CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin诱导C57BL/6小鼠HBV特异性CTL反应的机制

目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg_(18-27)-Tapasin通过介导JAK/STAT通路诱导近交系C57BL/6小鼠HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)反应.方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:CTPHBcAg_(18-27)-Tapasin实验组、CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin+AG490对照组、AG490对照组、PBS空白组.融合蛋白经肌肉注射免疫小鼠,腹腔注射AG490阻断JAK/STAT通路,CCK-8比色法检测T淋巴细胞增殖活性;流式细胞术检测T淋巴细胞内的的细胞因子;ELISA检测T淋巴细胞分泌细胞因子,Real-time PCR检测JAK/STAT通路信号分子表达水平.结果:CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin组相比CTPHBcAg_(18-27)-Tapasin+AG490组CD8^+IFN-γ^+T双阳性细胞百分比显著增加(P<0.01),淋巴细胞增殖活性差异具有显著性(P<0.01),Th1型细胞因子分泌水平显著增加(P<0.01),其他各组之间没有显著性差异,JAK/STAT信号通路信号中Jak2,STAT4 mRNA分子表达水平CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin组相比其他对照组表达水平差异具有显著性(P<0.05),CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin组Tyk2、STAT1mRNA的分子表达水平相比其他对照组表达水平具有显著性差异(P<0.01).结论:本研究表明CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin通过JAK/STAT信号通路促进Th1型细胞因子的分泌而促进特异性CTL反应.

DNA免疫诱导的病毒特异性CTL反应

DNA免疫可诱导抗多种不同病毒的特异性CTL反应,包括DNA病毒、RNA病毒和逆转录病毒。在病毒T细胞表位5’端插入内质网信号识别序列可大大增强诱导CTL应答的能力。在病毒感染的防治,尤其在持续性病毒感染中,DNA免疫诱导的CTL对清除病毒感染具有重要意义。

含HPV16 E7的病毒样颗粒诱导小鼠产生特异性CTL反应

目的探讨含BPVL1/HPV16E7嵌合型乳头瘤病毒样颗粒(VLPs)在动物小鼠体内的免疫学特性。方法将HPV16E7基因分为(a)、(b)、(c)3段,与BPVL1连接后表达的BPVL1/HPV16E7(a)、(b)、(c)嵌合型VLP分别免疫小鼠C57BL/6J,对其淋巴结淋巴细胞进行细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL)分析。结果接受嵌合型VLPBPVL1/HPV16E7(b)免疫的小鼠淋巴结淋巴细胞可以引发很强的对C-2细胞(HPV16E7aa47-59转染的EL-4细胞)的特异性CTL反应,但不能对EL-4细胞产生细胞毒性作用。结论含BPVL1/HPV16E7嵌合型VLP作为抗原输送系统致敏小鼠T淋巴细胞并引发抗原特异性CTL反应,可能为HPV疫苗的设计提供一个新手段。

gp96多肽复合物对树突状细胞成熟的影响

目的研究热休克蛋白gp96多肽复合物与小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)成熟的关系。方法采用GM-CSF、IL-4刺激培养小鼠骨髓细胞,增殖产生大量DC;从小鼠肝癌细胞株H22细胞中提取gp96肽复合物,体外修饰DC;通过流式细胞仪检测上清液IL-12、TNF-α细胞因子含量和DC表面主要组织相容性Ⅱ类抗原、CD40、CD80等分子表达;DC与小鼠脾淋巴细胞共同培育后,检测CD4、CD8和IFN-γ、IL-10双阳性细胞比例;以51Cr释放法测定细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果gp96多肽复合物修饰的DC大量分泌IL-12、TNF-α等细胞因子,高表达MHCⅡ类抗原、CD40、CD80等分子;并且能激活小鼠脾淋巴细胞,CD8+-IFN-γ+和CD4+-IFN-γ+双阳性细胞比例显著升高;能够特异性的杀伤H22癌细胞。结论gp96多肽复合物能够诱导DC成熟,体外产生特异性CTL反应。