一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的诊治

犬冠状病毒病是能引起犬发生不同程度的胃肠道炎症的常见传染病,2~4月的幼犬感染后发病率和死亡率最高。犬的贾第虫病是一类容易被幼龄犬感染的人畜共患肠道寄生虫病。本文介绍了一例幼犬冠状病毒合并贾第虫病的病例,对临床检查、诊断以及治疗进行详细阐述,为临床兽医师提供参考。

幼龄犬冠状病毒感染的治疗方法

犬冠状病毒感染是威胁幼犬健康的重要疾病之一,随着我国家庭养犬量的逐年上升,这一病毒感染的发生概率大幅度增长,主要介绍了犬冠状病毒的病原学特征与诊断方法,以5例感染犬冠状病毒的幼犬为例,探讨该病的发病表现、治疗方法,为有效防控与治疗犬冠状病毒感染提供参考。

犬猫冠状病毒病

由犬猫冠状病毒感染导致的犬猫冠状病毒病对宠物危害较大,不仅影响宠物行业的健康发展,还对人类健康和公共卫生安全构成潜在威胁。本文从病原学、临床症状与病理变化、诊断方法等方面分别对犬冠状病毒病和猫冠状病毒病进行介绍,并对犬猫冠状病毒病的防治进行概述,以期为犬猫养殖者、饲养者及研究人员提供参考。

犬瘟热病毒与犬冠状病毒双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立鉴别检测犬瘟热病毒(CDV)和犬冠状病毒(CCoV)的方法,本研究采用PCR方法分别扩增CDV N基因和CCoV S基因,并克隆至pMD18-T载体中构建重组质粒pCDV-N、pCCoV-S,均经PCR和测序鉴定后测定浓度作为质粒标准品。同时针对CDV N基因和CCoV S基因设计特异性引物和TaqMan探针,采用方阵试验对各反应条件的优化,建立了同时检测这两种病毒的双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。利用10倍倍比稀释的质粒标准品按照该方法检测,建立标准曲线,结果显示,两个重组质粒标准品均与各自的Ct值具有良好的线性关系。采用该方法分别检测CDV、CCoV、犬细小病毒、犬传染性喉气管炎病毒2型、犬副流感病毒,评估该方法的特异性;将两种质粒标准品分别10倍倍比稀释并等体积混合后,取108~101稀释度的质粒混合物作为模板,采用该方法检测,评估该方法的敏感性;将两种质粒标准品10倍倍比稀释并等体积混合后,分别取107、105、103稀释度的质粒标准品混合物采用该方法检测,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能特异性扩增CDV和CCoV,与犬的其他病毒均无交叉反应,特异性较强;对CDV质粒标准品的检测限为5.0×103拷贝/μL,对CCoV质粒标准品的检测限为4.93×103拷贝/μL,敏感性较高;组内和组间的变异系数均小于3%,重复性较好。利用本实验建立的双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法和已报道的CCoV RT-PCR及国标规定的CDV RT-PCR方法同时检测采集的100份临床腹泻犬样品,结果显示,共检出35份阳性样品,其中,CDV的阳性检出率为16%(16/100),CCoV的阳性检出率为19%(19/100),阴性样品65份,与CCoV和CDV参考方法的检测结果均一致。本研究建立的CDV和CCoV双重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可在40 min内完成检测,且准确、快速、敏感,为CDV和CCoV临床大量样品的快速和特异性鉴别检测提供了有效技术手段。

1例幼龄哈士奇犬冠状病毒感染的诊治

2月龄哈士奇犬频繁出现精神沉郁、厌食、腹泻、鼻镜干燥、眼角有少量分泌物及粪便腥臭等症状,初步怀疑为犬传染病。通过临床检查及实验室检测分析,确诊该犬为犬冠状病毒(CCV)感染。通过支持疗法和对症疗法对患犬进行治疗,5 d后患犬康复出院。文章对该病例的治疗情况进行阐述,以期为相关疾病的临床诊疗提供参考。

犬冠状病毒S1蛋白特异性小分子抗体Fab的制备

为表达犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)S1蛋白,制备其特异性小分子抗体Fab,为CCV的防治提供新材料。采用PCR扩增CCV S 1基因全长及其截短片段,分别克隆到原核表达载体pET28a或pGEX4T-1中,转到BL21(DE3)或Rosetta(DE3)感受态细胞构建重组表达菌株;用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定分析重组蛋白;纯化蛋白分别与ISA71AVG或ISA201VG佐剂配伍乳化后制备免疫原,免疫蛋鸡,用聚乙二醇(PEG)沉淀法提取得到CCV S1蛋白的卵黄抗体,通过Western blot检测抗体滴度,用胃蛋白酶水解卵黄抗体制备小分子抗体Fab。结果显示,S1蛋白全长无表达,CCV S1-a和CCV S1-b分子量分别为79 ku和68 ku。在免疫后第35天2种佐剂组的卵黄抗体滴度可达1∶128000。制备小分子抗体Fab最佳酶切条件为卵黄抗体与胃蛋白酶混合质量比20∶1、pH值4.1、37℃酶切8 h。完整的IgY可以与CCV呈特异性反应,胃蛋白酶处理后制备的小分子抗体Fab可以有效阻断CCV的感染性。综上,本研究成功表达了CCV S1的2个截短片段蛋白,制备了卵黄抗体及其小分子抗体Fab,为进一步开展犬冠状病毒病的诊断和防治技术研究奠定了基础。

一例犬冠状病毒病的病例报告

犬冠状病毒病是由犬冠状病毒引起的一种临床上以呕吐、腹泻、脱水及易复发为特性的高度接触性传染病。该病对幼犬危害严重,如诊断和治疗不及时,容易导致犬只死亡。就一例犬冠状病毒病的临床诊断及治疗方案进行总结,为提高该病的诊断及治疗水平提供参考。

一例犬冠状病毒与毛滴虫混合感染的诊治

犬冠状病毒病是一种以急性胃肠炎为主要症状的高度接触性传染病,幼犬的发病率和死亡率最高,防控该病最有效的措施是定期接种疫苗。犬毛滴虫病是毛滴虫寄生在犬肠道内的一种原虫性疾病,主要引起犬出现腹泻症状,主要预防措施是犬在幼年适宜时期进行全面体检和按时驱虫,值得关注的是寄生于犬的毛滴虫虫种可能均具有一定的人兽共患传播潜力。现就一例犬冠状病毒与毛滴虫混合感染病例的诊断及综合治疗进行总结,为该类疾病的诊治提供参考。

犬细小病毒、犬冠状病毒和犬轮状病毒三重PCR方法的建立及初步应用

犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)、犬冠状病毒(Canine coronavirus, CCoV)和犬轮状病毒(Canine rotavirus, CRV)是引起犬腹泻的主要病原.3种病原引发的疾病临床症状相似,难以诊断,因此需要建立可以高效鉴别这3种病原的分子检测方法.通过对引物浓度、退火温度的条件优化,建立了可同时检测CPV、CCoV和CRV 3种病毒的三重PCR方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验.结果显示,该方法可特异性扩增CPV VP2基因(253 bp)、CCoV ORF-1b基因(379 bp)和CRV VP6基因(852 bp)的目的片段,未检出其他相关病原;对CPV、CCoV和CRV的最低检测浓度分别为6.44×10^(-1)pg/μL、8.72×10^(-1)pg/μL和8.35×10^(-1)pg/μL,方法的灵敏度高;重复性试验显示该方法具有良好的稳定性.应用建立的三重PCR方法对2019~2020年成都市区采集的135份犬腹泻粪便样本进行了检测,并与单重PCR检测结果相比较.结果显示CPV、CCoV和CRV的检出率分别为16.30%、20.74%和4.44%;总感染率为51.11%(65/135)),其中多病原混合感染率为20.00%(13/65),检测结果与单重PCR相符.建立的三重PCR方法,可以用于相关病原的临床检测和流行病学调查.

北京五区犬猫肠道冠状病毒感染的监测与分析

【目的】调查北京地区犬猫肠道冠状病毒的感染情况,探索犬猫冠状病毒感染与年龄、季节的相关性,为犬猫冠状病毒病的防治提供参考。【方法】根据各病原基因保守区域序列设计特异性引物,采用PCR或RT-PCR方法,对采集的402份犬猫肛拭子(犬样本192份、猫样本210份)分别进行犬猫冠状病毒检测,并进行犬猫细小病毒、犬星状病毒(CaAstV)的混合感染检测。通过卡方检验对犬冠状病毒(CCoV)和猫冠状病毒(FCoV)感染与季节的相关性进行统计学分析,通过回归统计对CCoV、FCoV感染率与年龄的相关性进行分析,根据临床样本信息统计北京五区的犬猫免疫情况。【结果】192例犬样本中CCoV阳性率为44.27%(85/192),CCoV、犬细小病毒(CPV)混合感染率为34.12%(29/85),未检测到CaAstV阳性样本。210例猫样本中FCoV阳性率为45.71%(96/210),FCoV、猫泛白细胞减少症病毒(FPV)混合感染率为60.42%(58/96)。192例犬样本中,健康犬CCoV阳性率为19.39%(19/98),患病犬CCoV阳性率为70.21%(66/94)。210例猫样本中,健康猫FCoV阳性率为24.41%(31/127),患病猫FCoV阳性率为78.31%(65/83)。CCoV在冬季的检出率最高,为42.35%(36/85);FCoV四季检出率相近,冬季检出率相对较高,为29.17%(28/85)。在不同年龄段中,犬CCoV阳性率为28.6%~87.8%,其中0~3月龄犬CCoV阳性率高达87.8%,为CCoV主要发病群体;猫FCoV阳性率为36.4%~53.8%,各年龄段间无显著差异(P>0.05)。【结论】北京五区犬猫肠道冠状病毒的感染率较高,且在冬季更易流行,各年龄段犬猫CCoV、FCoV的检出率无显著差异,临床多出现冠状病毒与细小病毒混合感染的情况。

犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。

江苏省常州地区犬冠状病毒病的流行病学调查分析

本研究采集常州地区3家宠物医院106例犬粪便和肛拭子,经胶体金和RT-PCR鉴定共检出45例犬冠状病毒(CCV)阳性病例,阳性检出率达到42.45%。对发病月份以及发病月龄进行统计学分析发现,1-3月龄幼犬属于CCV高发群体,阳性检出率可达44.44%;发病月份主要集中在冬春两季(10月~次年3月),发病率合计86.67%。感染犬常表现肠道症状,临床主要可见以腹泻为主。未经接种疫苗或者疫苗接种程序不完全的犬感染CCV概率远高于接种完成的犬。调查结果表明,常州地区宠物犬对犬冠状病毒病的感染率较高,需引起足够的重视。

一例犬冠状病毒Ⅰ型与犬腺病毒Ⅱ型混合感染的实验室诊断

本试验对1例2月龄中华田园犬进行病原诊断,该病犬主要症状为腹泻、血便并伴随流涕、打喷嚏、咳嗽等。采集其鼻拭子、肛门拭子,利用PCR方法分别对7种常见的犬腹泻病毒及呼吸道病毒进行检测,结果显示该病例为犬冠状病毒Ⅰ型与犬腺病毒Ⅱ型的混合感染。待病犬进入濒死期立即安乐死并进行剖检,组织观察可见肺部出现明显的出血斑,盲肠、直肠、结肠有明显的出血点。本试验为犬病毒性腹泻、呼吸道疾病的病毒诊断以及犬冠状病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型自然感染引起的组织病变提供了参考。

犬冠状病毒病的诊断与防治

犬冠状病毒是一种引起犬不同程度胃肠道炎症的传染性病原,犬感染犬冠状病毒后主要出现呕吐、腹泻等临床症状,所有年龄犬中幼犬最易感染。近年来犬冠状病毒病的感染率居高不下,已成为影响宠物犬及试验犬集约化养殖的重要传染病之一。文章从犬冠状病毒的流行病学、致病机制、临床症状、诊断方法及防治措施等方面进行综述,以期为犬冠状病毒的防治及研究提供参考。

犬冠状病毒病的流行病学、症状、诊断与防治

犬冠状病毒在世界范围内多有流行,其潜伏期1~8d。本病传染迅速,数日内可蔓延全群。且随着日龄的增长,死亡率降低,是威胁犬类健康的重大传染性疾病之一。本文探讨犬冠状病毒的流行病学、临床症状、诊断及有效防治。旨在为犬冠状病毒的综合防治提供一些参考思路。

犬冠状病毒病的诊断与防治

犬冠状病毒病(CCV)是近年来常见的一种犬科动物感染的高度接触性传染病,该病毒主要存在于病犬的胃肠道内,可使犬发生程度不同的胃肠道症状,少数犬会出现呼吸道症状。本病以冬季多发,病犬是主要的传染源。该病一旦发生,可快速传播,数日内即可感染全群。通常幼犬最先发病,因此幼犬及小型犬种症状最严重,病情可能会急性发作,2 d内即可导致死亡。

犬瘟热、犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的建立及应用

用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCVRNA模板进行联合RT PCR扩增 ,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带 ,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试验表明 ,该联合PCR能检测出 10 - 4倍稀释的CDV模板 (10 6 6 TCID50 / 0 1mL)和 10 - 3倍稀释的CCV模板 (10 5 9TCID50 /0 1mL)。通过对 7份临床发病犬病料的检测 ,其阳性检出率高于电镜负染检查。初步应用表明 ,此法具有高度敏感、特异、准确、快速等特点 ,适用于兽医临床对CDV。

检测犬冠状病毒中和抗体的方法与应用

在２４孔组织培养板上应用从美国引进的犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株ＮＬ１８与猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ），采用固定病毒（１００ＴＣＩＤ５０）稀释血清法建立了ＣＣＶ中和试验。运用该方法测定了１４２条群养犬和３５条散养犬的中和抗体水平，以１∶４作为阳性血清的判定标准，群养犬与散养犬的血清阳性率分别为１００％和８２９％；测定了母犬的血清与乳汁、所产仔犬及仔犬脐带血的ＣＣＶ抗体效价，证实母犬可以通过胎盘及乳汁将抗体转移给仔犬，吮食乳汁是仔犬获得母源抗体的主要途径。本试验从抗体水平上证实我国的犬已发生ＣＣＶ感染。

大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定

以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物,发现冠状病毒样粒子,超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明,DXMV核酸类型为RNA,对氯仿、乙醚敏感,可耐受1%胰蛋白酶的作用,具有一定的耐酸性和耐热性,可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖,无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明,DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片,可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物,可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明,该病毒为犬冠状病毒,大熊猫可被犬冠状病毒感染。

犬细小病毒和犬冠状病毒双重PCR方法的建立及应用

根据GenBank中犬细小病毒(CPV)和犬冠状病毒(CCV)基因序列各设计了一对引物,经试验条件的优化,建立了检测CPV的PCR方法和CCV的RT-PCR方法,扩增目的片段大小分别为337bp和852bp。在此基础上建立了检测CPV和CCV双重PCR方法。该双重PCR方法能特异的扩增CPV和CCV,且分别扩增出1.08ng和3.2ng总核酸量。通过检测96份临床样品,对双重PCR方法和胶体金试纸条方法进行了对比试验。结果表明,建立的双重PCR方法快速、敏感、特异性高,可以用于CPV和CCV鉴别检测。