犀地凉血方通过LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络对HaCaT细胞增殖、凋亡影响的研究

目的探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象,通过qPCR、Western印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中的表达。采用荧光原位杂交技术(FISH)观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达;采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清,以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞,将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组,采用qPCR、Western印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本t检验、单因素方差分析、LSD-t检验进行统计学分析。结果IL-17诱导的HaCaT细胞组LncRNA NEAT1、STAT3 mRNA相对表达水平(1.84±0.21、2.20±0.24)高于NHEK细胞组(1.00±0.11、1.00±0.11,均P<0.05),miR-485-5p相对表达水平(0.32±0.04)低于NHEK细胞组(1.00±0.12,t=2.94,P=0.015);STAT3、p-STAT3蛋白表达水平(1.27±0.13、2.43±0.16)均高于NHEK细胞组(1.00±0.11、1.00±0.10,t=2.54、3.02,均P<0.05)。FISH检测显示,miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质。双萤光素酶报告基因实验显示,共转染野生型LncRNA NEAT1、STAT3重组质粒时,miR-485-5p组细胞相对萤光素酶活性明显低于阴性对照组(均P<0.05);而共转染突变型LncRNA NEAT1、STAT3重组载体质粒时,miR-485-5p组细胞萤光素酶活性与阴性对照组差异无统计学意义(均P>0.05)。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞中LncRNA NEAT1、STAT3(包括STAT3 mRNA和STAT3、p-STAT3蛋白)表达水平高于对照组,miR-485-5p表达水平低于对照组;犀地凉血方组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于对照组,miR-485-5p表达水平高于对照组;犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组LncRNA NEAT1、STAT3表达水平低于过表达LncRNA NEAT1组,而miR-485-5p表达水平高于过表达LncRNA NEAT1组(均P<0.05)。CCK8法检测显示,药物干预24、48、72 h时,过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性明显高于对照组,犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞增殖活性高于犀地凉血方组,但二者均低于对照组(均P<0.05)。过表达LncRNA NEAT1组HaCaT细胞凋亡率(5.84%±0.28%)低于对照组(14.75%±0.83%,LSD-t=3.48,P=0.002),而犀地凉血方组(35.72%±3.62%)高于对照组(LSD-t=5.34,P=0.001);犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组细胞凋亡率(27.64%±2.82%)高于过表达LncRNA NEAT1组(LSD-t=9.06,P<0.001)。结论犀地凉血方能抑制HaCaT细胞增殖并促进其凋亡,作用机制与其干预LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络相关。

犀地凉血方对银屑病模型小鼠LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及相关炎症因子水平的影响

目的探讨犀地凉血方治疗银屑病的机制。方法将30只BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组及犀地凉血方低、中、高剂量组,每组5只。对照组小鼠背部脱毛区外涂凡士林,而其余各组小鼠则外涂咪喹莫特(IMQ)乳膏造模,并于造模当天给药干预。采用PASI评分对小鼠皮损情况进行评价,HE染色观察皮损病理形态学特征,IHC检测皮损组织中STAT3蛋白表达情况,qPCR及Western blot分别检测皮损组织中LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3基因及蛋白表达情况,ELISA法检测外周血中IL-17A、TNF-α、IL-22水平。结果模型组小鼠出现典型的银屑病样皮损及相应的组织病理学改变,而犀地凉血方各剂量组能明显减轻小鼠皮损处红斑、鳞屑及浸润程度,降低PASI评分,并减轻表皮增生、角化过度及淋巴细胞浸润等。与对照组相比,模型组小鼠皮损组织中LncRNA NEAT1、STAT3高表达而miR-485-5p低表达;犀地凉血方各剂量组中LncRNA NEAT1、STAT3表达降低,miR-485-5p表达升高。与对照组相比,模型组小鼠外周血中IL-17A、TNF-α、IL-22含量显著升高,而犀地凉血方各剂量组能明显降低三者水平。结论犀地凉血方能明显改善银屑病模型小鼠皮损及降低外周血中相关炎症因子水平,作用机制可能与其干预LncRNA NEAT1调控miR-485-5p、STAT3表达有关。

犀地凉血方治疗寻常型银屑病血热证59例临床观察

目的:观察犀地凉血方治疗寻常型银屑病血热证的临床疗效。方法:将124例寻常型银屑病血热证患者随机分为2组,治疗组59例(脱落3例)予以内服犀地凉血方治疗,对照组58例(脱落4例)予以消银颗粒冲服,2组疗程均为8周。比较2组综合疗效、皮损面积和严重性指数(PASI)评分、中医证候积分及不良反应。结果:总有效率治疗组为89.83%(53/59),高于对照组的75.87%(44/58),差异有统计学意义(P<0.05)。2组PASI评分及中医证候积分治疗前后组内比较及组间治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者均未见明显不良反应。结论:犀地凉血方治疗寻常型银屑病血热证疗效显著。