CXCR4启动子的克隆及在MCF-7乳腺癌细胞中的特异转录活性

目的证实CXCR4启动子在乳腺癌细胞MCF-7中的特异转录活性。方法采用PCR方法扩增CXCR4启动子序列,将其分别克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒载体pEGFP-1和含有Luciferase的质粒载体pGL3-Basic,经脂质体分别转染人正常乳腺上皮细胞系HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,同时测定两种细胞中荧光素酶表达的差异。结果CXCR4基因的启动子在肿瘤细胞中呈现高的转录活性;而在正常细胞中转录活性极低。结论CXCR4启动子在乳腺癌MCF-7细胞中具有很强的特异性,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础。

hTERT启动子的克隆及在MCF7乳腺癌细胞中的特异转录活性

背景与目的利用肿瘤特异性启动子增强肿瘤细胞中治疗基因的转录选择性是达到基因治疗靶向性的有效途径。人端粒酶催化亚基(hTERT)在大部分肿瘤细胞中呈特异性高表达[1-2],有可能成为肿瘤特异性启动子。本文扩增了hTERT基因启动子并分别克隆于报告基因重组质粒pEGFP-1和pGL3-Basic,检测并证实hTERT启动子在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性。方法采用套式PCR法扩增hTERT启动子,将其分别克隆到含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒pEGFP-1和含Luciferase的重组质粒pGL3-Basic,经脂质体分别转染人乳腺正常上皮细胞系HBL100和乳腺癌细胞MCF7,荧光显微镜观察EGFP的表达情况,并测定两种细胞中荧光素酶转录表达差异。结果与正常细胞HBL100相比,hTERT启动子在MCF7细胞呈现强的绿色荧光表达;荧光素酶活性检测与其一致,hTERT启动子在MCF7乳腺癌细胞的荧光素酶相对活性RLU/U值(33784)约相当于HBL100细胞中(2400)的15倍。结论hTERT启动子在乳腺癌MCF7细胞中具有很强的特异性,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定实验基础。

高糖环境下XIST对人视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨高糖环境下长链非编码RNA X-非活性特异转录本(XIST)对人视网膜血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法:以人视网膜血管内皮细胞为研究对象,设对照组和高糖组,分析高糖对人视网膜血管内皮细胞XIST表达的影响;设对照组、高糖组、高糖+XIST组、高糖+阴性对照组,分析过表达XIST对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响;设对照组、高糖组、高糖+XIST组、高糖+XIST+pcDNA3.1-Wnt1组、高糖+XIST+pcDNA3.1-CON组,分析XIST通过Wnt1/β-catenin通路对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)高糖组XIST相对表达量较对照组低(P<0.05)。(2)与对照组比,高糖组细胞增殖活力低,而凋亡率、Wnt1和β-catenin水平高(P<0.05);与高糖+阴性对照组比,高糖+XIST组增殖活力高,而凋亡率、Wnt1和β-catenin水平低(P<0.05)。(3)与对照组比,高糖组细胞增殖活力低,而凋亡率高(P<0.05);与高糖组比,高糖+XIST组增殖活力高,而凋亡率低(P<0.05);与高糖+XIST+pcDNA3.1-CON组比,高糖+XIST+pcDNA3.1-Wnt1组增殖活力低,而凋亡率高(P<0.05)。结论:XIST通过负调控Wnt1/β-catenin通路抑制高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞凋亡。

干扰lncRNA XIST通过上调miR-429抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长并提高顺铂敏感性

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异转录本(XIST)对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞生长及顺铂(DDP)化疗敏感性的调节作用及其机制。方法培养人SACC细胞系SACC-83、腺样囊性癌-2(ACC-2)和正常下颌下腺细胞HSG,建立DDP耐药SACC-83/DDP细胞。使用脂质体2000转染试剂分别将lncRNA XIST干扰质粒和miR-429 mimic/inhibitor转染到SACC-83和SACC-83/DDP细胞中。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中lncRNA XIST和miR-429的mRNA表达水平。CCK-8法、克隆形成试验、TUNEL试验及蛋白免疫印迹法分别检测lncRNA XIST和miR-429对SACC细胞增殖、凋亡及DDP药物敏感性的影响。双荧光素酶测定验证lncRNA XIST与miR-429之间的靶向关系。结果lncRNA XIST在SACC细胞中高表达,干扰lncRNA XIST抑制SACC-83细胞和SACC-83/DDP增殖并促进其凋亡(P均<0.001)。miR-429在SACC细胞中表达降低,lncRNA XIST靶向负调节miR-429的表达。下调miR-429水平逆转了shRNA-XIST对SACC细胞增殖的抑制作用及对DDP的耐药作用(P均<0.05)。结论干扰lncRNA XIST可通过上调miR-429抑制SACC细胞生长并提高DDP敏感性。