等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型

目的了解人群CYP2C19基因型的分布,评价等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型。方法等位基因特异荧光PCR法和金标准Sanger DNA直接测序法检测356名供者外周血CYP2C19基因型,实验采用同步盲法。结果 CYP2C19*1/*1型、CYP2C19*1/*2型、CYP2C19*2/*3型、CYP2C19*3/*3型、CYP2C19*2/*2型及CYP2C19*1/*3型的频率分布:使用PCR荧光法检测时分别为46.6%(166/356)、33.2%(118/356)、2.0%(7/356)、0.8%(3/356)、10.7%(38/356)及6.7%(24/356);采用DNA测序法时分别为46.3%(165/356)、33.4%(119/356)、2.0%(7/356)、0.8%(3/356)、11.0%(39/356)及6.5%(23/356)。两种方法检测CYP2C19基因型具有一致性(P=0.392),且一致性较好(Kappa=0.987);两种方法基因型检测结果一致率为99.2%。结论为保障医疗安全,临床需开展CYP2C19基因型检测;等位基因特异荧光PCR法检测CYP2C19基因型简便可靠。

等位基因特异荧光PCR检测ALDH2基因多态性

目的了解人群乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性的分布,评价等位基因特异荧光聚合酶链反应(PCR)检测ALDH2基因应用于临床的可行性。方法采用等位基因特异荧光PCR和DNA测序法同时检测375例患者外周血ALDH2基因型,结果不一致的标本采用基因芯片技术进行复检。结果 375例标本中,荧光PCR检出ALDH2*1/1型248例(66.1%)、ALDH2*1/2型107例(28.5%)、ALDH2*2/2型20例(5.4%),而DNA测序法则分别检出246例(65.6%)、108例(28.8%)和21例(5.6%),2种方法检测ALDH2基因型差异无统计学意义(χ~2=1.33,P=0.392),且一致性较好(κ=0.978,P<0.001)。2种方法基因型检测结果一致率为98.9%(371/375)。4例结果不一致的标本经基因芯片法复检,结果与等位基因特异荧光PCR一致。结论等位基因特异荧光PCR检测ALDH2基因型简便、可靠,能满足临床对ALDH2基因型检测的要求。

支气管肺泡灌洗液特异荧光对肺癌诊断价值的研究

目的 研究支气管肺泡灌洗液特异荧光对肺癌诊断的价值。方法 对 6 1例肺癌及 6 0例肺良性瘤患者的支气管肺泡灌洗进行特异荧光检测 ,以波长 6 15nm处的荧光强度大于 6 0 5nm者为阳性。结果 肺癌组阳性率高于肺良性病组 (P <0 0 1) ,中心型肺癌阳性率高于周围型。

特异荧光PCR对人ALDH2基因型的研究

目的评价人ALDH2基因多态性检测试剂盒(荧光PCR法)用于人ALDH2基因c.1510位点(G/A)核苷酸多态性检测的准确性和有效性。方法将入选人基因组DNA标本371例采用金标准和临床待考评试剂盒进行同步盲法检测,试验结束后揭盲,将试验试剂检测结果与金标准检测结果进行统计比较分析。结果人ALDH2基因多态性检测试剂盒(荧光PCR法)与DNA直接测序法(Sanger测序法)金标准检测结果相比,两者基因型总符合率为99.19%,临床诊断评价总符合率99.46%,有较高的一致性。结论人ALDH2基因多态性检测试剂盒(荧光PCR法),无放射性危害,具有高灵敏性、高特异性、试剂周期长等特点,可以在临床检验中推广使用。

荧光显微术在TCK、TCT鉴别中的应用

TCK和 TCT在自发荧光特性上存有明显差异 :TCK的桔黄色网状壁层荧光率在 90 %以上 ,而TCT的桔黄色网状壁层荧光率通常都低于 1 0 %。在进行 TCK鉴定检测时 ,需设立相应的对照组和待测样品一起进行荧光观察 ,并严格选择封载剂 ,以保证准确的鉴定结果。

淬取荧光法正常人血清PROTO正常范围研究

1985年以来我们创用血清特异荧光法对恶性肿瘤诊断已进行了5000多例次研究,涉及30余种恶性肿瘤,取得数万个数据,已初步得出血清、尿、胃液、组织匀浆等正常参考值范围。近年来我们又创用淬取荧光法,使诊断符合率进一步提高。本文仅报告淬取荧光法血清PROTO的Ⅰ值正常范围的研究结果。

应用流式细胞术测量网织红细胞

红细胞在骨髓中由原始红细胞经过增殖分化成为早、中、晚不同阶段的幼稚红细胞,然后由晚幼红细胞经过脱核变成网织红细胞。在正常情况下人外周血网织红细胞仅占0.5％-1.5％左右。应用活性染料亮甲酚蓝染色在显微镜下可看到染料与rRNA结合形成的网状沉淀物。在临床上使用这种方法计数1000个红细胞计算出网织红细胞百分数。由于检测细胞少容易造成较大的误差。网织红细胞的主要特征是随其成熟程度核DNA消失,RNA也逐渐减少。

MGMT、RASSF1A、FHIT基因启动子甲基化水平在非小细胞肺癌患者早期诊断中的意义

目的探讨DNA修复基因06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、Ras凋亡家族1A(RASSF1A)、脆性组氨酸三联体(FHIT)基因启动子甲基化水平在非小细胞肺癌(NSCLC)患者早期诊断中的意义。方法选取2016年2月至2018年2月在郑州市第六人民医院收治的136例NSCLC患者作为肺癌组,选取同期145例健康体检者作为对照组,采用实时荧光定量甲基化特异PCR(qMSP)法检测外周血DNA中MGMT、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基化水平并进行分析。结果肺癌组MGMT、RASSF1A、FHIT基因启动子甲基化水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组不同病理组织学类型MGMT、FHIT基因启动子甲基化水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),肺癌组RASSF1A基因启动子甲基化水平与其临床分期有关(P<0.05)。NSCLC患者MGMT、RASSF1A、FHIT基因启动子甲基化水平联合检测灵敏度、阴性预测值、准确性高于单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测MGMT、RASSF1A和FHIT基因启动子甲基化水平对早期诊断NSCLC及鉴别临床病理组织学分型有一定的指导价值。

Ab—DEFT对牛粪E coli O_(157):H7的鉴定

作者用直接荧光抗体滤过法（Ab—DEFT）,对牛粪埃希氏大肠菌（E coli）O157:H7的检测。此法包括缓冲液内牛粪悬浮、离心30秒,于50℃以胰蛋白酶和三硝基甲苯X—100处理上清液10分钟,通过5和1.2μm孔的滤器预先滤过和通过0.4μm孔的滤器滤过。最终滤过以O157

甲醛固定石蜡包埋肾组织做免疫荧光染色在病理诊断中的应用

目的探讨甲醛固定、石蜡包埋的肾穿刺组织做免疫荧光染色的可行性。方法选择10例膜性肾病、25例IgA肾病及10例狼疮肾炎患者的肾穿刺组织。对石蜡切片进行脱腊、修复抗原及直接免疫荧光染色,并将染色结果与冰冻切片染色结果进行比较。结果在本实验条件下,二甲苯浸泡30 min、胃蛋白酶消化10 min为最适脱蜡及抗原修复条件,抗体稀释至特异荧光强度足够及非特异荧光背底最弱为当。应用上述条件对石蜡切片进行直接免疫荧光染色,其结果与冰冻切片染色的诊断符合率达100%,而石蜡切片具有组织结构保存好、免疫沉积物清晰、易于判断结果及免疫荧光淬灭时间长等优点。结论石蜡切片免疫荧光染色可作为冰冻切片免疫荧光染色的补充手段,它无需低温保存即能转运肾组织至肾脏病理诊断设备及水平较好的医院做免疫荧光检查,于国内推广具有现实意义。