超声分子影像组学评估前列腺癌前列腺特异膜抗原表达:实验研究

目的 观察超声分子影像组学评估前列腺癌(PCa)前列腺特异膜抗原(PSMA)表达的价值。方法 分别于裸鼠皮下接种22RV1细胞(PSMA阳性表达,n=9)或PC-3细胞(PSMA阴性表达,n=10),构建不同PSMA表达水平人前列腺癌细胞移植瘤裸鼠模型。制备靶向PSMA的超声纳米泡(PSMA-NB),进行表征检测及体内、外超声分子成像。以7∶3比例将裸鼠随机分为训练集及测试集,提取训练集纹理特征,以组内相关系数、单因素分析、最小绝对收缩和选择算子等方法筛选特征,构建超声分子影像组学模型,并评估模型诊断PSMA阳性PCa的效能。结果 所制备PSMA-NB平均粒径为(392.2±31.56)nm, Zeta电位为(-29.3±0.95)mV,体外显像效果理想,稳定性好。共基于训练集数据提取1 561个纹理特征,最终筛选出3个特征,包括exponential_glszm_ZoneVariance、wavelet_HHH_gldm_SmallDependenceLowGrayLevelEmphasis及logarithm_gldm_DependenceVariance,以之构建的超声分子影像组学模型诊断训练集、测试集PSMA阳性表达PCa的曲线下面积分别为0.950、0.875。结论 基于靶向PSMA超声分子影像组学模型可用于评估PCa裸鼠PSMA表达。

新型前列腺特异膜抗原剪接变异体的发现及临床意义初步探讨

目的:探讨前列腺特异膜抗原(PSMA)及其与前列腺癌发生、发展的关系,寻求更为特异的前列腺癌诊断和治疗的靶点。方法:采用RT-PCR和DNA测序技术,克隆PSMA基因新的剪接变异体,并根据其序列信息,设计特异性引物,检测其在不同病变前列腺组织及不同组织来源肿瘤细胞中的表达。结果:发现了一种新的PS-MA剪接变异体,其在前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺组织中的表达率分别为92.6%、78.8%及10.0%,且特异表达于前列腺癌LNCaP细胞株,而在前列腺癌PC3细胞株、膀胱癌、肾癌、肝癌细胞株中均不表达。结论:发现了一种新型PSMA剪接变异体(定名为PSMA5),并证实该变异体与前列腺癌及前列腺增生有明显相关性,为研究前列腺癌的发生机制和寻求前列腺癌特异性诊治靶点提供了新的线索。

前列腺特异膜抗原在Pichia pastoris酵母中的表达及鉴定

前列腺特异膜抗原是一种具有高度前列腺特异性的糖蛋白 ,其表达的增高与肿瘤的术后复发、激素抵抗及较差的预后正相关 ,在前列腺癌的诊断和治疗中有广泛的应用前景 .从前列腺癌组织提取总RNA ,利用RT PCR技术获得PSMA基因的全长序列 ,构建了重组酵母表达载体pPIC3.5K PSMA .电击法转化Pichiapastoris酵母 ,通过表型筛选和PCR鉴定证实该基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS PAGE显示 ,获得的PSMA蛋白分子量约 10 0kD ,表达产物经West ern印迹证实可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合 .结果表明 ,成功地获得PSMA编码的cDNA并在酵母细胞中获得表达 .

抗前列腺特异膜抗原单克隆抗体的标记及在荷瘤裸鼠体内的分布研究

目的:研究125I标记的抗前列腺特异膜抗原(PSM A)单克隆抗体(125I-Ed-5)及正常小鼠IgG(125I-NM IgG)在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的分布,探讨应用125I-Ed-5进行放射免疫显像诊断和放射免疫治疗实验性人前列腺癌的可行性。方法:建立荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,用125I标记抗PSM A单克隆抗体Ed-5和NM IgG,125I-Ed-5和125I-NM IgG经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,于注射后24、48、72、120小时分批处死,测定肿瘤和血液、肝、肺等重要脏器的单位重量放射性比值(T/NT)、各组织摄取百分比(%ID/g),研究其在荷瘤裸鼠体内的放射性分布情况。结果:125I-Ed-5的标记率为72.3%,放射性比活度为55.2M Bq/m g,放射性化学纯度是90.2%,免疫活性分数为63%。在注射125I-Ed-5后24～120小时内,裸鼠体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚;各组织的T/NT比值在72h达到最高,其中肿瘤/肌肉高达6.36。而在注射125I-NM IgG的对照组中,裸鼠体内未见放射性浓聚,呈全身均匀性分布。结论:标记后的125I-Ed-5免疫活性没有改变,在裸鼠体内对前列腺癌移植瘤有靶向定位作用,为进一步应用125I-Ed-5进行前列腺癌放射免疫显像和放射免疫治疗的实验研究奠定基础。

前列腺特异膜抗原mRNA检测方法的建立及应用

目的 建立前列腺特异膜抗原 (PSM)mRNA检测方法。方法 利用异硫氰酸胍 /酚 /氯仿 /异戊醇一步法从前列腺癌患者外周血有核细胞或前列腺癌组织中提取总RNA ,进行RT PCR扩增。结果 在PCR反应体系中投入相当于 1～ 1 0 0个癌细胞所含总RNA量时 ,均能得到清晰的 2 6 2bp的产物带。结论 本法有很高的稳定性和灵敏度。临床应用有助于早期发现前列腺癌转移。

人前列腺特异膜抗原膜外区基因的克隆表达及抗体的制备

利用RT PCR技术 ,从前列腺癌组织总RNA中扩增人前列腺特异膜抗原 (PSMA)基因编码区序列 ,克隆至pcDNA3.1载体 ,以此为模板再次PCR扩增出PSMA膜外区cDNA(edPSMA) ,序列测定表明克隆获得的PSMA及edPSMA与基因库所登录的序列相一致。构建原核表达质粒pMAL c2x edPSMA ,经IPTG诱导表达的MBP edPSMA融合蛋白分子量约 12 0kD ,Westernblot证实表达产物可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合。用直链淀粉琼脂糖凝胶 (Amyloseresin)亲和层析纯化蛋白质可得到电泳均一的融合蛋白 ,免疫BALB C小鼠制备多抗 ,获得效价为 1∶12 80 0的多克隆抗体 。

前列腺特异膜抗原的结构模型研究

目的对前列腺特异膜抗原(PSMA)进行结构模建并尝试其小分子抑制物的设计。 方法通过网络资源和分子设计软件SYBYL进行PSMA的三维模建和小分子抑制物的设计。 结果以气单胞菌氨肽酶(AMP)的晶体结构为模板使用Composer模块,获得PSMA胞外区三维结构模型。采用分子对接方法,以AMP和p-碘基-D-苯丙酸-氧肟酸(AIDPH)的复合物晶体结构IIGB为参照,将AIDPH对接到PSMA的结构上,相对应形成疏水作用一端的残基为Y279、Y294、Y298及Y301,与IIGB的晶体结构中的蛋白-抑制剂间的疏水作用非常相似,相对应于另一端形成氢键的4个残基中有3个相同,说明两个复合物氢键形成的方式大体一致。 结论成功获得PSMA三维结构的理论模型。AIDPH有望作为设计PSMA靶向性药物的前导基团。

前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达

【目的】克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达。【方法】用 RT-PCR 方法扩增前列腺癌组织标本中的 PSMA cDNA 序列,并将其克隆至真核表达载体 pcDNA3.0。用脂质体转染法,把 pcDNA3.0-PSMA 转染哺乳动物细胞,鉴定 PSMA 蛋白的表达。【结果】序列测定结果表明,两条引物之间的片段长度为2279bp,与预期长度一致。将克隆的编码区序列与 GenBank 的 PSMA 序列进行 Blast 对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的相对分子质量为100ku。【结论】成功扩增了 PSMA 编码区序列,构建了 PSMA 真核表达载体,建立了 PSMA 稳定表达的细胞株。经免疫分析,证实了真核细胞内表达的 PSMA 为分子质量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性。所获得的 PSMA 真核表达系统为进一步研究 PSMA 基因修饰的 DCs 疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础。

前列腺特异膜抗原mRNA的临床应用研究

目的 :通过检测治疗前后的前列腺癌 (PC)病人外周血前列腺特异膜抗原信使核糖核酸 (PSMAmRNA)的表达 ,了解原发性前列腺癌的血行播散情况及为前列腺癌综合治疗提供依据。 方法 :采用巢式逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测技术 ,对 31例PC病人外周血PSMAmRNA的表达进行了研究。 结果 :31例样本中 ,17例PC病人 (5 4.8% )PSMAmRNA阳性 ,10例正常人和 2 1例良性前列腺肥大 (BPH)病人全阴性 ;10例伴远处转移的PC病人外周血PSMAmRNA全阳性 ,2 1例检测时尚无转移证据者 33.3% (7/ 2 1)阳性 ;外周血PSMAmRNA阳性率与血清PSA水平密切相关 ;根治术或姑息性治疗前、后外周血PSMAmRNA阳性率差异无显著性。 结论 :外周血PSMAmRNA检测可诊断前列腺癌血行播散及转移 ,可作为预测前列腺癌复发、转移的参考指标 ,对外周血PSMAmRNA阳性病人应在围手术期辅以激素、放疗或免疫等辅助治疗 ,以预防肿瘤复发、转移。

前列腺特异膜抗原基因的克隆及其蛋白表达

用RT-PCR法扩增前列腺癌组织标本中的前列腺特异膜抗原(PSMA)cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0。用脂质体转染法将pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白表达。序列测定结果表明,两条引物间的片断长度为2279bp,与预期长度一致;将克隆的编码区序列与Genebank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的相对分子质量为100kD。提示成功扩增了PSMA编码区序列,构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株;此研究为PSMA基因修饰的树突状细胞疫苗治疗前列腺癌奠定了基础。

前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达

目的克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达。方法用RT-PCR方法扩增前列腺癌组织标本中的PSMA cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0。用脂质体转染法,把pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白的表达。结果序列测定结果表明,两条引物之间的片断长度为2279 bp,与预期长度一致。将克隆的编码区序列与Genebank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的分子量为100 000。结论利用RT-PCR技术成功扩增了PSMA编码区序列,经序列分析显示扩增片断的序列正确。构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株。经免疫分析,证实了真核细胞内表达的PSMA为分子量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性。所获得的PSMA真核表达系统为进一步研究PSMA基因修饰的DCs疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础。

鸡毒支原体特异膜抗原的制备

采用 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化鸡毒支原体膜蛋白。选择切取１１０ Ｋ Ｄ、９８ Ｋ Ｄ、６６～６２ Ｋ Ｄ 和５６ Ｋ Ｄ 特异蛋白条带，以 Ｐ Ｂ Ｓ（ｐ Ｈ７．４）浸泡过夜，浸出液置于透析袋封口，透析袋外散布 Ｐ Ｅ Ｇ（ Ｍ ＝ ６ ０００）浓缩膜抗原后获得特异膜抗原，为鸡毒支原体特异诊断方法的建立和单克隆抗体的制备奠定了基础。

前列腺特异膜抗原及其临床应用研究新进展

前列腺特异膜抗原是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白 ,特异性表达于各种前列腺组织分泌性腺上皮及多种非前列腺恶性实体肿瘤的新生毛细血管内皮细胞 ,近年以其为靶向的诊断。

前列腺特异膜抗原(PSMA)的检测及临床应用进展

前列腺特异膜抗原 (PSMA)是一种新近发现的前列腺癌相关抗原 ,由于其较高的前列腺特异性和膜结合特性 ,使其在前列腺癌的临床诊断中 ,特别是在判断肿瘤的转移和进展方面 ,是一种较PSA更加敏感、特异的CaP肿瘤标记物。

中国人前列腺特异膜抗原基因的克隆及序列测定

目的克隆人前列腺膜特异抗原 ( prostate- specific m embrane antigen,PSMA)的编码区 c DNA片段。方法从前列腺癌组织提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出人 PSMA基因编码区序列 ,将其克隆至 pc DNA3 .1载体中 ,并行序列测定。结果序列测定表明 ,克隆获得的 2 2 5 3 bp片段与文献报道的人 PSMA基因编码区 c DNA序列一致。结论本研究为进一步研究

抗前列腺特异膜抗原单克隆抗体的前列腺癌免疫病理研究

目的 观察前列腺特异膜抗原（ＰＳＭ） 在前列腺癌（ＰＣａ） 中的表达情况，探讨其与前列腺癌病理组织学分级及与内分泌治疗效果的关系。 方法 采用ＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭ两步法免疫组织化学染色方法，用ＰＳＭ 单克隆抗体Ｅｄ５ 对３６ 例前列腺癌（Ｐｃａ）、１０ 例正常前列腺组织、１０ 例前列腺良性增生、６ 例慢性前列腺炎、３８ 例非前列腺肿瘤（ 包括膀胱癌、肾透明细胞癌、睾丸肿瘤等）进行染色。 结果 ＰＳＭ 在正常前列腺组织、慢性前列腺炎、ＢＰＨ 及３３ 例Ｐｃａ 中均有程度不同的阳性染色，３ 例前列腺癌、全部非前列腺肿瘤染色呈阴性，在６ 例内分泌治疗失败的Ｐｃａ 中ＰＳＭ 呈强阳性表达。在ＰＣａ中染色呈不均一性，与其病理组织学分级无相关性。 结论 抗ＰＳＭ 单抗Ｅｄ －５ 具有良好的器官特异性，可用于判定转移的肿瘤是否来源于前列腺，并有希望用于前列腺癌的放射免疫显像诊断和导向治疗。

前列腺癌患者外周血前列腺特异性膜抗原mRNA检测的意义

目的观察前列腺癌(PCa)患者外周血前列腺特异性膜抗原mRNA(PSMA-mRNA)的表达,并探讨其临床意义。方法从PCa患者外周血中分离单个核细胞,采用RT-PCR方法检测其中PSMA-mRNA的表达。以前列腺增生(BPH)患者为对照。结果PCa患者PSMA-mRNA阳性率为60.8%(45/74),BPH患者PSMA-mRNA阳性率为5.9%(1/17);伴远处转移的PCa患者外周血PSMA-mRNA阳性率高达89.5%(34/38),无远处转移者阳性率为38.9%(14/36);PCa患者中血清PSA≥20μg/L者PSMA-mRNA阳性率(68.8%),显著高于PSA<20μg/L者(23.0%)。结论外周血PSMA-mRNA检测可诊断前列腺癌血行播散及转移。