烤烟特征香韵品系8号清甜香韵的形成机制研究

烤烟特征香韵品系8号(特8)是通过EMS诱变中烟100,连续自交选育的烤烟新品系,其现蕾期的上部叶具有明显的清甜香韵。为探讨鲜烟叶香韵的形成机制,以特8和中烟100为研究对象,运用顶空-箭型固相微萃取-气相色谱质谱联用法(HS-SPME Arrow-GC/MS)测定其挥发性成分,结合转录组学方法开展相关研究。结果显示:(1)特8挥发性成分有26种化合物,其中萜烯类化合物数量18种,相对含量均值为71.74%,是中烟100的2.34倍;(2)特8芳樟醇的相对含量均值为52.12%,为中烟100的3.40倍,是清甜香韵的主体成分;(3)MVA通路负责合成挥发性萜烯类化合物,特8现蕾期上部叶有9个关键限速酶基因、12个TPS基因上调表达,有助于提高萜烯类化合物的释放量,其中TPS亚家族b成员LOC107762925可能是芳樟醇合酶基因。综上所述,特8现蕾期上部叶的MVA通路存在多个关键基因协同上调,有助于提升其挥发性萜烯类化合物的总体释放量,而具有清甜香味且相对含量最高的芳樟醇可能是赋予其清甜香韵的主效因子。

番茄果实特异性E8启动子的基因克隆与序列分析

目的获取番茄果实特异性E8启动子基因,为实现外源基因在转基因番茄中果实特异性表达做准备。方法培养中蔬5号(Zhongshu No.5)番茄幼苗, 采集叶片,用Omega公司的植物基因组提取试剂盒提取番茄基因组DNA;设计引物,从基因组中通过PCR扩增获得番茄果实特异性E81.1和E82.2启动子基因;克隆进pGEM-T载体,酶切鉴定;送上海基康公司测序;序列分析。结果从番茄基因组DNA中PCR扩增得到预期大小的启动子片段;构建重组pGEM-T-E81.1和pGEM-T-E82.2载体,经酶切证实具有与目标片段长度相符的插入片段;测序结果分析显示:番茄果实特异性E8启动子序列高度保守,所获得的Zhongshu No.5 E82.2启动子DNA序列与Deikman报道的Cherry种的E82.2启动子同源性为99%, 登陆GenBank, ID号为AF515784。结论成功获得Zhongshu No.5番茄果实特异性E81.1、E82.2启动子基因,为下一步转基因番茄口服疫苗的研制奠定了一定的工作基础。

活动性慢性乙型肝炎患者特异性CD8^+T细胞转录因子T-bet表达及临床意义

目的分析转录因子T-bet在活动性慢性乙型肝炎患者外周血HBV特异性CD8+T细胞中的表达及其临床意义。方法用HBV肽五聚体结合流式细胞仪检测HLA-A2阳性的活动性慢性乙型肝炎患者和急性乙型肝炎患者外周血HBV特异性CD8+T细胞中T-bet的表达。比较分析HBV特异性CD8+T细胞中T-bet表达在急性、慢性乙型肝炎之间的差异,并进一步分析慢性乙型肝炎患者HBV特异性CD8+T细胞中T-bet表达与HBV DNA水平、ALT水平以及临床预后之间的相关性。结果急性乙型肝炎患者外周血HBV特异性CD8+T细胞中T-bet表达水平显著高于活动性慢性乙型肝炎患者。活动性慢性乙型肝炎患者及CHB患者外周血HBV特异性CD8+T细胞中T-bet表达水平与HBV DNA水平及ALT水平无明显相关性,HBV特异性CD8+T细胞中T-bet表达水平高的活动性慢性乙型肝炎患者发生HBeAg血清转换率显著升高。结论活动性慢性乙型肝炎患者特异性CD8+T细胞转录因子T-bet表达与HBV感染的免疫控制密切相关。

HBcAg肽特异性CD8^+T细胞抑制乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的观察HBV感染者的HBcAg肽特异性CD8+T细胞体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)的作用和探讨非溶细胞机制清除病毒的效应分子。方法以HepG2.2.15细胞为靶细胞。用HLA-A匹配的HBcAg肽特异性CD8+T细胞克隆(效应细胞)与靶细胞(效靶比例1∶50)共同培养,于24h、48h和72h收集培养上清,通过检测其中HBV产物的变化,观察CD8+T克隆对HBV的抑制作用。用抗体中和法观察CD8+T细胞分泌的IFN-γ被封闭后HBV抑制的变化。结果 HBV特异性CD8+T克隆与靶细胞共育后,培养上清可检出高水平IFN-γ。共育后对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的最高抑制率分别为54.55%、50.36%和74.55%,均在72h。IFN-γ被抗体封闭后,对HBV DNA的抑制率显著下降,24h和48h分别为6.22%和17.48%。细胞毒活性最高见于24h,15.66%。结论①病毒特异性CD8+T细胞对靶细胞中HBV的清除既有溶细胞机制,也有非溶细胞机制参与;②IFN-γ是非溶细胞机制清除病毒的主要效应分子。

8级特大地震前地震活动平静特征——以中国大陆西部近期2次8级地震为例

中强地震平静图像已被许多研究者认为是强震前的一个典型异常指标。近期中国大陆西部2次8级地震前地震活动图像的研究认为,8级特大地震前不仅中强震出现大面积平静,而且中小地震也会出现大规模平静现象,形成地震空区。震前依据震级由大而小逐级形成配套出现的地震空区,可作为中国大陆西部8级特大地震的中短期预测与8级地震发生地区的判定的一项有实际意义的指标。

甲型H1N1流感病毒感染年轻和老年C57BL/6小鼠 诱导肺组织CD8^(+)T细胞特异性免疫应答的比较研究

目的比较甲型H1N1流感病毒PR8毒株感染老年和年轻C57BL/6小鼠诱导肺组织CD8^(+)T细胞特异性免疫应答的能力。方法使用490 PFU的PR8病毒分别滴鼻感染年轻(3月龄)和老年(24月龄)C57BL/6小鼠,连续14 d每日记录其体重变化及死亡情况。在感染后第8天分离小鼠肺组织细胞,使用流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测病毒抗原特异性CD8^(+)T细胞数量及功能:MHC-I表位肽四聚体法(tetramer staining)染色流感特异性CD8^(+)T细胞,细胞内细胞因子染色法(intracellular cytokine staining,ICS)检测CD8^(+)T细胞经流感病毒特异性肽刺激后分泌细胞因子水平包括TNF-α、IFN-γ、IL-2以及与CD8^(+)T细胞杀伤功能有关的颗粒酶B(Granzyme B)的水平。结果相同量的PR8流感病毒感染小鼠后,老年小鼠体重下降更多,死亡率显著高于年轻小鼠(P<0.01)。另一方面,老年组小鼠诱生的病毒特异性CD8^(+)T细胞比例显著低于年轻组;同时,老年组CD8^(+)T细胞活化后分泌细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2的水平显著低于年轻组;此外,老年组CD8^(+)T细胞表达granzyme B的水平同样显著低于年轻组。结论PR8流感病毒感染老年和年轻C57BL/6小鼠后,老年小鼠肺组织诱导产生的特异性CD8^(+)T细胞的数量减少且功能降低。结果表明:与年轻小鼠相比,老年小鼠肺组织CD8^(+)T细胞特异性免疫应答功能受损。

植物果实特异性启动子E8基因的克隆

采用高盐低pH值法、分步离心法、SDS法、CTAB法、改良CTAB法提取毛粉802番茄幼苗基因组DNA,其中改良CTAB法提取的DNA效果最好,以此DNA为模板,用特异性引物进行PCR扩增,得到了预期大小的片段,将目的片段回收,克隆进pMD18-T Simple Vector载体,经PCR及酶切检测具有与目标片段长度相符的插入片段,构建的重组pMD18-E8载体经测序结果分析显示,番茄果实特异性E8启动子序列具有高度保守性,与GenBank上发表的E81.1启动子同源性为99.1%,说明成功获得了果实特异性E8启动子基因,为实现外源基因在转基因桃果实中特异性表达做准备。

三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8表达的影响

目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8 表达的影响.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂预处理组(开放剂组)及KATP开放剂+阻断剂预处理组(阻断剂组).应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脑缺血再灌注后各组脑组织凋亡细胞数和caspase-8 mRNA及蛋白的表达.结果 (1)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点凋亡细胞数,开放剂组较对照组和阻断剂组显著减少(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(2)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点caspase-8蛋白表达,开放剂组显著低于对照组和阻断剂组(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(3)缺血再灌注各时间点caspase-8 mRNA表达,开放剂组均显著低于对照组和阻断剂组(均P＜0.01), 阻断剂组与对照组各时间点相比差异无统计学意义.结论 KATP开放剂能显著减少脑缺血再灌注后神经元凋亡和caspase-8 mRNA及蛋白的表达;KATP开放剂可能通过抑制死亡受体通路发挥脑保护作用.

乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗前后抗原特异性CD8^(+)T细胞功能分析

目的观察乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗前后外周血HBV抗原特异性T细胞的数量功能与临床预后的相关性。方法经HLA-A2分型检测选取46例患者,采用主要组织相容性复合物(MHC)-抗原肽四聚体标记技术,经流式细胞仪检测乙型肝炎肝硬化患者抗病毒治疗前后外周血HBV抗原特异性CD8^(+)T细胞百分比,并对其细胞因子分泌能力及表型进行检测分析。结果46例人类白细胞相关抗原HLA-A2阳性者中,检出抗原特异性CD8^(+)T细胞表达的为22例。TDF治疗后患者ALT为(31.29±18.42)U/L,较治疗前(124.05±29.18)U/L明显下降(t=72,P=0.015),HBV DNA全部转阴,转阴率为100%。治疗后抗原特异性的CD8^(+)T细胞数量为(1.15±0.37)%,明显高于治疗前的(0.65±0.25)%(t=59,P<0.01);治疗后γ干扰素为(6.86±2.08)%,明显高于治疗前(3.58±1.26)%(t=46,P<0.01);抗病毒治疗后HBV表位特异性的CD8^(+)T细胞表达抑制性因子PD-1的细胞百分比为(0.43±0.19)%,低于治疗前的(0.76±0.43)%(t=131,P=0.0084);HBV表位特异性的CD8^(+)T细胞表达活性因子CD28的细胞百分比为(1.03±0.45)%,高于治疗前的(0.56±0.26)%(t=100,P=0.0006)。结论乙型肝炎肝硬化患者外周血中抗原特异性CD8^(+)T细胞存在功能缺陷,经抗病毒治疗后抗原特异性CD8^(+)T细胞数量和功能有一定程度的增强。

敲低胎盘特异性蛋白8(PLAC8)抑制人胚胎干细胞增殖并促进其凋亡

目的探讨胎盘特异性蛋白8(PLAC8)对人胚胎干细胞(hESC)增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR和Western blot法检测空载体组、PLAC8短发夹RNA(shPLAC8)组、过表达PLAC8(PLAC8-OE)组感染hESC的效率;以及各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(CCND1)的mRNA和蛋白水平。流式细胞术检测敲低和过表达PLAC8对hESC凋亡的影响。结果PLAC8敲低组的CCND1、PCNA的mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡增加;PLAC8过表达组CCND1和PCNA的mRNA和蛋白表达略上调,细胞凋亡略有下降,但差异均无统计学意义。结论敲低PLAC8的表达会抑制hESC增殖并促进其凋亡。

甲型流感病毒H1N1 pdm09与PR8感染C57BL/6小鼠诱生特异性CD8^+T细胞免疫应答的比较研究

目的比较甲型流感病毒H1N1两亚型毒株A/Shanghai/37T/2009(H1N1)(pdm09)临床分离株和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)标准株感染C57BL/6小鼠后,其病理状态的改变及诱生特异性CD8+T细胞的免疫反应。方法①用9.85×10 6半数组织细胞感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID 50 )的PR8和pdm09病毒分别滴鼻感染野生型C57BL/6小鼠,每日(连续14 d)观察其状态并记录死亡情况。于感染后第1、3天处死小鼠,取其肺称重计算肺指数;左叶肺经4%多聚甲醛固定后进行H&E(hematoxylin-eosin staining)染色,观察感染后肺的病理变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺病毒载量。②用0.25倍半数致死量(lethal dose 50%,LD50)的PR8和pdm09分别滴鼻感染小鼠,每日称重连续观察。于感染后第8天解剖取肺和脾,通过H&E染色比较肺部病理改变;通过流式细胞术(FACS)检测脾病毒特异性CD8+T细胞数量比例,以及IFN-γ、TNF-α、IL-2、granzyme B等细胞因子和免疫抑制检查点分子PD-1、LAG-3、Tim-3、CTLA-4的表达情况。结果①以相同TCID 50 流感病毒感染后,两组小鼠均出现疾病状态。PR8组小鼠感染第5天全部死亡,死亡率显著高于pdm09组( P<0.01);第1、3天肺指数和病毒载量的结果PR8组均显著高于pdm09组;H&E染色结果显示PR8组病理损伤严重,肺泡壁增厚,出现肺实质化,血细胞渗出增多,而pdm09组小鼠肺组织病理损伤较轻,炎症浸润少;②以相同LD50流感病毒感染后,PR8组小鼠的体重损失和肺组织病理损伤均比pdm09组严重;流式结果显示PR8组诱生的病毒特异性CD8+T细胞比例高于pdm09组,但是PR8组中活化的CD8+T细胞(CD8+CD44 High )表达的IFN-γ、IL-2和TNF-α显著低于pdm09组;检测该群细胞免疫功能耗竭分子,发现其表达了更多的免疫抑制分子PD-1和LAG-3。结论 PR8相对于pdm09能够对小鼠造成更严重的损伤,可能是因为其活化的特异性的CD8+T细胞出现功能耗竭导致特异的免疫保护力受损,抵抗和清除病毒的能力下降,故而造成更严重的病理损伤。

受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型流感病毒H1N1感染C57BL/6小鼠诱导特异性CD8^+T细胞应答

目的研究受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein 3, RIP3)在C57BL/6小鼠感染甲型流感病毒H1N1 PR8后,在特异性CD8+T细胞免疫应答中的作用。方法用剂量为0.7×10^3半数组织细胞感染剂量(50% tissue culture infective dose, TCID 50 )的甲型流感H1N1 PR8病毒株,通过滴鼻方式分别感染RIP3敲除(RIP3 -/-)和野生型(WT)的C57BL/6小鼠。在感染后第8天(day post infection, d.p.i)分离小鼠脾细胞,使用流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting, FACS)检测流感抗原特异性CD8+T细胞数量及功能:MHC I表位肽四聚体法(tetramer staining)染色流感特异性CD8+T细胞,细胞内细胞因子染色法(intracellular cytokine staining, ICS)检测CD8 +T细胞产生IFN-γ、TNF-α、IL-2等效应性细胞因子水平和与CD8+T细胞杀伤功能有关的颗粒酶(granzyme B)的表达情况。结果 0.7×10^3 TCID 50 流感病毒感染后,WT小鼠中流感抗原特异性CD8 +T细胞比例为RIP3 -/-小鼠的2.71倍;WT小鼠中CD8+T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的能力均显著高于RIP3 -/-小鼠( P<0.01);且WT小鼠CD8+T表达granzyme B水平显著高于RIP3 -/-小鼠( P<0.01)。结论本研究在甲型流感病毒感染的小鼠体内发现敲除RIP3分子可导致流感感染诱导的特异性CD8+T细胞数量减少、功能降低,表明RIP3是参与流感抗原特异性CD8 +T细胞的诱生及功能发挥的关键分子之一。

黄芪和红花对脑缺血再灌注后大鼠神经细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8的影响

目的研究黄芪和红花对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8的影响。方法采用局灶性脑缺血再灌注模型,分假手术组、模型组、黄芪加红花组、黄芪组和红花组。术后分为12h、24h和48h3个时间点,行神经功能评分;缺口末端标记法观察凋亡的情况;免疫组织化学观察缺血周围区神经细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8表达强度。结果黄芪和红花均能改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能评分。缺血再灌注24h的凋亡阳性细胞数与模型组比较,各治疗组差异均有显著性(P<0.05);在治疗组中,黄芪加红花组与红花组和黄芪组凋亡阳性细胞数比较差异均有显著性(P<0.05)。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8阳性表达水平:缺血再灌注12h,黄芪组、黄芪加红花组与模型组比较,差异均有显著性(P<0.05);红花组与黄芪加红花组比较,差异均有显著性(P<0.05)。缺血再灌注24h和缺血再灌注48h,各组之间差异有显著性(P<0.05)。结论黄芪加红花可减轻大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,其机制可能与下调凋亡通路中的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8的表达有关。

乙肝病毒核心抗原特异性CD8^+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT的相关性研究

目的探讨乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原特异性CD8^+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、谷丙转氨酶(ALT)的相关性。方法选择47例急性乙肝患者作为急性乙肝组,同期39例慢性乙肝活动期患者作为慢性乙肝组,同期28例健康体检者作为对照组,比较三组核心抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞及相关因子(Core18-27、Env335-343、Pol575-583)、HBV-DNA、ALT、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平,分析乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子与HBV-DNA、ALT的相关性。结果急性乙肝组Core18-27、Env335-343、Pol 575-583水平分别为(1.24±0.51)%、(0.09±0.01)%、(0.09±0.02)%,高于对照组的(0.09±0.02)%、(0.06±0.02)%、(0.07±0.02)%和慢性乙肝组的(0.05±0.01)%、(0.04±0.01)%、(0.03±0.01)%,且对照组均高于慢性乙肝组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。急性乙肝组HBVDNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平分别为(21.59±4.32)×10^3 copies/ml、(85.35±5.49)U/L、(120.59±12.19)U/L、(125.98±13.42)U/L、(40.39±1.32)μmol/L,均高于慢性乙肝组的(13.21±3.29)×10^3 copies/ml、(62.14±5.05)U/L、(87.56±6.87)U/L、(102.12±10.06)U/L、(25.49±1.21)μmol/L和对照组的0、(32.21±3.25)U/L、(30.29±3.41)U/L、(33.49±3.09)U/L、(12.59±0.14)μmol/L,且慢性乙肝组高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Core18-27、Env335-343和Pol 575-583与HBV-DNA、AST、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相关(P<0.05)。结论乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT存在相关性,加强其表达水平测定反映疾病严重程度,有助于指导临床治疗。

COVID-19患者体内SARS-CoV-2特异性的记忆性CD8^(+)T细胞和抗体水平的变化

目的研究SARS-CoV-2病人恢复期的病毒特异性的记忆性T细胞和抗体水平的变化。方法通过SARS-CoV-2特异性抗原肽刺激COVID-19病人来源PBMC,流式细胞术检测不同疾病严重程度COVID-19患者SARS-CoV-2特异性的记忆性CD8^(+)T细胞的数目以及功能,ELISA检测不同疾病严重程度COVID-19患者血清中S1、S2特异性的IgG水平。结果与中、重症COVID-19患者相比,无症状或轻症的COVID-19患者体内拥有数目更多,质量更好的SARS-CoV-2特异性的记忆性CD8^(+)T细胞;中、重症SARS-CoV-2感染患者血清中病毒特异性IgG水平随着时间延长而降低,维持时间较短。结论无症状和轻症COVID-19患者体内拥有质量更好的病毒特异性的记忆性CD8^(+)T细胞。

河南“9·8”特大矿难案法人被处死刑

11月16日，河南省平顶山市中级人民法院依法对河南平顶山2009年“9·8”特大矿难案中的李新军等被告人进行了一审公开宣判，5名被告人分别被以强令违章冒险作业罪、以危险方法危害公共安全罪等罪名判处死刑缓期二年执行或有期徒刑等。

cFLIP和caspase-8在犬胆道良性损伤修复过程中的表达

目的:观察凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白(FLICE-like inhibitory protein,c-FLIP)及其下游凋亡因子caspase-8在胆道损伤愈合良性狭窄形成过程中的表达和定位.方法:建立胆管损伤后良性狭窄犬模型,利用采用免疫组织化学SABC法分别对15例犬胆道损伤后2、3、4、5、6mo及其配对的15例假手术组的吻合口组织中c-FLIP及caspase-8表达和定位进行分析,根据染色细胞的比例,计算每张切片的平均吸光度值,分别比较cFLIP及caspase-8在实验组及其配对的假手术组胆道吻合口组织表达的差异,及两组内不同时相之间c-FLIP及caspase-8在吻合口组织表达的差异.结果:c-FLIP蛋白于实验组内各时间点均呈阳性表达,定位于间质细胞,以成纤维细胞胞质最明显,各时间点内实验组与对照组比较有显著性差异(22.33±3.40vs3.41±0.69,21.01±5.43vs3.28±0.95,18.93±2.54vs3.11±1.01,18.88±3.40vs3.35±0.74,17.23±3.53vs3.19±0.91,均P<0.05),而各时间点之间无显著性差异(P>0.05).caspase-8于实验组各时相均呈现弱表达,定位以腺上皮居多,间质组织表达相对较弱,与配对之对照组比较均差异显著(3.20±0.86vs11.66±2.80,3.42±1.17vs10.16±3.08,3.65±0.90vs10.03±1.93,3.91±0.71vs10.90±4.02,4.01±0.88vs11.23±2.73,P<0.05),而各时间点之间亦无显著性差异(P>0.05).c-FLIP与caspase-8蛋白表达成负相关(r=-0.94,P<0.05).结论:cFLIP可能通过抑制caspase-8的激活在胆道良性狭窄形成过程中发挥了其抗凋亡的作用.

妇科千金片对慢性盆腔炎模型大鼠卵巢组织caspase-3和caspase-8表达的影响

目的建立SD大鼠慢性盆腔炎模型,观察妇科千金片对大鼠慢性盆腔炎模型中卵巢组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8(caspase-8)表达的影响,探讨妇科千金片治疗慢性盆腔炎的作用机制。方法采用混合菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及解脲脲原体)接种法,建立慢性盆腔炎模型,随机分成妇科千金片低、中、高(0.52,1.04和2.08g·kg-1)剂量组,中药妇炎康对照组(妇炎康0.41g·kg-1),假手术组、模型组和空白组7组。药物治疗后,取卵巢组织,运用免疫细胞化学法观察caspase-3和caspase-8表达情况。结果治疗21d后,与模型组比,妇科千金片低剂量组caspase-3蛋白光密度值升高,具有显著性差异(P<0.05),妇科千金片中、高剂量caspase-3蛋白光密度值明显升高,具有非常显著性差异(P<0.01);与模型组比,妇科千金片低、中、高剂量caspase-8蛋白光密度值明显升高,具有非常显著性差异(P<0.01)。结论妇科千金片可能通过升高caspase-3、caspase-8蛋白的表达,引发caspase级联反应,促使炎性细胞凋亡,从而减轻卵巢组织炎性损害。

脑血管痉挛小鼠脑动脉细胞外信号调节激酶及caspase-8表达的变化

目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8（caspase-8）在脑血管痉挛（CVS）后早期脑损伤中的作用，并探讨ERK特异性抑制剂U0126通过此途径发挥作用的保护机制。方法：采用非开颅血管内穿线法制备小鼠蛛网膜下腔出血（SAH）并脑血管痉挛模型，给予U0126，术后行神经功能评分，分别在术后12、24、48h3个时相点取右侧大脑动脉标本，应用免疫印迹检测各组磷酸化ERKl／2（p-ERKl／2）、caspase-8蛋白表达，TUNEL法检测大脑中动脉内皮细胞凋亡。结果：模型组小鼠神经功能评分降低，大脑中动脉出现严重脑血管痉挛，随脑血管痉挛时间延长，各组小鼠p-ERKl／2、caspase-8蛋白均有不同程度增强，凋亡细胞增多。与模型组比较，治疗组小鼠神经功能评分增加，各时相点3项指标的表达均不同程度下调。脑血管痉挛12-48hp-ERKl／2与caspase-8呈正相关。结论：脑血管痉挛后，ERK表达增强可通过激活caspase-8信号途径诱导大脑动脉内皮细胞凋亡；U0126对脑血管痉挛具有一定的治疗作用，其机制之一可能是通过部分阻抑ERK通路活化，减少凋亡实现的。

妇科千金片对大鼠慢性盆腔炎模型输卵管组织Caspase-3和Caspase-8表达的影响

目的:通过观察妇科千金片对SD大鼠慢性盆腔炎模型中输卵管组织Caspase-3蛋白和Caspase-8蛋白表达影响,深入探讨妇科千金片治疗慢性盆腔炎的作用机制。方法:采用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及解脲脲原体混合菌接种法,建立慢性盆腔炎模型,随机分成七组:空白组,模型组,假手术组,中药妇炎康(0.41g·kg-1)对照组,和妇科千金片低剂量组(0.52g·kg-1)、中剂量组(1.04g·kg-1)、高剂量组(2.08g·kg-1)。经药物治疗后,解剖大鼠取输卵管组织,运用免疫细胞化学法观察Caspase-3蛋白和Caspase-8蛋白表达情况。结果:治疗21d后,与模型组比,妇科千金片低剂量组Caspase-3蛋白光密度值升高,具有明显差异(P<0.05),妇科千金片中、高剂量Caspase-3蛋白光密度值明显升高,具有显著性差异(P<0.01);与模型组比,妇科千金片低、中、高剂量Caspase-8蛋白光密度值明显升高,具有显著性差异(P<0.01)。结论:妇科千金片可能通过升高Caspase-3蛋白和Caspase-8蛋白的表达,引发Caspase级联反应,促使炎性细胞凋亡,从而减轻输卵管组织炎性损害。