聚合物降解产物伤害与糖甙键特异酶破胶技术

综述了钻井、完井、尤其是水力压裂作业中产生的多糖类聚合物伤害和应用糖甙键特异酶破胶、解除多糖类聚合物伤害的技术。第一节报道了聚合物降解产物造成的伤害 ,指出冻胶破胶液粘度低并不代表压裂液已从充填裂缝中充分返排 ,氧化破胶剂和普通酶破胶剂不能使多糖类聚合物充分降解 ,产生的大分子量的、水不溶的降解产物可对地层造成伤害 ,消除伤害的办法是采用对糖甙键有特异性的各种水解酶作压裂液破胶剂或伤害地层处理剂。第二节报道了各种聚合物 (纤维素、瓜尔胶、淀粉 )糖甙键特异酶降解聚合物的机理。第三节报道了糖甙键特异酶 (主要针对瓜尔胶 )的应用性能测试及结果 ,包括岩心流动实验、含糖量和分子量测定、传导性测试。第四节介绍了糖甙键特异酶消除聚合物伤害和用作压裂液破胶剂的现场应用 ,包括选井原则、实施工艺要点及 3个典型井例。

不同年龄大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切半胱氨酸蛋白酶3的活性及坐骨神经损伤后的表达变化

目的:观察不同年龄大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达情况及其在坐骨神经损伤后的表达变化,并分析其与脊髓细胞凋亡的关系。方法:实验于2004-03/09在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。选择Wistar大鼠324只,成年、幼年、老年大鼠各108只。不同年龄组动物均随机分为对照组和手术组,对照组12只为非手术组;手术组共96只,分为术后1d,3d,1周、2周、3周、4周、5周、6周8个时间组,每组12只。各手术组大鼠均在戊巴比妥钠麻醉后,切除股方肌下缘约6mm的坐骨神经。大鼠脊髓细胞凋亡情况采用原位缺口末端标记法及流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双标检测法,原位缺口末端标记阳性细胞及AnnexinⅤ阳性细胞即凋亡细胞;大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达情况应用免疫组化法检测;大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性应用ActivityAssay试剂盒检测。结果:所有大鼠全部进入结果分析,无脱失。①脊髓细胞凋亡情况的原位缺口末端标记及流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双标检测结果:正常成年及老年大鼠未见明显标记的阳性细胞,正常幼年大鼠可见个别阳性标记细胞,坐骨神经损伤诱导脊髓神经细胞凋亡的高发时间为伤后2～4周,老年大鼠细胞凋亡持续时间较长。各手术组正常侧与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。不同年龄大鼠AnnexinⅤ阳性细胞出现时间均早于原位缺口末端标记阳性细胞。②天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性及表达情况比较:幼年正常组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达及天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性均高于成年及老年大鼠(P<0.01),损伤后各年龄组均有明显变化,幼年正常组损伤后1d天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3开始升高,升高时间早于成年及老年组。各手术组正常侧与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:脊髓细胞凋亡情况与天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性测定结果有较好的相同改变趋势,提示天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的活化是细胞凋亡的早期生物化学指标。不同年龄大鼠正常时脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达以其在坐骨神经损伤后的表达变化存在差异,说明针对不同年龄段发生的周围神经损伤,其促进神经再生调控时期不同。

反刍动物血清肝特异酶活性正常值测定研究

血清中■氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)、山梨醇脱氢酶(SDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH),精氨酸酶(ARG)是反刍动物肝特异酶,测定其活性值是诊断肝损害的良好指标。本文报道了南昌地区黑白花乳牛、鄱阳湖滨水牛,广丰黄牛、广丰山羊等4种反刍动物血清中上述4种酶活性正常值。OCT 分别为3.71±1.20、10.42±6.64、9.35±6.34、3.96±3.12国际单位/L/分;SDH 分别为4.77±1.71、10.44±1.83、9.10±1.84、6.66±2.41毫国际单位/ml/分;GDH 分别为2.68±1.08、2.38±0.64、0.60±0.38、1.31±1.28毫国际单位;ARG 分别为9.57±2.61、24.32±10.94、1.85±1.73、2.89±3.76单位/L/分。

一种特异酶降解聚丙烯酰胺的室内研究

采用一种特异酶解决聚合物驱油过程中注聚井堵塞的问题。实验研究了此特异酶对聚合物驱分子量为1400×104聚丙烯酰胺的降解情况,主要讨论了酶的加量、作用时间、温度、矿化度等因素对特异酶降解聚丙烯酰胺的影响,并进行了渗透率恢复实验。实验显示,该特异酶的加量为聚丙烯酰胺浓度的3倍、温度为50℃左右时对聚丙烯酰胺的降解效果较好,并且此特异酶具有一定的抗盐性能。

血清神经元特异性烯醇化酶评估急性脑梗死患者病情严重程度及短期预后的意义

目的探讨血清神经元特异烯醇化酶(NSE)评估急性脑梗死患者病情严重程度及短期预后的意义。方法选择2019年1月至2020年4月上海交通大学医学院附属仁济医院宝山分院(以下简称“我院”)神经内科126例诊断为急性脑梗死的患者作为急性脑梗死组,另选取同期我院健康体检者55名为对照组。比较急性脑梗死组与对照组临床资料的差异。急性脑梗死组根据美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分评估病情严重程度,分为轻型(46例)、中型(47例)、重型(33例),再根据出院时神经功能缺损程度评分将其分为显著进步(41例)、进步(40例)、无变化(45例),比较不同病情严重程度和短期预后患者血清NSE水平的差异,分析NSE水平与急性脑梗死组NIHSS、神经功能缺损评分的相关性。评估NSE判断急性脑梗死患者病情程度及短期预后的受试者操作特征曲线下面积(AUC)、最佳临界值、敏感性及特异性。结果急性脑梗死组NSE水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻、中、重型患者NSE水平逐渐升高,显著进步、进步、无变化患者NSE水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。急性脑梗死组NSE水平与NIHSS评分呈正相关(r>0,P<0.05),与神经功能缺损评分呈负相关(r<0,P<0.05)。血清NSE水平对急性脑梗死患者病情严重程度及短期临床预后均有一定的预测价值(AUC>0.5,P<0.5)。结论血清NSE水平对急性脑梗死患者中枢神经损伤的严重程度及患者的短期临床预后具有判断价值,可作为急性脑梗死严重程度及短期临床预后评估提供可靠的生物学标志物。

序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)结合血清学在疑难血型鉴定中的应用

目的 探讨血型血清学与序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型在ABO疑难血型鉴定中的作用。方法 用血清学分析鉴定的ABO疑难血型标本80例,同时采用PCR-SSP法进行基因分型,结合两种方法学结果,确定血型及制定输血策略。结果 血清学鉴定亚型40例,其他原因引起的抗原抗体缺失或减弱正常血型40例;PCR-SSP法基因分型亚型41例(3例二者结果不一致:血清学Ael型1例,基因分型O2O2;血清学O型1例,基因分型BO1;血清学A型1例,基因分型AB),正常血型39例。结论 使用血清学结合基因分型鉴定ABO疑难血型具有重要意义。

血清神经元特异烯醇化酶临界值在鉴别小细胞肺癌与非小细胞肺癌中的作用

目的通过较大样本血清神经元特异烯醇化酶(NSE)的检测,确定鉴别小细胞肺癌(SCLC)与非小细胞肺癌(NSCLC)NSE血清水平临界值。方法酶联免疫吸附法检测137例经病理证实的肺癌患者NSE血清水平,应用ROC曲线确定鉴别SCLC与NSCLC的最佳临界值。结果SCLC组血清NSE阳性率显著高于NSCLC组(P<0.01),应用ROC曲线确定NSE的最佳临界值为15.45μg/L;在此临界值下,NSE鉴别SCLC与NSCLC的敏感性为66.7%,特异性为65.7%。结论检测血清NSE水平可以作为鉴别SCLC与NSCLC的指标之一,具有一定的临床应用价值。

全胸腔镜手术对肺癌病人的肿瘤标志物神经元特异烯醇化酶、降钙素原、CD3+、CD4+和CD8+的影响

目的探讨全胸腔镜手术对肺癌病人神经元特异烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)、降钙素原(procalcitonin, PCT)、CD3+、CD4+和CD8+的影响及与预后的相关性。方法 2016年10月~2018年2月我院行全胸腔镜手术的肺癌病人85例为观察组;同期来我院进行检查的102例健康人为对照组。采用电化学免疫发光法检测观察组病人手术前后以及对照组血清NSE和PCT水平,采用全自动流式细胞仪检测观察组病人手术前后及对照组CD3+、CD4+和CD8+水平。结果观察组病人手术前后NSE、PCT水平均高于对照组,但与术前比较,术后NSE、PCT水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);观察组病人手术前后CD8+比例均高于对照组,而CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例低于对照组,与术前比较,术后病人CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。二分类Logistic回归分析表明,NSE(OR=3.32,95%CI=1.88~6.02,P=0.023),PCT(OR=8.12,95%CI=3.25~20.12,P=0.012),CD3+(OR=2.33,95%CI=1.52~7.92,P=0.021),CD4+(OR=5.53,95%CI=3.20~8.65,P=0.018)和CD4+/CD8+(OR=4.82,95%CI=1.57~8.51,P=0.015)是影响肺癌病人全胸腔镜手术预后的独立危险因素。结论全胸腔镜手术可降低病人NSE和PCT水平,改善术后免疫功能。监测术后NSE、PCT、CD3+、CD4+和CD8+水平,对评估病人预后具有重要作用。

甲基化特异多聚酶链反应的改进及应用

背景与目的:甲基化特异多聚酶链反应(methylation-specificPCR,MSP)已经成为筛查DNA甲基化异常的最常用方法之一,但其方法繁琐、耗时、非特异性产物多和不经济,有待改进。RUNX3基因是胃癌的抑癌基因,失活的主要机制之一为DNA高甲基化,本研究目的在于用改进的MSP检测肝细胞癌RUNX3基因的甲基化状态。方法:采用玻璃奶回收化学修饰后的DNA,应用专用于GC丰富序列扩增的GC-Melt试剂以改良MSP并对152例肝细胞癌RUNX3基因的甲基化状态进行检测,并与常规MSP方法进行比较。结果:常规MSP方法纯化和回收DNA需要昂贵的纯化柱和高速低温离心机以及16h以上的纯化和回收时间;而在改良方法中,玻璃奶回收化学修饰后的DNA不需昂贵的纯化柱和高速低温离心机,纯化和回收过程只需1h。专用于扩增GC丰富序列的GC-Melt溶液较常规方法明显减少PCR的非特异性产物。51.9%(79/152)的肝细胞癌RUNX3基因呈现高甲基化状态。结论:改良的甲基化特异的PCR技术是筛查DNA甲基化高效、简便的方法。甲基化机制可能是肝细胞癌RUNX3基因失活的重要机制之一。

神经元特异烯醇化酶、胃泌素释放肽前体与小细胞肺癌病情变化的相关性研究

目的:观察小细胞肺癌(SCLC)患者病情变化时(肿瘤治疗有效或进展)神经元特异烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)的变化情况,研究二者的敏感性和与病情变化的一致性。方法:回顾性分析2013年1月~2016年12月在中日友好医院住院治疗的47例SCLC患者病历,记录其临床特征及病情变化前后NSE、ProGRP,进行统计分析。结果 :确诊时不同性别、年龄、吸烟史患者NSE、ProGRP水平无统计学差异(均P>0.05),广泛期患者均高于局限期患者(均P<0.05);当肿瘤治疗有效时,NSE、ProGRP水平均显著下降(均P<0.05);肿瘤进展时,ProGRP显著升高(P<0.05);肿瘤治疗有效时,NSE、ProGRP的变化符合率均为100%,中位下降度分别为70.59%、85.11%;肿瘤进展时,NSE、ProGRP变化符合率均为86%,中位上升率分别为128.57%、86.12%。结论 :NSE、ProGRP可以作为预测SCLC临床分期的辅助标志物;NSE、ProGRP均可反映病情变化,但ProGRP比NSE更灵敏;在SCLC的临床诊治中应加强对NSE、ProGRP的检测。

神经元特异烯醇化酶和S100蛋白在巨结肠及其类缘病中的表达

目的探讨神经元特异烯醇化酶(NSE)和S100蛋白(S100)在巨结肠及其类缘病的表达和临床意义。方法对120例拟诊为先天性巨结肠的病变肠段行HE染色,结合光镜下肠壁神经节细胞的形态特征,并对29例应用免疫组织化学技术行NSE、S100蛋白染色,比较其染色结果和分布特点。结果巨结肠类缘病标本的神经丛及神经节细胞数与正常组比较差异有显著性(P<0.01)。结论NSE、S100可作为巨结肠与其类缘病鉴别诊断的标记物,能提高临床巨结肠类缘病的确诊率。

胃泌素释放肽前体联合神经元特异烯醇化酶检测在局限期小细胞肺癌诊断中的应用价值

目的探究胃泌素释放肽前体(ProGRP)、神经元特异烯醇化酶(NSE)检测在局限期小细胞肺癌(SCLC)中的诊断价值。方法选取2015年6月-2018年6月明确诊断的46例局限期SCLC患者为实验组,选取同期于我院进行体检的46名健康体检者为对照组,分别对两组研究对象测定血清ProGRP、NSE,并进行对比,而后以病理检查作为金标准,对血清ProGRP、NSE检查的敏感度、特异度进行测定。结果对照组中血清ProGRP、NSE水平均正常,实验组血清ProGRP、NSE水平显著高于对照组,对比差异具有统计学意义(P<0.05);统计发现ProGRP敏感度为87.4%,特异度为94.6%;NSE敏感度为75.3%,特异度为90.4%;两项联合敏感度95.6%,特异度96.8%。结论血清ProGRP、NSE检测能够较为准确地反映局限期SCLC患者的病情,值得进行临床推广。

立体分子伴侣-脂肪酶特异折叠酶

细菌脂肪酶是一类重要的工业用酶,尤其以来源于假单孢杆菌Pseudomonas与伯克霍尔德菌Burk-holderia的脂肪酶应用最为广泛。然而,这类脂肪酶折叠过程中存在一个巨大的能障而无法自发正确折叠。研究发现,这类脂肪酶的编码基因所在操纵子中往往存在一个与其折叠相关的基因,编码一种脂肪酶特异折叠酶。该类蛋白为脂肪酶的立体分子伴侣,可与脂肪酶的折叠中间体相互作用,帮助脂肪酶越过折叠过程中的能量障碍,为其获得正确构象提供必要的空间信息。详细阐述了脂肪酶特异折叠酶的发现、分类、作用机制与应用前景。

人肌型特异烯醇化酶放免分析法及初步应用

建立了人肌型特异烯醇化酶（ｈＭＳＥ）的放免分析法，抗血清的亲和常数为５．１×１０￣９Ｌ／ｍｏｌ，采用改良的ＢＨＲ法制备了￣（１２５）Ｉ－ｈＭＳＥ，后者非特异结合率为３％，与抗血清（１∶１０￣３）结合率达５０．１６％；批内和批间ＣＶ分别为８．６％和１３％．回收率为９５％－１０５％．标准曲线范围为５－３２０μｇ／Ｌ．最小检出率为５μｇ／Ｌ．最佳反应条件：０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．４ＰＢＳ（含５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ＿４，０．１％吐温－２０，０．１％ＮａＮ＿３）；反应温度和时间：３７℃反应０．５ｈ和４℃，０．５ｈ，作为快速测定；或选用４℃反应２４ｈ．６５例健康人血清ｈＭＳＥ浓度为２３．９±１０．９μｇ／Ｌ（－ｘ±ｓ）．ｈＭＳＥ超过５７μｇ／Ｌ（－ｘ＋３ｓ）．为阳性值．测定了ＡＭＩ和肌病患者，血清ｈＭＳＥ明显升高．

锰对仔鼠黑质神经元特异性烯醇化酶的影响

目的研究孕鼠染锰对其子代脑黑质中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的影响.方法将已受孕大鼠随机分为3组,在妊娠的第1～15 d,隔日1次腹腔内注射氯化锰,剂量分别为0、7.5、15 mg/kg,然后运用免疫组化法检测其21日龄仔鼠脑黑质和尾壳核的NSE,并用图像分析仪定量分析.结果实验各组仔鼠脑黑质和尾壳核中NSE阳性神经元的平均吸光度、积分吸光度均明显低于对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论大鼠孕期染锰,可导致子代脑黑质NSE阳性神经元减少,引起中枢神经发育障碍.

附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶基因调控的研究进展

附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶(epididymal specific glutathione peroxidase,GPx5)可保护精子免受氧化应激,维持精子遗传信息的完整性,促进精子发育成熟,其重要生理功能在提高动物繁殖力上有着不可替代的作用,但其基因调控转录表达的机制尚不明确。现作者主要对基因表达特性、表达调控和转录调控等内容进行综述。

竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链反应法和DNA直接测序法检测KRAS G12D突变的对比分析

目的对比分析竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链反应(castPCR)法和DNA直接测序法检测肠镜活组织检查标本KRAS G12D突变的差异。方法应用活组织检查钳收集肠镜下结直肠腺瘤和结直肠癌组织,抽提组织DNA,分别采用castPCR法和DNA直接测序法获得KRAS G12D的突变情况。结果腺瘤组和腺癌组castPCR法检测的KRAS G12D突变率均显著高于同组DNA直接测序法(P值均<0.05),两组间castPCR法和DNA直接测序法检测的KRAS G12D突变率的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。腺瘤组两种检测方法的突变型符合率为55.6%,野生型符合率为100.0%,阴性符合率为100.0%,总体符合率为87.5%,一致性检验Kappa值为0.643 5;腺癌组两种检测方法的突变型符合率为50.0%,野生型符合率为100.0%,阴性符合率为100.0%,总体符合率为85.0%,一致性检验Kappa值为0.583 3。提示两种方法检测阴性的一致性程度均较高,但检测阳性的一致性程度一般。Mutation Detector分析结果显示,castPCR法能够检测出突变量<1%的突变,灵敏度高达0.1%。检测突变量分析结果显示,当KRAS G12D突变量≥4%时,castPCR法和DNA直接测序法检测KRAS G12D均为阳性;当突变量<4%时,仅castPCR法能够检测出KRAS G12D为阳性。提示castPCR法能够检测出DNA直接测序法检测不出的KRAS G12D突变,较DNA直接测序法效率高。结论 castPCR法能够高效地检测肠镜活组织检查标本中低突变量的KRAS G12D,其临床实用价值较DNA直接测序法高。

正己烷接触对血清神经元特异烯醇化酶及髓鞘碱性蛋白的影响

目的研究正己烷接触对血清神经元特异烯醇化酶(NSE)及髓鞘碱性蛋白(MBP)的影响。方法分别对接触组37名及对照组49名工人应用酶联免疫吸附法测定其NSE及MBP的血清含量。结果接触组和对照组的血清NSE含量分别为(8.4±7.7)、(7.8±3.2)μg/L,接触组的血清NSE水平高于对照组(P<0.05);血清MBP含量分别为(1.59±0.54)、(0.94±0.27)μg/L,接触组明显高于对照组(P<0.05)。结论正己烷接触可导致血清NSE及MBP升高。

缺血缺氧性脑病新生儿血清特异烯醇化酶、缺氧诱导因子-1α表达水平及临床意义

目的:探讨缺血缺氧性脑病(HIE)新生儿血清特异烯醇化酶(NSE)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平及临床意义。方法:选取本院收治的HIE新生儿82例为研究组,分为轻度组(n=27),中度组(n=42)和重度组(n=13)。选择同期于本院出生的健康且足月新生儿75名作为对照组。比较研究组和对照组一般资料、血清NSE、HIF-1α的水平,比较不同严重程度的HIE患儿的血清NSE、HIF-1α水平;采用Spearman相关性分析血清NSE、HIF-1α水平与NBNA评分的关系。结果:研究组患儿血清NSE、HIF-1α水平明显高于对照组(P<0.05)。研究组不同病情程度患儿血清NSE、HIF-1α水平比较,差异存在显著性(P<0.05)。研究组患儿血清NSE、HIF-1α水平与NBNA评分均呈明显负相关(P<0.05)。结论:NSE、HIF-1α在HIE患儿血清中表达水平较高,且与患儿的病情严重程度存在相关性。

非小细胞肺癌患者外周血癌胚抗原、铁蛋白和神经元特异度烯醇化酶水平与肿瘤增殖、侵袭的关系

目的 分析非小细胞肺癌患者外周血癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、血清铁蛋白(serum ferritin,SF)和神经元特异度烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)水平与肿瘤增殖、侵袭的相关性。方法 回顾性分析医院2019年8月-2020年12月诊治的86例非小细胞肺癌患者作为研究对象,将其纳入病例组。于同期选择体检健康的受试者86例,将其纳入对照组。使用倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)法保证两组研究对象年龄和性别平衡后检测血清CEA、SF和NSE水平,根据患者病理结果将其分成增殖组和非增殖组,侵袭组和非侵袭组。比较病例组及对照组CEA、SF和NSE水平,分析增殖组和非增殖组,侵袭组和非侵袭组CEA、SF和NSE水平,探讨不同CEA、SF和NSE表达水平对肿瘤增殖、侵袭的影响。结果 病例组患者血清CEA、SF和NSE水平高于对照组(均P<0.05)。病例组中86例患者中34例患者发生增殖,26例患者发生肿瘤侵袭。增殖患者血清CEA、SF和NSE高于非增殖患者(P<0.05)。侵袭患者血清CEA、SF和NSE水平高于非侵袭患者(P<0.05)。血清CEA、SF和NSE高表达与肿瘤增殖及侵袭情况呈正相关(P<0.05)。CEA、SF和NSE水平越高,肿瘤增殖及侵袭风险越大。结论非小细胞肺癌患者血清CEA、SF和NSE水平高表达,且表达情况直接影响肿瘤增殖和侵袭。