目的:通过噬菌体展示技术制备抗人IgE纳米抗体,将其用于磁微粒化学发光平台建立一种猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法。方法:在WHO/IUIS过敏原数据库中检索猫致敏蛋白信息,合成序列后在原核表达系统中表达和纯化猫皮屑致敏蛋白Fel d 1...目的:通过噬菌体展示技术制备抗人IgE纳米抗体,将其用于磁微粒化学发光平台建立一种猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法。方法:在WHO/IUIS过敏原数据库中检索猫致敏蛋白信息,合成序列后在原核表达系统中表达和纯化猫皮屑致敏蛋白Fel d 1。使用人源IgE免疫新疆单峰驼提取淋巴细胞中的RNA建立噬菌体展示纳米抗体库,分析库容、多样性和插入率,通过筛选和鉴定获得抗人IgE纳米抗体。使用重组过敏原偶联磁微粒和吖啶酯标记纳米抗体,建立磁微粒化学法猫皮屑特异性IgE抗体检测方法。结果:噬菌体展示库的库容为1.88×108 cfu/ml,插入率为93.6%,纳米抗体纯度>95%。检测方法的线性范围为0.1~100 U/ml,与ImmunoCAP检测系统临床对比有较好的一致性。结论:成功建立了基于纳米抗体的猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法,为猫过敏性疾病辅助诊断提供了技术基础。展开更多
文摘目的:通过噬菌体展示技术制备抗人IgE纳米抗体,将其用于磁微粒化学发光平台建立一种猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法。方法:在WHO/IUIS过敏原数据库中检索猫致敏蛋白信息,合成序列后在原核表达系统中表达和纯化猫皮屑致敏蛋白Fel d 1。使用人源IgE免疫新疆单峰驼提取淋巴细胞中的RNA建立噬菌体展示纳米抗体库,分析库容、多样性和插入率,通过筛选和鉴定获得抗人IgE纳米抗体。使用重组过敏原偶联磁微粒和吖啶酯标记纳米抗体,建立磁微粒化学法猫皮屑特异性IgE抗体检测方法。结果:噬菌体展示库的库容为1.88×108 cfu/ml,插入率为93.6%,纳米抗体纯度>95%。检测方法的线性范围为0.1~100 U/ml,与ImmunoCAP检测系统临床对比有较好的一致性。结论:成功建立了基于纳米抗体的猫皮屑特异性IgE抗体超敏检测方法,为猫过敏性疾病辅助诊断提供了技术基础。
文摘目的探讨酶联免疫捕获法检测对耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE(specific immunoglobulin E,sIgE)水平分析的价值。方法选取广州市中西医结合医院2019年3月—2022年2月收治的耳鼻喉科患儿血清样本300份,使用酶联免疫捕获法检测其粉尘螨、户尘螨、狗毛屑、猫毛屑、艾蒿花粉、链格孢共计6种常见的吸入物过敏原sIgE,记录精密度、灵敏度、线性范围等数据,并与Immuno CAP系统的评价效能进行对比分析。结果酶联免疫捕获法检测6种过敏原sIgE的批内变异系数(coefficient of variation,CV)值均<7%,而总CV%<8%。6种过敏原的定量限(limit of quantitation,LOQ)值均低于0.35 kU/L,均为阴性。相关系数均大于产品说明书的阈值0.975,线性范围良好。不同过敏原的回归方程斜率差异均有统计学意义(P<0.05)。两系统定量检测结果相关性较强。两种检测方法的阳性符合率为77.33%,阴性符合率为98.67%,Kappa值为0.833,P<0.05。结论酶联免疫捕获法检测对耳鼻喉科患儿血清过敏原特异性IgE水平的评价效能,具有较好的精密度与灵敏度,且与Immuno CAP系统的相关性较好,作为一种自动化全定量检测手段,能够满足临床耳鼻喉科常见过敏原检验的要求,具有使用价值。此文的研究结果为儿童耳鼻喉科常见过敏性疾病的诊断和鉴别诊断后期标准制定提供了借鉴内容。