犬α干扰素基因的高效表达及其活性测定

以伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的犬外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,通过RT PCR的方法克隆扩增出犬α干扰素基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pBV220 并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的犬α干扰素基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌进行温敏诱导表达,表达产物经SDS PAGE分析,证明目的蛋白以包涵体的形式存在,大小约为19kDa。将表达产物变性、复性、透析、纯化处理后加入犬肾细胞上,用水泡性口炎病毒攻毒,测出重组的CaIFN α具有较高的抗病毒作用,生物活性达到5.11×106 ∪/ ,重组蛋白质的含量约为13 /L。

犬α干扰素基因的密码子优化及高效表达

根据密码子优化原则,利用重组PCR方法扩增犬α干扰素基因,将测序正确的基因分别克隆于三种原核表达载体pET22b（＋）、pET24b（＋）和pET28b（＋）中。再将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表明,目的蛋白主要以包涵体形式表达,大小约为25 kDa;其中,pET22b（＋）载体的表达量较高,约占总蛋白的50%-60%。