FSHR－LHR特异肽段重组疫苗对内蒙古公绒山羊睾酮分泌水平的影响

为研究FSHR-LHR特异肽段重组疫苗（以后简称受体疫苗）对内蒙古公绒山羊睾酮分泌的影响，分别用促卵泡素受体（FSHR）疫苗和促黄体素受体（LHR）疫苗及其二者受体的混合疫苗对内蒙古公绒山羊进行了免疫实验。实验从1月龄开始，每45d免疫1次（接种疫苗采用股部和体两侧皮下3点注射法），至12月龄结束，每次实验都要采血，制备血清，并用ELISA和RIA方法分别测定血清抗体与睾酮水平；同时，对羊的体重，产绒量，绒厚，睾丸性状，爬跨行为进行检测和观察。结果表明；各实验组在抗体水平明显高于对照组；实验1，2组的睾酮水平与对照组差异不显著（P>0.05)；实验3组的睾酮水平和爬跨次数明显低于对照组（P<0.05)，证明该组受体疫苗能有效地抑制公绒山羊睾酮分泌和推迟性成熟；各实验组的体重，产绒量，绒厚，睾丸性状与对照组差异不显著（P>0.05)。说明注射的该受体疫苗对公绒山羊生长发育无不良影响。

同位素特异肽段在乳清蛋白定量分析中的应用

采用液相色谱串联质谱法,以同位素特异肽段作为内标物,对婴幼儿配方奶粉中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行了定量分析。结果表明,方法的线性关系良好,实验室内重复性为α-乳白蛋白的日内相对标准偏差(RSD)在1.23%~10.1%之间,日间RSD在4.13%~12.2%;β-乳球蛋白的日内RSD在1.06%~10.3%之间,日间RSD在1.52%~12.0%之间。实验室间的重现性为α-乳白蛋白的RSD在10.4%~18.4%之间;β-乳球蛋白的RSD在10.7%~23.6%之间。表明此方法可准确测定婴幼儿奶粉中的α-乳白蛋白及β-乳球蛋白的质量分数,但实验室间的稳定性需要进一步考察。

风疹病毒E1特异肽段的重组质粒载体构建

目的:构建风疹病毒(RV)E1特异肽段的重组质粒载体,以期表达RVE1特异肽段的重组蛋白。方法:抽提RV减毒活疫苗Wistar RA27/3株的基因组RNA后逆转录,用PCR方法扩增E1特异肽段的基因片段;扩增产物经纯化后克隆至pGEX-2T质粒载体,挑取重组质粒阳性克隆进行双酶切鉴定和测序。结果:成功克隆出330bp左右的目的片段,重组质粒经测序后与预期序列一致。结论:RVE1特异肽段的基因片段的成功克隆及重组质粒的构建为进一步表达相应重组蛋白奠定了基础。

基于生物信息学和质谱技术的阿胶特异性肽段筛选与鉴定

目的:建立基于生物信息技术和液质联用技术识别特征肽鉴别阿胶的新方法。方法:利用生物信息技术对驴皮、牛皮和猪皮I型胶原蛋白α1链氨基酸序列进行同源性比对发现3种皮类胶原蛋白氨基酸序列存在差异,通过生物学软件模拟胰酶酶解,分析比对驴皮、牛皮、猪皮来源I型胶原蛋白α1链酶解肽段,然后通过实验对样品前处理条件进行系统摸索,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)进行验证。结果:筛选出12个驴皮的特异性肽段,鉴定出1个与预测结果一致的驴皮特异性肽段,其质荷比(m/z)为766.4,分子量为1 530.802 2,对应的多肽序列为GEAGPAGPAGPIGPVGAR,利用特征肽段对10组阿胶样品进行鉴定。结论:生物信息技术结合UPLC/Q-TOF-MS检测出的驴皮特征肽可有效、特异、准确地对阿胶药材进行专属性鉴定。

组织多肽特异抗原在监测乳腺癌转移中的临床应用

目的 探讨组织多肽特异抗原 (TPS)监测乳腺癌转移的临床应用价值。方法 采用ELISA法测定 4 0例健康体检者及10 8例乳腺癌患者 (其中 5 1例为治疗后转移复发 )的血清TPS、CA15 3、CEA及TPA水平 ,观察其中 2 3例转移性乳腺癌治疗前后标志物的变化。结果 术后稳定未转移者各标志物水平较术前显著下降 (P <0 .0 5 )。术后转移复发者标志物水平较术前显著升高 (P <0 .0 5 )。检出乳腺癌转移复发最敏感的指标是TPS (78.7% ) ,特异性最强的是CA15 3(96 .5 % ) ,TPS与CA15 3联合检测敏感性、特异性互补 ,有效性提高 (78.9% ) ,若再加入CEA ,可进一步提高特异性和有效性 (87.5 % )。TPS对乳腺癌骨转移最为敏感 ,远处淋巴结转移的乳腺癌患者TPS水平最高。转移性乳腺癌治疗有效 (CR +PR +SD)各标记物与治疗前相比 ,均无显著性变化 (P >0 .0 5 ) ,治疗无效 (PD) ,TPS与TPA水平均显著升高 (P <0 .0 1)。结论 TPS是检出转移性乳腺癌最为敏感的标志物 ,尤其是骨转移的患者。TPS与CA15 3、CEA联合是监测转移性乳腺癌的最佳组合。TPS水平升高表明病情进展 。

诸葛菜花粉不同发育时期特异性蛋白多肽研究

对诸葛菜(Orychophagmusviolaceus)花粉不同发育时期蛋白多肽进行双向电泳,结果发现花粉发育的3个时期出现蛋白多肽点的数量为:单核期121个,二核期192个,三核期275个.3个时期共有(指等电点和分子量相同)的蛋白多肽点有100个.各时期特有的蛋白多肽点分别为:单核期9个,二核期15个,三核期110个.三核期蛋白多肽点数量和特有蛋白多肽点数量的大量增加,说明诸葛菜花粉发育晚期蛋白表达异常活跃,为受精提供了物质上的准备.同时还发现不同发育时期的花粉,其相应蛋白多肽的含量有增有减.

附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶基因调控的研究进展

附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶(epididymal specific glutathione peroxidase,GPx5)可保护精子免受氧化应激,维持精子遗传信息的完整性,促进精子发育成熟,其重要生理功能在提高动物繁殖力上有着不可替代的作用,但其基因调控转录表达的机制尚不明确。现作者主要对基因表达特性、表达调控和转录调控等内容进行综述。

神经组织特异多肽治疗糖尿病周围神经病变临床疗效观察

目的 为观察神经组织特异多肽(NSE)对糖尿病周围神经病变的作用设计此实验.方法 治疗组105例糖尿病周围神经病变患者给予神经组织特异多肽针剂90μg溶于生理盐水500ml中静脉滴注,每天一次.两周一疗程,每疗程间歇4-5天,共两个疗程.结果 神经组织特异多肽能有效改善或减轻糖尿病周围神经病变所致的疼痛、麻木和其它感觉障碍,总有效率为93.33%,同对照组相比有显著差异性(P＜0.001).尽管治疗前后周围神经的传导速度有所增加,但经统计学比较两者无显著差异性.结论 神经组织特异多肽能有效地改善或减轻糖尿病周围神经由病变所引起的疼痛、麻木,缩小感觉障碍平面.间接说明微血管因素在糖尿病周围发病机制中起着较为重要的作用.

靶向髓样分化蛋白—2特异性抗炎多肽的优化

目的对原始多肽即靶向髓样分化蛋白-2（MD-2）拮抗多肽T6、T11 进行突变多肽库的构建、筛选和功能鉴定,以获得具有更高抗炎活性的多肽.方法：以前期合成的可阻断MD-2 与内毒素（LPS） 结合但效率不高的原始多肽T6 和T11 序列为基础,每次随机突变相邻的3~5 个氨基酸,保留剩余氨基酸,并同时在肽链的氨基端和羧基端引入额外的两个氨基酸,构建大容量的噬菌体突变肽库;再用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合的多肽.最后用细胞实验和动物实验验证所获特异多肽的抗炎效果：①用获得的多肽200 μg/ml 分别孵育巨噬细胞和人单核白细胞2 h,再用内毒素（LPS）1 μg/ml 刺激6 h.以单纯细胞培养液培养的细胞和LPS 刺激6 h 的细胞作对照.② C57 小鼠腹腔注射获得的多肽200 μg/ml, 1 h 后腹腔注射LPS 400 μg/ml,6 h 后取血.以腹腔注射生理盐水1 ml 或LPS 的小鼠作对照.每组5 只小鼠.采用ELISA 法测定各组细胞培养上清和各组小鼠血清的肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平.结果：成功构建出原始多肽T6 和T11 序列为基础的突变肽库,用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合多肽A8、H2、F5、H5、H9,通过细胞实验筛选得到有抑炎效果的多肽2 条（A8、H2）,可以明显抑制LPS 所致细胞分泌TNF-α 和IL-6 水平的增高.动物实验发现只有1 条多肽（H2）可以明显抑制LPS 所致小鼠血清TNF-α 和IL-6 水平的增高.结论：成功构建了突变肽库,并从中筛选出一条具有高效抗炎效应的多肽.

利用噬菌体随机肽库筛选人肝再生增强因子特异结合肽及其抗肝癌作用的研究

目的利用噬菌体随机肽库筛选人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)特异结合肽并研究其抗肝癌作用。方法以hALR为靶分子,利用Ph.D.TM噬菌体肽展示系统筛选出与hALR特异性结合的单克隆噬菌体,ELISA法鉴定筛选出的单克隆噬菌体与hALR的结合性,对特异性结合噬菌体DNA中插入片段进行PCR扩增、测序及短肽合成,MTS法检测特异结合肽对人HepG2肝癌细胞增殖的影响,观察特异结合肽对裸鼠人HepG2肝癌移植瘤生长的影响。结果经过3轮生物淘筛,特异性结合噬菌体得到富集;筛选到的单克隆噬菌体与hALR结合具有特异性(与对照组比较P<0.05);特异结合肽在体外能抑制人HepG2肝癌细胞增殖(24 h抑制率为46.2%vs 6.5%,P<0.01;48 h抑制率为23.6%vs 5.9%,P<0.05),在体内能抑制裸鼠人HepG2肝癌移植瘤生长[(1.250±0.512)cm3vs(4.590±0.398)cm3,P<0.01;(1.100±0.453)g vs(3.794±0.299)g,P<0.01];该特异结合肽免疫小鼠后机体内无相应抗体检出,且对裸鼠的重要脏器组织结构及功能无明显损害。结论利用噬菌体肽库筛选到hALR特异结合肽,该短肽通过阻断hALR促肝癌细胞增殖作用,能抑制人HepG2肝癌细胞在体内外增殖,达到抗肝癌的作用,同时产生较低的免疫原性及毒性损害。

金特异性结合短肽介导的重组杆状病毒与胶体金构成的纳米复合体

纳米金在生物探针方面的应用技术是重要的研究方向,这一技术的关键在于纳米金与生物分子有效的结合,本文通过基因重组策略,研究杆状病毒表面展示技术与金特异结合肽介导的固定化方法联用以构建生物-无机复合材料的可行性。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将合成的金特异结合肽基因融合到杆状病毒BmNPV囊膜糖蛋白gp64的N端信号肽与成熟蛋白之间构成转移质粒载体,经过转座得到重组穿梭质粒pFB-gp64-Au,转染Sf9昆虫细胞后收获多角体启动子控制下表达融合蛋白的重组AcMNPV。同时采用硼氢化钠还原法制备得到胶体金,进行组建病毒-胶体金复合结构的初步研究。结果表明,成功构建的重组穿梭质粒转染细胞后得到囊膜表面经金无机结合肽修饰的AcMNPV重组病毒,并通过透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)观察到由金特异结合肽所介导的病毒-胶体金的复合结构。这项研究有助于进行生物-无机复合体系构建及纳米材料在生物学领域应用的研究。

特异胎盘肽加光量子联合中药治疗慢性乙肝240例

研究证实特异胎盘肽具有免疫活性，可增加机体的细胞免疫功能，可作为免疫调解剂。紫外线充氧自体血回输具有改善微循环和氧的利用，增强免疫功能和白细胞的吞噬作用。慢肝福（中药丸剂）具有活血化瘀、软坚、缩脾、调解血浆蛋白之功。联合治疗慢性乙肝，临床治愈率达８９．６％，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的阴转率分别为２３．４％和６５．４％；随访复发率为９．７％，出院时进步和未治愈者随访中各有１１例（５７．９％）和４例（６６．７％）临床治愈。

超高效液相色谱-电喷雾质谱法检测花生过敏原Ara h 2

目的建立烘培食品中花生过敏原Ara h 2的液相质谱联用定量检测方法。方法选择花生蛋白中的致敏蛋白Ara h 2作为目标蛋白,筛选出该致敏蛋白的特异肽,人工合成特异肽标准品和特异肽内标,从而建立直接检测花生致敏蛋白Ara h 2的准确定量方法。同时还对全国不同地区的20种花生中致敏蛋白Ara h 2的含量进行检测分析,初步统计得出致敏蛋白Ara h 2和花生蛋白的换算系数,并以Ara h 2作为生物标记物检测10种烘培食品中花生蛋白的残留量。结果花生样品中致敏蛋白Ara h 2的定量限为4.45μg/g,回收率在106.0%~107.8%之间。烘培食品中,定量限可达到6.23μg/g,回收率在107.0%~113.2%之间。结论本方法特异性强、灵敏度高、定量准确,具有良好的应用前景。

基于蛋白质组学和液相色谱-三重四级杆/线性离子阱串联质谱测定鱼糜制品中的大豆过敏原蛋白

目的:建立鱼糜制品中痕量大豆过敏原蛋白的液相色谱-三重四级杆/线性离子阱串联质谱(Qtrap-LCMS/MS)的检测方法。方法:选择大豆中的致敏蛋白Glycinin G2作为目标蛋白,筛选出该致敏蛋白的特异肽段:EAFGVNMQIVR,人工合成特异肽段,建立联合应用多反应监测-信息依赖-增强型子离子扫描(MRM-IDA-EPI)定性定量测定鱼糜制品中痕量大豆过敏蛋白的方法。结果:鱼糜制品中大豆过敏原蛋白定量限为:0.108μg/g。方法的线性方程及相关系数:Y=14895 X-38916,R^2=0.9975。方法的回收率78.2~108.3%。结论:本方法采用多反应监测定量的同时结合了增强子离子扫描谱库检索进一步定性,实现了同时定性和定量测定,可以有效的应用到鱼糜制品中大豆过敏原蛋白的检测,具有良好的应用前景。

血清组织多肽特异抗原水平与肺癌生物学行为的关系

目的 探讨血清组织多肽特异抗原 (TPS)水平与肺癌生物学行为的关系及其对肺癌的诊断价值。方法 采用酶联免疫吸附分析法 (ELISA)测定 69例肺癌患者及 2 0例作为对照的肺结核及肺炎患者血清TPS水平。结果 肺癌患者血清TPS水平 (2 73± 1 72 )U/L明显高于对照组患者[(1 1 5± 97)U/L ,P <0 0 0 1 ] ;52例发生转移的肺癌患者其血清TPS水平 (30 1± 1 2 7)U/L显著高于未转移者 [(1 83± 97)U/L ,P <0 0 1 ] ;TNM分期的Ⅲ期、Ⅳ期患者组TPS水平显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者组(P <0 0 1 ,P <0 0 0 1 ) ;TPS与肺癌的组织分型有关 ,小细胞肺癌组患者TPS水平 (346± 1 63)U/L显著高于非小细胞肺癌组患者 [(2 4 8± 1 65)U/L ,P <0 0 5] ;1 6例接受化疗的肺癌患者化疗后TPS水平(1 78± 80 )U/L显著低于化疗前 [(2 52± 1 66)U/L ,P <0 0 5] ;TPS与癌胚抗原 (CEA) (P <0 0 1 )、神经元特异烯醇化酶 (NSE) (P <0 0 5)和组织多肽抗原 (TPA) (P <0 0 5)呈正相关 ,但与 1 9片段角质蛋白(CYFRA 2 1 1 ) (P >0 0 5)无明显相关。结论 血清TPS含量与肺癌临床分期、组织分型及转移密切相关 。

血清TPS、NSE、CEA、β_2MG水平与小细胞肺癌生物学关系的探讨

目的:探讨血清组织多肽特异性抗原(TPS)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)和β2微球蛋白(β2-mG)水平与小细胞肺癌(SCLC)生物学行为的关系及其对肺癌的诊断价值。方法:采用ELISA和免疫放射分析法(IRMA)测定94例小细胞肺癌患者,86例肺良性疾病患者和89例正常对照组4项标志物的水平。结果:小细胞肺癌组血清TPS、NSE水平[(437.8±516.6)U/L、(76.8±91.4)μg/L]不但高于肺良性疾病组[(143.6±78.7)U/L、(13.3±10.8)μg/L]和正常对照组[(98.4±58.9)U/L、(10.1±5.7)μg/L)],P<0.01。CEA和β2-mG水平测定中,SCLC组亦高于良性疾病组和正常对照组(P<0.01),则以TPS、NSE水平为指标诊断SCLC的敏感性、特异性及准确性分别为84.4%、87.8%、83.6%和79.3%、93.7%、88.3%,高于CEA和β2-mG。此外,发生转移的SCLC血清中TPS、NSE水平高于未转移组,转移灶数目越多,则TPS、NSE水平越高。每天吸烟30～40支可达10～24倍,吸烟量与肺癌之间存在着量效关系。结论:血清TPS、NSE、CEA和β2-mG对于小细胞肺癌的早斯诊断有一定的价值,4项联合检测则有明显的互补性,其水平与肺癌转移密切相关。

TPS对转移性乳腺癌的临床应用价值

目的 探讨TPS对转移性乳腺癌的临床应用价值。方法 采用ELISA法测定 40例健康体检者及 6 2例乳腺癌患者 (其中 32例为治疗后转移复发 )的血清TPS、CA15 3、CEA及TPA水平 ,观察 11例转移性乳腺癌治疗后标志物的变化。结果 TPS对转移性乳腺癌敏感性为 81.3 % ,显著高于CA15 3及CEA(P <0 .0 1) ,CA15 3对转移性乳腺癌特异性为 95 .5 % ,显著高于TPS及TPA(P <0 .0 1) ,两者联合则有效性显著提高 (P <0 .0 1)。TPS对乳腺癌骨转移最为敏感 ,远处淋巴结转移的乳腺癌患者TPS水平最高。转移性乳腺癌治疗有效 (CR +PR +SD)各标记物与治疗前相比 ,均无显著性变化 (P >0 .0 1) ,治疗无效 (PD) ,TPS与TPA水平均显著升高 ,尤以TPS更甚 (P <0 .0 1)。结论 TPS是检出转移性乳腺癌最为敏感的标志物 ,尤其是骨转移的患者。TPS与CA15 3联合是监测转移性乳腺癌的最佳组合。TPS也是与预后有关的标志物 ,TPS水平升高表明病情进展 。

食管癌患者血清中组织多肽特异抗原的表达及临床意义

目的探讨食管癌患者血清中组织多肽特异抗原(TPS)的表达及临床意义。方法采用ELISA方法测定30例健康体检者,32例初治食管癌患者以及29例术后发现复发转移食管癌的血清中TPS水平,并观察其治疗前后变化。结果初治食管癌患者和术后复发转移食管癌的血清中TPS检测阳性率分别为31.2%和51.7%,均明显高于正常对照组的10.0%。初治食管癌不同临床分期间TPS水平变化无统计学意义(P>0.05),但治疗前后TPS水平变化差异有统计学意义(P<0.05)。术后复发转移食管癌的TPS水平较正常对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),治疗有效者TPS水平显著下降(P<0.05)。结论动态监测血清TPS水平对食管癌术后复发转移和疗效评估有重要的临床应用价值。