物和免疫治疗的联合疗法。目前最佳治疗策略是靶向精准清除HBV感染的肝细胞,减少肝组织损伤;但这依赖于肝脏中HBV特异性免疫细胞。因此恢复或增强HBV特异性T淋巴细胞和B淋巴细胞的功能是实现CHB功能治愈的关键策略。

B细胞特异性激活蛋白在神经内分泌肿瘤中的表达

目的:观察B细胞特异性激活蛋白(PAX5)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达。方法:经证实为NEN病例标本56例,用免疫组化SP法检测其石蜡包埋肿瘤组织中PAX5和Ki67表达,比较PAX5在不同肿瘤大小(肿块直径≤2 cm或>2 cm)、Ki67表达率(Ki67≤20%或>20%)及TNM分期(早期或晚期)中的表达情况。结果:PAX5在Ki67>20%病例中的阳性表达率(59.52%)高于Ki67≤20%病例(21.43%),在晚期病例(62.16%)高于早期病例(26.32%),差异有统计学意义(P<0.05);在不同肿块直径病例中的阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.78)。结论:PAX5在NEN中有一定表达,表达与肿瘤增殖活性(Ki67表达率)及TNM分期有关。

SLE患者CD24-CD20hiCD11c+B细胞与mTORC1通路的相关性分析

目的 分析特异B细胞与mTORC1信号通路中PI3K、AKt、mTOR mRNA表达量的相关性。方法 收集2020年1月-2021年6月在厦门二院门诊或住院SLE患者40例及健康人40例的外周血、临床资料,用流式检测SLE患者特异表型的B细胞,对该B细胞的表达比例和临床活动指标进行相关性分析;用q PCR法测mTORC1信号通路中PI3K、A Kt、mTOR基因的表达水平,并分析其与该特异B细胞的相关性。结果 初发未治SLE患者外周血中存在高比例的CD24-CD20hiCD11c+特异性B细胞;特异性B细胞的表达比例与抗dsDNA定量、SLEDAI积分、24 h尿蛋白定量正相关(P <0.05);特异性B细胞的表达比例与补体C3、补体C4负相关(P <0.05);SLE组PI3K、AKt、mTOR mRNA的表达显著高于健康(P <0.05);特异性B细胞的表达比例与PI3K、AKt、mTOR mRNA的表达量呈正相关。结论 SLE患者外周血中CD24-CD20hiCD11c+特异性B细胞的比例显著增高,该特异性B细胞的表达比例可能与抗dsDNA定量、SLEDAI积分、24小时尿蛋白定量、补体C3、C4及mTORC1信号通路中PI3K、AKt、mTOR mRNA的表达量具有一定相关性。

血清AIF-1、Bmi-1、MAP19联合诊断宫颈癌的价值分析

目的探究宫颈癌患者血清中同种异体移植物炎性因子1(AIF-1)、B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1(Bmi-1)、甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAP19)水平变化及对宫颈癌患者的诊断价值。方法选取2023年1—12月武汉大学中南医院妇产科收治宫颈癌患者180例为观察组,另选取同期健康体检者180例为健康对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组研究对象血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平;比较宫颈癌不同分期患者血清中AIF-1、Bmi-1、MAP19水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平对宫颈癌的诊断价值。结果与健康对照组比较,观察组患者血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平上升(t=13.054、13.598、10.601,P均<0.001);不同分期宫颈癌患者血清中AIF-1、Bmi-1、MAP19水平随分期升高而升高(F=32.001、8.232、10.602,P均<0.001);宫颈癌患者血清AIF-1、Bmi-1、MAP19高水平在病理低分化、HPV阳性、FIGOⅢ~Ⅳ期和淋巴结转移中比例升高(AIF-1:χ^(2)=41.162、27.607、13.718、23.824,P均<0.001;Bmi-1:χ^(2)=33.563、22.060、22.599、18.451,P均<0.001;MAP19:χ^(2)=49.585、14.913、25.545、13.605,P均<0.001);血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平及三者联合预测宫颈癌病变的AUC分别为0.759、0.726、0.751、0.839,三者联合优于各自单独预测价值(Z=2.499、3.363、2.749,P=0.012、<0.001、0.016)。结论宫颈癌患者血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平显著上升,且随宫颈癌分期升高而升高,三者联合对宫颈癌具有较高的诊断效能。

新型冠状病毒S1、S2和NTD抗原特异性B细胞及其亚型标记技术的建立与应用

建立一种新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS⁃CoV⁃2)S1、S2、NTD蛋白特异性B细胞及其亚型的标记技术,该技术可通过与流式细胞术联用检测抗原特异性B细胞及其亚型含量,或与10×免疫组库联用对抗原特异性B细胞进行测序。首先,测试最佳蛋白使用浓度:将生物素标记的S1、S2和NTD蛋白按照600 nmol/L、1200 nmol/L、2400 nmol/L、3600 nmol/L和4800 nmol/L分别与荧光素⁃亲和素偶联,通过流式检测S1+CD19+B、S2+CD19+B、NTD+CD19+B细胞占比,确定不同蛋白对应的最佳使用浓度;进一步优化生物素⁃蛋白与荧光素⁃亲和素的比例:将检测生物素⁃蛋白与荧光⁃亲和素的摩尔比分别按照4∶1,5∶1和6∶1比例测试,对小鼠脾脏S1+CD19+B、S2+CD19+B、NTD+CD19+B细胞及S1+CD19+CD27+B、S2+CD19+CD27+B、NTD+CD19+CD27+B细胞的检测效果,优化荧光素⁃亲和素的最佳使用量;通过测试BV421、Super Bright 600、PE、PE/Cy7和APC等荧光对小鼠脾细胞的非特异结合能力,选择非特异结合较弱的荧光;根据筛选的荧光,给生物素化的S1、S2和NTD均标记PE和APC荧光,建立检测这3个蛋白特异性B细胞和记忆B细胞的方法,并测试带核酸序列的荧光素⁃亲和素对B细胞和记忆B细胞的检测效果,测试该方法的稳定性。S1、S2和NTD蛋白浓度分别为4800 nmol/L、3600 nmol/L和3600 nmol/L时,对B细胞的检测效果最佳,且对阴性小鼠的染色效果较低;生物素⁃S1蛋白与荧光素⁃亲和素的最佳摩尔比为6∶1时,检测结果最佳;生物素⁃S2蛋白、生物素⁃NTD蛋白与荧光素⁃亲和素均在4:1时,检测结果最佳,且在该浓度下BV421、APC、Super Bright 600、PE与细胞的非特异结合较弱;建立了一种检测SARS⁃CoV⁃2 S1、S2和NTD抗原特异性B细胞及记忆B细胞的方法,通过对一批样本的重复3次检测,发现该方法较为稳定,CV值≤20%。通过抗原特异性B细胞标记技术,实现了对SARS⁃CoV⁃2 S1、S2和NTD蛋白特异性B细胞及其亚型标记技术方法,并且具有良好的适用性,可用于与流式细胞术检测抗原特异性B细胞及记忆B细胞和10×免疫组库测序联合使用。

siRNA干扰BMI-1基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制

目的:对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI-1基因及下游p16INK4a、p14ARF基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰BMI-1基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法:细胞免疫荧光观察BMI-1、p16INK4a和p14ARF蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real-time RT-PCR检测EJ细胞及膀胱正常移行上皮细胞中3种基因的表达水平,Western blotting检测蛋白水平。构建干扰BMI-1基因siRNA,通过脂质体转染导入EJ细胞中,设立空白对照和阴性干扰对照组,检测BMI-1及下游p16、p14基因表达水平及蛋白表达水平的变化;以CCK-8检测细胞生长观察siRNA干扰BMI-1表达对EJ细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡的改变。结果:BMI-1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞,而p16INK4a和p14ARFmRNA及蛋白在EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰BMI-1后可以上调EJ细胞中其下游p16和p14 mRNA及蛋白水平,使EJ细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。结论:siRNA干扰BMI-1基因表达对EJ细胞的体外生长具有明显的抑制作用,其作用机制与上调其下游p16INK4a、p14ARF基因的表达有关。

Pax5在早期B细胞定向分化发育中的作用

B细胞的定向分化是多个转录因子参与的复杂调控过程,其中Pax5基因编码的B细胞特异性激活蛋白(BSAP)在B细胞的早期定向分化中起着决定性作用。本文着重从Pax5激活多个B系特异性基因、抑制非B系基因的表达和Pax5-/-proB细胞的多向分化潜能等方面,综述Pax5在B细胞早期定向分化中的作用。

LncRNA-PVT 1/miR-15 a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siRNA)和si-PVT1 NC(转染PVT1 siRNAscramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-Bmi-1(转染Bmi-1的siRNA)和si-Bmi-1 NC(转染Bmi-1的siRNAscramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。【结果】抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(P<0.01);抑制PVT1后,Bmi-1的表达出现降低,而miR-15a表达增高(P<0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而Bmi-1表达出现降低(P<0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(P<0.01)。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比,si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后,miR-15a表达下降,PVT1和Bmi-1的表达降低均出现了逆转;而si-PVT1组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,PVT1和Bmi-1的表达出现进一步下降。【结论】LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1(lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。

过表达BMI-1对HeLa细胞中HOX基因表达和细胞周期的影响

目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加强型绿色荧光蛋白(BMI-1-EGFP)表达后,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中周期素依赖性激酶抑制剂P16INK4a、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、同源盒A9(HOXA9)、同源盒B4(HOXB4)和同源盒C13(HOXC13)mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期。结果:(1)在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13 mRNA的表达,分别平均降低为对照组的9.2%、10.9%和69.7%(P<0.01),而hTERT和HOXB4 mRNA的表达变化无显著差异(P>0.05)。(2)pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞后,G1期细胞由65.68%减少至50.53%,S期细胞则由27.17%增加至39.59%(P<0.01)。结论:真核表达载体pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞过表达外源性BMI-1,显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13的表达,同时G1期细胞减少、S期细胞增加,这可能是BMI-1参与肿瘤发生发展的机制之一。

敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞

B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体BMI-1shRNA2和BMI-1shRNA4,转染人宫颈癌细胞系HeLa并筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测BMI-1蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a(cyclin-dependentkinase inhibitor p16INK4a)、人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、同源盒A9(homeoboxA9,HOXA9)、同源盒B4(homeoboxB4,HOXB4)和同源盒C13(homeoboxC13,HOXC13)基因mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化.结果表明,在稳定转染BMI-1shRNA2、BMI-1shRNA4的HeLa细胞中,显著抑制BMI-1蛋白表达,上调p16INK4a、HOXA9和HOXC13三者mRNA表达,而hTERT和HOXB4两者mRNA的表达水平无明显改变,同时G1期细胞增加、S期细胞减少,提示敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G1期阻滞,BMI-1可能是宫颈癌基因治疗的靶分子.