-
题名微囊藻毒素-LR特异性RNA配基体外筛选探讨
被引量:2
- 1
-
-
作者
谷康定
Michael Famulok
-
机构
华中科技大学同济医学院环境医学研究所
Kekule-Institut fue Organische Chemie und Biochmie der Universitat Bonn
-
出处
《中华预防医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期369-373,共5页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(20277013)
2003年度WHOFellowship资助项目
-
文摘
目的利用大容量寡核苷酸库筛选富集具有分子识别、能与微囊藻毒素LR特异结合的RNA配基。方法将一段中间为40个随机核苷酸排列、两端为恒定区域的DNA库转录成RNA随机库,然后将RNA随机库与共价结合在琼脂糖上的微囊藻毒素LR反应、洗脱、收集能与靶分子特异结合的微量RNA,反转录为cDNA,PCR扩增。如此重复,经13轮筛选富集,再对筛选核酸配基克隆、测序,进一步比较各克隆RNA配基的亲和性。结果能与靶分子特异结合的微量RNA经过每轮筛选逐步增加,到第11~13轮进入平台期;60个克隆产物中有38个成功测定序列和分析,将其分成3组5对,所有克隆序列中未发现组间共有保守序列。选择有代表性的克隆RNA配基,比较其对靶分子的亲和力,克隆RNA配基MC1、MC25、MC17和MC32对靶分子微囊藻毒素LR具有较高的亲和力;他们与不同浓度系列的靶分子反应,经数学模型外推克隆MC1、MC25、MC17和MC32RNA配基以及RNA随机库对微囊藻毒素LR的解离常数值分别为84、46、57、91和>256μmol/L,其中MC25检测微囊藻毒素LR最低下限至少可达05μmol/L。结论从大容量RNA随机库中分离富集到一类能够识别并特异性结合微囊藻毒素LR的配基,为研究与检测环境中藻类毒素提供了一种新的手段。
-
关键词
微囊藻毒素-LR
特异性rna配基
体外筛选
寡核苷酸类
-
Keywords
Peptides,cyclic
Oligonucleotides
-
分类号
R114
[医药卫生—卫生毒理学]
-