一例犬冠状病毒病和犬细小病毒病混合感染的诊断和治疗

犬冠状病毒病和犬细小病毒病,分别由犬冠状病毒和犬细小病毒引起,主要影响犬类的胃肠道健康。接诊一例主要症状为呕吐、腹泻、稀便,并有类似番茄酱有鱼腥味粪便的病犬。通过临床观察、实验室诊断和病原检测。结果显示,确诊该犬为犬细小病毒病和犬冠状病毒病混合感染,经过连续治疗8天,患犬康复。该病例为犬冠状病毒病和细小病毒病混合感染的诊断、治疗和护理提供参考。

一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的诊治

犬冠状病毒病是能引起犬发生不同程度的胃肠道炎症的常见传染病,2~4月的幼犬感染后发病率和死亡率最高。犬的贾第虫病是一类容易被幼龄犬感染的人畜共患肠道寄生虫病。本文介绍了一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的病例,对临床检查、诊断以及治疗进行详细阐述,为临床兽医师提供参考。

幼龄犬冠状病毒感染的治疗方法

犬冠状病毒感染是威胁幼犬健康的重要疾病之一,随着我国家庭养犬量的逐年上升,这一病毒感染的发生概率大幅度增长,主要介绍了犬冠状病毒的病原学特征与诊断方法,以5例感染犬冠状病毒的幼犬为例,探讨该病的发病表现、治疗方法,为有效防控与治疗犬冠状病毒感染提供参考。

犬冠状病毒病的诊断与防治

犬冠状病毒临床症状与细小病毒肠炎相似,导致犬出现呕吐、腹泻等症状,且症状反复出现,容易使犬脱水死亡,是一种胃肠道传染性疾病。全年龄段犬均可感染犬冠状病毒病,尤其是幼犬更易感染该疾病。幼犬先发病后传染其他年龄段犬。犬冠状病毒病的感染率居高不下,直接影响了犬的健康成长与繁殖,因此要加强犬冠状病毒病的诊断与防治研究,提升犬的成活率。

犬瘟热、犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的建立及应用

用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCVRNA模板进行联合RT PCR扩增 ,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带 ,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试验表明 ,该联合PCR能检测出 10 - 4倍稀释的CDV模板 (10 6 6 TCID50 / 0 1mL)和 10 - 3倍稀释的CCV模板 (10 5 9TCID50 /0 1mL)。通过对 7份临床发病犬病料的检测 ,其阳性检出率高于电镜负染检查。初步应用表明 ,此法具有高度敏感、特异、准确、快速等特点 ,适用于兽医临床对CDV。

检测犬冠状病毒中和抗体的方法与应用

在２４孔组织培养板上应用从美国引进的犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株ＮＬ１８与猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ），采用固定病毒（１００ＴＣＩＤ５０）稀释血清法建立了ＣＣＶ中和试验。运用该方法测定了１４２条群养犬和３５条散养犬的中和抗体水平，以１∶４作为阳性血清的判定标准，群养犬与散养犬的血清阳性率分别为１００％和８２９％；测定了母犬的血清与乳汁、所产仔犬及仔犬脐带血的ＣＣＶ抗体效价，证实母犬可以通过胎盘及乳汁将抗体转移给仔犬，吮食乳汁是仔犬获得母源抗体的主要途径。本试验从抗体水平上证实我国的犬已发生ＣＣＶ感染。

大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定

以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物,发现冠状病毒样粒子,超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明,DXMV核酸类型为RNA,对氯仿、乙醚敏感,可耐受1%胰蛋白酶的作用,具有一定的耐酸性和耐热性,可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖,无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明,DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片,可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物,可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明,该病毒为犬冠状病毒,大熊猫可被犬冠状病毒感染。

犬细小病毒和犬冠状病毒双重PCR方法的建立及应用

根据GenBank中犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)基因序列各设计了一对引物,经试验条件的优化,建立了检测CPV的PCR方法和CCV的RT-PCR方法,扩增目的片段大小分别为337bp和852bp。在此基础上建立了检测CPV和CCV双重PCR方法。该双重PCR方法能特异的扩增CPV和CCV,且分别扩增出1.08ng和3.2ng总核酸量。通过检测96份临床样品,对双重PCR方法和胶体金试纸条方法进行了对比试验。结果表明,建立的双重PCR方法快速、敏感、特异性高,可以用于CPV和CCV鉴别检测。

犬冠状病毒的分离鉴定及其纤突蛋白基因的克隆与序列比较

以犬胎原代细胞，采用同步接种、带毒传代和添加新细胞的方法，从１例腹泻犬脾脏和１例临床健康犬肠内容物中分离出２株犬冠状病毒（ＣＣＶＹＳ１，ＣＣＶＣＩ１）。该２株病毒可使ＣＲＦＫ细胞出现典型的细胞融合病变，与从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株形成的细胞病变相似；电镜负染和超薄切片观察，分离毒株细胞培养物中均含有典型的冠状病毒粒子，并形成胞浆内包涵体；经理化学、生物学鉴定，具有ＣＣＶ的特性；间接免疫荧光试验鉴定，证明为ＣＣＶ；动物回归试验证明，ＣＣＶＹＳ１毒力较强，ＣＣＶＣＩ１毒力较弱。利用ＲＴ－ＰＣＲ技术，分别扩增了ＣＣＶＮＬ－１８、ＣＣＶＹＳ１和ＣＣＶＣＩ１株纤突蛋白（Ｓ）主要功能区基因片段，经克隆、序列测定、计算机比较核苷酸和推导的氨基酸序列，结果为：（１）ＣＣＶＹＳ１和ＣＣＶＣＩ１与国外发表的Ｋ３７８等５株ＣＣＶ和ＣＣＶＭＬ－１８株的同源性为９１．７％～９９．４％和９２．０％～９９．４％，而与ＴＧＥＶ和ＦＩＰＶ的同源性为９０．２％和８８．０％～９０．０％；Ａｂ抗原亚位点与ＣＣＶ相同，不同于ＴＧＥＶ和ＦＩＰＶ，进一步证明本研究分离的病毒为ＣＣＶ；（２）ＣＣＶＹＳ１、ＣＣＶＣＩ１株与Ｋ３７８等ＣＣＶ强毒株同源?

ELISA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒

用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阳性１３例，后１３例包括在前１６例中。从８４例腹泻犬粪样中随机取３８例作ＣＣＶ、犬细小病毒（ＣＰＶ）双项检测，ＣＣＶ阳性１６例，ＣＰＶ阳性６例，ＣＣＶ、ＣＰＶ混合感染４例。结果显示，在南京地区流行的犬腹泻中，ＣＣＶ感染比例有超过ＣＰＶ的趋势。

联合PCR诊断大熊猫犬瘟热和犬冠状病毒的混合感染

采用一步法提取大熊猫肝脏细胞总RNA,经反转录,选择CDV和CCV联合PCR引物,一次性扩增出CDV和CCV目的片段,进一步证明了大熊猫同时感染了CDV和CCV。

从猝死症犬心肌分离出冠状病毒

应用电镜观察，在猝死犬的心肌中发现典型的冠状病毒粒子。用牛肾传代细胞（ＭＤＢＫ）分离培养该病毒获得成功，电镜负染色法跟踪观察，每一代细胞培养液中均观察到典型的冠状病毒粒子。其病毒形态呈圆形和椭圆形为主的多形性，直径７０～１６０ｎｍ，有囊膜，囊膜表面有间距较宽（长约２０ｎｍ）的突起，突起顶端膨大呈鼓槌样，负染色法观察时呈现花冠样结构。用第５代接毒培养的细胞作电镜超薄切片观察，在细胞质的空泡中发现有数量不等的典型冠状病毒粒子，即病毒包涵体。经鉴定为ＲＮＡ病毒，对乙醚敏感，３７℃７２ｈ可失去活性。在ｐＨ３的条件下。

犬冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

以犬冠状病毒(CCV)TN449株为对象,对CCV核衣壳蛋白(N蛋白)编码基因进行克隆和原核表达,通过使用纯化的重组N蛋白,建立了CCV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组N蛋白具有良好的CCV抗原反应性;经优化ELISA反应条件,确定重组N蛋白最佳包被浓度为1.0μg/m L、待检血清的最佳浓度为1∶100、阴阳性判定临界值为0.418;通过对比检测犬瘟热等多种犬病阳性血清,未发生交叉反应,证实该间接ELISA方法特异性好;用建立的间接ELISA方法对本室保存的50份CCV阳性血清和阴性血清进行复检,证实其符合率为100%。

一例泰迪犬冠状病毒感染伴发急性肺水肿的病理诊断报告

某宠物主人送检1只4月龄泰迪犬,初步确诊为冠状病毒感染,于输液过程中突然死亡。剖检可见整个肺脏呈深红色,肺叶边缘呈粉红色,切面深红色,支气管断端有大量红色液体渗出;剖开气管可见其浆膜面呈暗红色,腔内充满红色清亮液体;心脏左右心室扩张,质地柔软,心尖钝圆,呈心力衰竭心。对各个脏器取材进行病理组织学观察,主要病变表现为肺脏弥漫性淤血、水肿,心肌纤维局部溶解坏死。诊断该犬因感染冠状病毒后初次洗澡应激加重病情,并且随着大量静脉输液导致或加剧急性肺水肿发生,最终造成该犬急性死亡。对该病例进行了系统地病理剖检和组织病理学观察,为犬科动物和其他动物发生类似病症提供一定的参考。

犬冠状病毒分子生物学研究进展

犬冠状病毒 ( CCV )基因组为一 2 8～3 2 kb大小的单股正链 RNA,基因在病毒自身RNA聚合酶的存在下、以先导引物转录机制进行转录 ,不同的病毒基因组和亚基因组翻译产生除病毒依赖 RNA的 RNA聚合酶以外 ,还产生其它病毒的结构蛋白和非结构蛋白 ,其中有相对比较保守、参与病毒核衣壳形成、介导宿主细胞免疫的核衣壳蛋白 ( N ) ;在病毒出芽、组装和成熟中起重要作用的膜蛋白 ( M) ;能刺激机体产生中和抗体 ,且易变异的纤突蛋白 ( S) ,另外 S蛋白还决定着病毒血清型、感染力 ,同时通过识别 ,并与病毒宿主细胞受体相互作用决定病毒感染的宿主范围 ;参与病毒组装的小膜蛋白 ( E)和其它病毒蛋白。 CCV还可识别猫氨肽酶 N( f APN)

犬冠状病毒基因重组抗原间接ELISA检测方法的研究

以在E coli高效表达的犬冠状病毒核蛋白为抗原,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗犬IgG为二抗,建立了检测犬冠状病毒抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定出最佳反应条件为1μg 孔纯化的E coli表达的重组N蛋白抗原包被酶标板,用10%的兔血清进行封闭,以正常E coli裂解上清液稀释待检血清。结果表明:应用重组N蛋白作为诊断用抗原具有特异性强、稳定性高、成本较低等特点。

RT-PCR检测犬粪便中的冠状病毒

根据犬冠状病毒(caninecoronavirus, CCV) 的S基因序列, 用计算机设计并合成了1对引物P1、P2, 以此引物及以从美国进口的CCV疫苗的反转录产物为模板, 初步建立了检测CCV的RT PCR。将纯化的PCR产物成功地克隆到pGEM T easy载体中, 鉴定、测序并进行同源性分析。结果表明, 与1 71和UCD 1株同源性分别为91 5%和94 3%。该RT PCR能对疫苗中CCV及CCV参考株USCV B1的S基因进行特异性地扩增,长度为575bp, 对犬的其他病毒及CRFK细胞未能扩增出任何片段, 该RT PCR能检测出0 5μLCCV培养液/2g粪便。用建立的RT PCR在上海对50条犬粪便进行检测, 结果表明CCV阳性6例。本研究建立了检测犬粪便中的CCV的RT PCR, 能用于犬冠状病毒流行病学调查。

泛嗜性犬冠状病毒的研究进展

犬冠状病毒(CCV)是导致犬胃肠道疾病的一种常见病原体,目前CCV已确定了两个基因型,即CCV-Ⅰ和CCV-Ⅱ。一般情况下,CCV会导致犬轻重不一的腹泻,合并感染犬的其他病原体会造成致命性结局。然而,几年前报道出现了一种能够造成犬全身性疾病、致死率很高的变异CCV-Ⅱ强毒株,即泛嗜性犬冠状病毒(CB/05毒株)。到目前为止,已有多个国家报道出现泛嗜性CCV,其临床症状和病理变化与首次报道相似,目前中国还没有泛嗜性CCV报道。文章对泛嗜性CCV的研究进行了综述,并为我国防范该病毒提出建议。

大熊猫犬冠状病毒部分S基因的克隆与全S基因序列分析

从重庆某动物园死亡的大熊猫肝脏中分离到一株病毒,经鉴定为犬冠状病毒(命名为CCVDXMV)。本实验根据CCV K378和CCV Insavc-1株基因序列设计合成了普通PCR引物SF1-SR1和SF2-SR2,以及半套式引物SF3-SR3、SRI3、SFI3、SF4-SR4和SFI4,分段扩增了CCV DXMV株部分S基因,得到了368 bp、792 bp、737 bp、1 178 bp和985 bp 5个基因片段。将纯化的RCR产物分别克隆到pGEM-T载体中,通过筛选和鉴定,获得了5个阳性重组质粒。将重组质粒送生物公司测序,将测得的基因序列与先前测定的该株病毒部分S基因序列,拼接成全S基因序列,并与其它株CCV及TGEV HN2002和FIPV 79-1 146株的S基因序列进行分析比较,绘制进化树。结果表明,该株病毒与CCV K378株的同源性最高,达到99.4%;而与CCV 23/03株的同源性最低,为56.9%;与FIPV和TGEV分别有90.4%和82.1%的同源性。