成视网膜细胞瘤结合蛋白4对Sp1介导的HIV长末端重复序列转录作用研究

目的 研究成视网膜细胞瘤结合蛋白4（RBBP4）对于Sp1介导的HIV长末端重复序列（Long terminal repeat,LTR）的转录作用及其调控机制.方法 利用脂质体共转染的方法,分别将RBBP4表达载体、Sp1表达载体与带荧光素酶标签的HIV启动子载体pHIV-LTR-Luc和Sp1位点突变载体pHIV-LTR-sp1-mut进行转染,用双荧光素酶报告系统检测HIV LTR转录活性.利用染色质免疫共沉淀（ChIP）和凝胶迁移实验（EMSA）进一步研究RBBP4对Sp1在LTR上结合的影响.结果 实验结果显示,在RBBP4的转染剂量为500 ng时,Sp1介导激活的相对萤火虫荧光素酶活性值由62.5下降到16（t=14.52,P〈0.01）.HIV LTR上Sp1结合位点突变后,100、300和500 ng的RBBP4表达载体对HIV LTR介导的萤火虫荧光素酶活性值的影响经双尾配对差异均无统计学意义（t=1.897、2.357和3.162,P值均〉0.05）.ChIP结果显示,当RBBP4在HIV LTR上的结合增加时,Sp1在HIV LTR上的结合量明显增加（t=11.93,P〈0.01）,RBBP4在HIV LTR上结合减少,Sp1在LTR上的结合明显减少（t=11.38,P〈0.01）.EMSA结果也进一步验证了ChIP结果中RBBP4对Sp1结合DNA的影响.结论 RBBP4可抑制Sp1介导HIV LTR的转录.