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油菜种子特异表达启动子pNapB和pFAE1的结构与功能比较研究 被引量:7
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作者 肖娜 武玉花 +2 位作者 肖玲 吴刚 卢长明 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-9,共9页
启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油821中分离到油菜基因NapB和FAE1的上游启动子序列pNapB和pFAE1,其中pNapB长1136bp,pFAE1长1420bp。两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达... 启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油821中分离到油菜基因NapB和FAE1的上游启动子序列pNapB和pFAE1,其中pNapB长1136bp,pFAE1长1420bp。两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括RY重复、G-box和E-box等,但两种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将pNapB和pFAE1两个启动子分别与报告基因GUS融合并通过农杆菌介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对T1代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间和空间分布以及作用强度明显不同。pNapB启动子比pFAE1作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比pFAE1强,但pFAE1启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的GUS染色深度在两种启动子间差别不大。 展开更多
关键词 种子特异表达启动子 pNapB pFAE1 遗传转化 GUS 转基因烟草
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矮牵牛果实特异表达启动子FBP7的基因克隆及序列分析 被引量:2
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作者 柏锡 纪巍 +3 位作者 才华 李勇 张秀芹 朱延明 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第6期77-81,共5页
为进一步实现外源基因在草莓果实中的特异表达,克隆了矮牵牛果实特异表达启动子FBP7。根据GenBank发表序列设计引物,以矮牵牛(Petunia hybrida)总DNA为模板,通过PCR扩增获得约500 bp的DNA片段,回收该片段并克隆至PUC18载体上,测序后将... 为进一步实现外源基因在草莓果实中的特异表达,克隆了矮牵牛果实特异表达启动子FBP7。根据GenBank发表序列设计引物,以矮牵牛(Petunia hybrida)总DNA为模板,通过PCR扩增获得约500 bp的DNA片段,回收该片段并克隆至PUC18载体上,测序后将所得序列与原序列进行比对,其同源性为97%。为分析这些差异序列是否影响启动子功能,进行了启动子功能预测及顺式作用元件分析。结果表明,所克隆的启动子序列应具有启动子功能,且能实现果实特异表达,其序列分析差异可能是由于个体差异及多态性的影响,为草莓果实特异表达启动子的选择提供新思路。 展开更多
关键词 矮牵牛 果实特异表达启动子 FBP7 克隆 序列分析
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种子特异表达启动子的克隆分析及其植物表达载体的构建 被引量:3
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作者 朱亚兰 姚伟 +5 位作者 窦建华 乐超银 何正权 陈发菊 梁宏伟 梁薇 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期6-10,共5页
根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序... 根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序列由899 bp核苷酸组成,其核苷酸序列与GenBank中的Oleosin基因启动子序列同源性高达95.6%。分别用限制性内切酶HindⅢ和BamH I双酶切重组质粒pGMT-SOP和双元植物表达载体pBI121,分别回收pGMT-SOP重组质粒中的SOP小片段和pBI121植物表达载体中去掉CaMV35S组成型启动子的大片段,经连接、转化和鉴定,获得由SOP驱动报告基因GUS的新型植物表达载体pBI121-SOP,为外源基因在油菜种子中的定位表达研究奠定基础。 展开更多
关键词 种子特异表达启动子 克隆 油菜
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拟南芥中花特异表达启动子PCHS的分离及其功能初探 被引量:3
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作者 李刚 陶妹英 +3 位作者 贾彩红 张建斌 徐碧玉 金志强 《中国农学通报》 CSCD 2008年第4期89-93,共5页
根据已发表的拟南芥启动子序列(AF248988)设计合成一对引物,以拟南芥(Arabidopsis)基因组DNA为模板,通过PCR技术获得了约含500bp大小的DNA片段,经纯化后测序得到531bp的目的片段。通过DNAman进行序列分析表明,与文献报道的PCHS启动子序... 根据已发表的拟南芥启动子序列(AF248988)设计合成一对引物,以拟南芥(Arabidopsis)基因组DNA为模板,通过PCR技术获得了约含500bp大小的DNA片段,经纯化后测序得到531bp的目的片段。通过DNAman进行序列分析表明,与文献报道的PCHS启动子序列有99%的同源,含有4个花特异表达的调控元件。将此启动子替换pBI121上的CaMV35S启动子构建植物表达载体,农杆菌介导法浸染矮牵牛花、茎、叶、根。GUS瞬时表达结果表明,在花上出现较深的蓝色,而在茎上的蓝色很浅,在根和叶中不显蓝色,初步确定该启动子具有较强的花特异表达特性。 展开更多
关键词 特异表达启动子 克隆 GUS染色
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香蕉果实特异表达启动子驱动下的乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 胡伟 徐碧玉 +4 位作者 张建斌 杨晓颖 李美英 宁文彬 金志强 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期691-694,共4页
研制经济方便的新型乙肝植物口服疫苗是全球控制乙型肝炎的现实要求。研制乙肝植物口服疫苗遇到的一个主要的困难是HBsAg基因在受体植物中的表达量低。香蕉是植物口服疫苗理想的受体。因此,以香蕉为受体,进一步提高HBsAg基因表达量的研... 研制经济方便的新型乙肝植物口服疫苗是全球控制乙型肝炎的现实要求。研制乙肝植物口服疫苗遇到的一个主要的困难是HBsAg基因在受体植物中的表达量低。香蕉是植物口服疫苗理想的受体。因此,以香蕉为受体,进一步提高HBsAg基因表达量的研究非常必要。从pBIL2载体上克隆了香蕉果实特异表达的BanLec启动子,并引入了HindⅢ、BamHⅠ酶切位点;利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切YEPFLAG-HBS获得了HBsAg基因;通过BamHⅠ酶切位点,利用T4DNA连接酶连接了BanLec启动子和HBsAg基因,形成BanLec-HBsAg连接片段;再把该片段通过EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点插入pCAMBIA2300植物表达载体,成功构建香蕉果实特异表达启动子驱动下的乙肝表面抗原基因表达载体。 展开更多
关键词 香蕉 果实特异表达启动子 乙肝表面抗原 表达载体 构建
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维管特异表达启动子BSP的克隆与活性检测 被引量:1
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作者 刘玲玲 张金文 《中国农学通报》 CSCD 2012年第27期178-182,共5页
为了研究维管特异表达启动子BSP的活性和组织特异性,从杨树基因组中克隆得到维管特异表达启动子BSP,利用该启动子与绿色荧光蛋白(GFP)报告基因构建植物表达载体,采用基因枪法转化烟草叶片,并在高渗培养基上培养过夜,后转移到诱导培养基... 为了研究维管特异表达启动子BSP的活性和组织特异性,从杨树基因组中克隆得到维管特异表达启动子BSP,利用该启动子与绿色荧光蛋白(GFP)报告基因构建植物表达载体,采用基因枪法转化烟草叶片,并在高渗培养基上培养过夜,后转移到诱导培养基上(MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+Kan100mg/L)培养生根并长到一定高度后,剪下已形成维管组织的叶脉和根,制成切片,然后在OLYPUSBX51/BX52型荧光显微镜下用蓝光激发,观察各个组织细胞中的绿色荧光,同时以未转化的烟草材料做为对照。结果表明:BSP启动子所驱动的GFP基因在烟草的维管组织细胞中得到了高水平的表达,而在烟草的其他组织及对照的任何组织中几乎不表达。通过GFP在烟草维管组织中的瞬时表达,表明了该启动子具有维管组织特异性表达活性特点。 展开更多
关键词 维管特异表达启动子 报告基因 表达载体 GFP瞬时表达
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烟草雄蕊特异表达启动子TA29的克隆及序列分析
7
作者 黄海泉 张洪波 +1 位作者 禹崇惠 王维 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第9期26-28,共3页
采用SDS法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片总DNA,根据GenBank中相关序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增获得一特异片段,并将其连接到pMD8-T载体上进行克隆测序。结果表明:该片段全长543 bp,与GenBank中报道的序列(AX012339)存在1... 采用SDS法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片总DNA,根据GenBank中相关序列设计并合成1对特异引物,通过PCR扩增获得一特异片段,并将其连接到pMD8-T载体上进行克隆测序。结果表明:该片段全长543 bp,与GenBank中报道的序列(AX012339)存在1个碱基的差异,同源性达99.8%;同时,采用生物软件对其进行序列分析,发现该片段含有启动子必备的核心元件:1个TATA-box、8个启动序列元件[PyPyAN(T/A)PyPy]以及1个CAAT-box、1个Cap site、1个I-box等元件,还存在与花粉特异性调控相关的AGAAA和GTGA等2个元件,推测该序列功能与雄蕊特异表达启动子TA29功能相同,从而为后期植物表达载体的构建及转基因奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 雄蕊特异表达启动子 基因克隆 序列分析
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一个新水稻根尖特异表达启动子的分离与鉴定 被引量:6
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作者 赵红玉 徐磊 +3 位作者 魏溪涓 邓敏娟 王芳 易可可 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期351-357,共7页
为了挖掘水稻中的根系特异表达启动子,通过生物信息学分析和RT-PCR验证获得1个在根尖特异表达的水稻基因Os04g24469。用分离出的该基因上游启动子,与GUS报告基因构建表达载体并转化到受体水稻日本晴中。通过对转基因后代中不同组织器官... 为了挖掘水稻中的根系特异表达启动子,通过生物信息学分析和RT-PCR验证获得1个在根尖特异表达的水稻基因Os04g24469。用分离出的该基因上游启动子,与GUS报告基因构建表达载体并转化到受体水稻日本晴中。通过对转基因后代中不同组织器官中的GUS活性检测,证明该启动子在水稻根尖特异性强烈表达。结合该根尖特异表达启动子,我们分析了一个在水稻地上部及地下部都组成表达的功能基因OsSRG对水稻根系发育的贡献。该基因的缺失导致水稻突变体srg根系变短,而利用分离的根尖特异性Os04g24469启动子在根尖驱动GUS-OsSRG的表达,能回复突变体根系生长,表明OsSRG在根尖的表达足以影响水稻根系生长,而在地上部的表达与根系发育无关。本研究表明Os04g24469启动子是一个水稻根尖特异表达启动子,利用该启动子可以控制目标基因在水稻根尖特异表达,可用于水稻根系基因功能的研究。 展开更多
关键词 水稻 启动子 根尖特异表达启动子 GUS报告基因 SRG基因
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番茄花药特异表达启动子LAT52的克隆与表达载体构建 被引量:1
9
作者 魏晓峰 宋波 +2 位作者 张香琴 苏承刚 张兴国 《南方农业》 2010年第2期73-74,86,共3页
采用半巢式PCR方法,从番茄基因组中扩增出了花药特异表达启动子LAT52。该序列与GenBank公布的同源序列相似度达98%,并鉴别到一个TAAAAAA简单重复序列。将LAT52启动子与GUS基因拼接,构建成了双元表达载体。
关键词 番茄 花粉特异表达启动子LAT52 双元表达载体 克隆
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雄蕊特异表达启动子CA55的克隆及其序列分析
10
作者 王纬 黄海泉 +2 位作者 张洪波 禹崇惠 黄美娟 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期372-375,共4页
为了调控目的基因仅在雄蕊中表达,本研究采用SDS法提取玉米叶片总DNA,根据雄蕊特异表达启动子的相关序列设计并合成一对引物,通过PCR扩增得到一特异片段,并连接至pMD18-T Vector上进行克隆测序。结果表明该片段全长1 179 bp,与相关序列... 为了调控目的基因仅在雄蕊中表达,本研究采用SDS法提取玉米叶片总DNA,根据雄蕊特异表达启动子的相关序列设计并合成一对引物,通过PCR扩增得到一特异片段,并连接至pMD18-T Vector上进行克隆测序。结果表明该片段全长1 179 bp,与相关序列存在5个碱基的差异,同源性达99.57%,且该片段含有该片段含有2个TATA-box,1个启动序列元件、2个CAAT-box,1个Quantitative-element,8个GTGA-box,1个TACPyAT-box,1个POLLEN1以及3个pollen-box等相关元件,已具备了该启动子所必需的所有调控元件,从而为后期雄蕊特异表达的植物载体构建及遗传转化奠定了基础。 展开更多
关键词 玉米 雄蕊特异表达启动子 CA55 基因克隆 序列分析
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花药特异表达基因TaRAFTIN1a启动子的克隆及表达载体构建 被引量:1
11
作者 赵纯钦 徐登安 +1 位作者 陈静 余懋群 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期1-5,共5页
组织特异性启动子是植物基因工程改良的重要工具。RAFTIN是禾本科植物花药绒毡层中特异积累与花药发育相关的蛋白,其调控序列可能提供一个很好来源的花药特异性表达启动子。为了解小麦TaRAFTIN1a基因启动子的花药表达特异性,本研究分离... 组织特异性启动子是植物基因工程改良的重要工具。RAFTIN是禾本科植物花药绒毡层中特异积累与花药发育相关的蛋白,其调控序列可能提供一个很好来源的花药特异性表达启动子。为了解小麦TaRAFTIN1a基因启动子的花药表达特异性,本研究分离了TaRAFTIN1a基因的启动子,生物信息学分析表明,该启动子含有3种花药特异表达元件(总计10个),1个ABRE脱落酸响应元件,TGACG-motif与CGTCA-motif茉莉酸甲酯响应元件各1个,8个ARR1AT细胞分裂素响应元件,以及2个DRE和1个MBS干旱响应元件。采用5'端缺失的方法,分别克隆1429、898和351 bp的启动子片段,经连接、转化与鉴定,构建了3个含TaRAFTIN1a启动子不同区段融合GUS报告基因的植物表达载体,p WAER1,p WAER2,p WAER3,为通过转基因了解启动子的表达特征及其核心作用元件奠定了基础。 展开更多
关键词 普通小麦 花药特异表达启动子 启动子分析 载体构建
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碧冬茄花特异表达基因启动子PchsA的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 洪亚辉 蒋泓 +2 位作者 萧浪涛 黄璜 张文 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期474-477,共4页
根据 Ingrid M.报道的碧冬茄花特异表达基因 CHSA启动子的序列设计并合成一对特异引物 ,以碧冬茄总DNA为模板 ,通过 PCR扩增出约 370 bp大小的 DNA片段 ,回收后克隆到 p U Cm- T质粒载体上 ,经转化、筛选确定重组子 ,酶切鉴定后送上海... 根据 Ingrid M.报道的碧冬茄花特异表达基因 CHSA启动子的序列设计并合成一对特异引物 ,以碧冬茄总DNA为模板 ,通过 PCR扩增出约 370 bp大小的 DNA片段 ,回收后克隆到 p U Cm- T质粒载体上 ,经转化、筛选确定重组子 ,酶切鉴定后送上海生工生物工程公司测序 ,得到片段长度为 370 bp.采用 DSgene分析软件进行序列分析发现其基本具有启动子的所有保守序列 ,TATA box,CCAAT box,Anther box,G- box,TACPy AT box,box1,box2 ,Capsite等 ,且经 Internet BL AST程序和 DSgene分析软件进行同源性对比和序列分析 ,显示序列与已报道序列同源性为 96 % .登陆 Gen Bank,ID号为 AY36 0 35 8. 展开更多
关键词 碧冬茄花 PchsA启动子 基因克隆 序列分析 基因表达 特异表达基因启动子
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3种不同启动子构建ACC脱氨酶基因植物表达载体 被引量:1
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作者 黄海泉 黄美娟 +3 位作者 范志祥 李建永 刘璇 刘飞虎 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期706-710,共5页
从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG... 从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG12)分别构建ACC脱氨酶基因的植物表达载体,经PCR及酶切鉴定均已构建成功,为后期选择不同的花卉等植物材料遗传转化研究打下基础。 展开更多
关键词 ACC脱氨酶基因 特异表达启动子 衰老特异表达启动子 植物表达载体构建
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水稻胚乳特异性启动子的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 许明 张铃 +2 位作者 黄志伟 程祖锌 杨志坚 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期6-9,共4页
目的:克隆获得水稻胚乳特异表达启动子pGluB-1。方法:采用PCR方法从水稻"台粳9号"基因组DNA中扩增出pGluB-1启动子序列,并克隆至pMD20-T载体上,酶切鉴定后进行测序并对测序结果进行生物信息学分析。结果:获得大小为1 353bp的p... 目的:克隆获得水稻胚乳特异表达启动子pGluB-1。方法:采用PCR方法从水稻"台粳9号"基因组DNA中扩增出pGluB-1启动子序列,并克隆至pMD20-T载体上,酶切鉴定后进行测序并对测序结果进行生物信息学分析。结果:获得大小为1 353bp的pGluB-1启动子序列,该序列与已报道序列的同源性为97%。启动子功能预测及顺式作用元件分析表晨所克隆的启动子序列含有ACGT基序、AACA基序、GCN4基序和醇溶蛋白框等胚乳特异表达必需的调控元件,其序列差异可能是由于不同品种个体差异及多态性的影响。结论:成功克隆出pGluB-1启动子,为实现外源目的基因在水稻胚乳中特异性表达奠定了实验基础。 展开更多
关键词 水稻 胚乳特异表达启动子 pGluB-1 序列分析
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Rch10启动子引导iaaL基因在转基因烟草中的表达导致花器官发育的变异 被引量:1
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作者 杨洪全 卫志明 许智宏 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1996年第7期541-547,共7页
来源于丁香假单孢杆菌 ( Pseudomonas syringae subsp.savastanoi)的吲哚乙酰胺赖氨酸酯合成酶基因 ( iaa L )与来自水稻 ( Oryza sativa)的在花器官中具有高水平表达的启动子 ( Rch1 0 )融合后导入烟草( N icotiana tabacum)。在转基... 来源于丁香假单孢杆菌 ( Pseudomonas syringae subsp.savastanoi)的吲哚乙酰胺赖氨酸酯合成酶基因 ( iaa L )与来自水稻 ( Oryza sativa)的在花器官中具有高水平表达的启动子 ( Rch1 0 )融合后导入烟草( N icotiana tabacum)。在转基因烟草中研究了这种嵌合基因的表达特性 ,并测定了各个器官内源生长素的水平。结果表明 :Rch1 0启动子能引导 iaa L基因在转基因植株的幼嫩花序、花器官及幼嫩果实中表达 ,并导致了各器官内源生长素水平不同程度的降低。转基因植株当代的花序或花器官的发育出现了明显的表型变异 :开花后顶端优势减弱、花序正常发育受阻、果实发育不良等。这些 Rch1 0 - iaa L的转基因植株可为进一步研究 展开更多
关键词 烟草 花器官 特异表达启动子 转基因烟草 iaaL
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矮牵牛编码F3′5′H的蓝色基因表达载体构建及转化 被引量:4
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作者 李莉 祁银燕 +2 位作者 解燕 刘雅莉 娄倩 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1090-1096,共7页
类黄酮3′,5′羟基化酶(Flavonoid-3′,5-′hydroxylase,F3′5′H)是花色苷代谢途径中的一个关键酶,能使花色素合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素,从而使花色向蓝紫色偏移。本研究从蓝紫色矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣中克隆了编码F3′5’... 类黄酮3′,5′羟基化酶(Flavonoid-3′,5-′hydroxylase,F3′5′H)是花色苷代谢途径中的一个关键酶,能使花色素合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素,从而使花色向蓝紫色偏移。本研究从蓝紫色矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣中克隆了编码F3′5’H的蓝色基因Hf1,并通过PCR技术获得百合花特异表达启动子(PchsA),将百合PchsA与Hf1基因融合,构建了百合花特异表达启动子调控的Hf1基因植物表达载体,通过农杆菌介导的叶盘法转化粉红色矮牵牛。抗性筛选和PCR检测鉴定转基因植株,结果表明,成功地获得了转基因阳性植株。 展开更多
关键词 矮牵牛 类黄酮3′ 5′羟基化酶 Hf1基因 特异表达启动子 转化
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南方根结线虫食道腺表达基因7E12影响植物的初步研究 被引量:2
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作者 黎娟华 孙海彦 +1 位作者 赵平娟 彭明 《中国农学通报》 CSCD 2013年第27期148-153,共6页
南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是一种重要的植物寄生线虫,它的食道腺产生的分泌蛋白是对寄主造成危害的致病因子。鉴定这些编译分泌蛋白的基因特性,是认知南方根结线虫对植物致病性或寄生性机理的关键所在。通过使用烟草根部特... 南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是一种重要的植物寄生线虫,它的食道腺产生的分泌蛋白是对寄主造成危害的致病因子。鉴定这些编译分泌蛋白的基因特性,是认知南方根结线虫对植物致病性或寄生性机理的关键所在。通过使用烟草根部特异表达基因TobRB7的△0.3缺失的启动子,替换植物过表达载体pBI-121的CMV(烟草花叶病毒)35S启动子,构建了南方根结线虫食道腺细胞表达的基因7E12的植物表达载体pBI-Trp-7E12和pBI-Trp。pBI-Trp在本研究中作为空白对照使用。利用农杆菌侵染花粉管通道法把这2个载体转化了模式植物拟南芥。通过利用卡那霉素抗性培养基对已转化的拟南芥进行筛选,获得了T1代转基因植株。这为研究鉴定该基因的特性奠定了基础,以利于进一步研究南方根结线虫对植物的致病性机理。 展开更多
关键词 南方根结线虫 食道腺分泌蛋白基因7E12 烟草根部特异表达基因启动子
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康乃馨ACC氧化酶反义基因遗传转化康乃馨的研究 被引量:23
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作者 张树珍 汤火龙 +1 位作者 杨本鹏 刘飞虎 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期699-702,共4页
在建立康乃馨从愈伤组织到完整植株的高频再生体系的基础上,用花特异表达启动子驱动的康乃馨ACC氧化酶反义基因通过农杆菌介导法对康乃馨进行遗传转化,获得了3株转基因植株,经多重PCR及PCR-Southem杂交检测,证实康乃馨ACC氧化酶的反义... 在建立康乃馨从愈伤组织到完整植株的高频再生体系的基础上,用花特异表达启动子驱动的康乃馨ACC氧化酶反义基因通过农杆菌介导法对康乃馨进行遗传转化,获得了3株转基因植株,经多重PCR及PCR-Southem杂交检测,证实康乃馨ACC氧化酶的反义基因已整合进康乃馨的基因组中。 展开更多
关键词 康乃馨 ACC氧化酶 反义基因 遗传转化 特异表达启动子
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转卵泡抑制素基因对绵羊肌源性细胞中肌肉抑制素基因的调控 被引量:2
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作者 岳群华 袁建龙 +5 位作者 郝斐 靳木子 王景园 杨文亮 刘东军 仓明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期385-393,共9页
【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研... 【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量PCR和western blotting等方法进行检测分析。【结果】①转基因细胞系的生长趋势与非转基因细胞相似,转基因SMSCs细胞增殖的速度高于转基因SFFCs细胞;②流式细胞仪分析表明,转基因细胞系转染后70%以上细胞均处于G0/G1期,保持旺盛的分裂能力、具有单一峰值、细胞的整倍性好、细胞电子体积显著增大;③实时定量PCR及western blotting检测结果表明,转基因细胞系中FST的RNA及蛋白水平相比非转基因细胞系均上调;④转基因SMSCs和肌管相比转基因SFFCs细胞的FST表达量高,转pSPFCDs-red转基因细胞中FST的表达水平比转pCFCDs-red细胞系高。【结论】骨骼肌特异性启动子SP及α-actin能够在SMSCs及肌管中有效启动FST目的基因的表达,且在肌管中具有较高的表达量,SP启动子的启动效率较高于α-actin。在肌源性细胞中,FST的上调可以引起MSTN蛋白水平的下调,FST对骨骼肌细胞的生长发育具有一定促进作用。 展开更多
关键词 FST 人工合成启动子SP 骨骼肌特异表达启动子α-actin 骨骼肌卫星细胞 肌管
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Isolation of a pollen-specific promoter in tritordeum
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作者 Tu Zhiming Zhang Jiangzhou +3 位作者 Chen Lin Chuan Qin Yang Guangxiao He Guangyuan 《Engineering Sciences》 EI 2011年第1期72-75,共4页
The promoter is a cis-acting element in regulating gene expression. A promoterless plasmid containing UidA gene was transformed into tritordeum by barmbadment. Histochemical analysis of various tissues in transgenic t... The promoter is a cis-acting element in regulating gene expression. A promoterless plasmid containing UidA gene was transformed into tritordeum by barmbadment. Histochemical analysis of various tissues in transgenic tritordeum was carried to examine tissue-specific expression of GUS(beta-glucuronidase) activity. The pollen-specific promoter was trapped and identified successfully in a transformant line. PCR(polymerase chain reaction) method was used to isolate this pollen-specific promoter. By sequencing and analyzing the amplified fragment from PCR, a part of UidA gene and a flanking sequence were obtained. Some essential elements of plant promoters were found in the sequence. To determine the function of it, the cloned fragment was fused with UidA gene, then cloned and transformed into Triticum durum. The transgenic plant transformed by this vector showed GUS expression only in pollen. Therefore a pollen-specific promoter was isolated successfully. 展开更多
关键词 tissue-specific promoter TRANSCRIPTION POLLEN transformation TRANSGENE
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