DNA甲基化抑制因子5-AzaDc对犬卵母细胞体外培养核成熟的影响

本实验旨在研究DNA甲基化酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza Dc)对犬卵母细胞体外成熟的影响。研究比较添加不同浓度5-Aza Dc(1、2μmol/L)处理不同时间(1、2、48、72 h)观察的犬卵母细胞成熟情况,并通过DNA甲基化的免疫荧光染色,观察5-Aza Dc对DNA甲基化在犬卵母细胞中的分布情况及趋势变化。结果表明:添加2μmol/L的5-Aza Dc处理48 h,所有卵母细胞均脱离GV期,并且与对照组相比显著提高进入GVBD-MⅡ期的比率(28.3%vs.87.1%);免疫荧光染色结果显示,成熟卵母细胞的DNA甲基化染色位点主要集中在细胞核内,并未在细胞质中出现,DNA甲基化程度显著降低,并使染色质凝集。综上所述,添加2μmol/L的5-Aza Dc处理48 h可以通过抑制DNA甲基化水平提高犬卵母细胞体外成熟率,短时间的抑制DNA甲基化水平对犬卵母细胞的减数分裂恢复有积极促进作用。

C型钠钛对犬卵母细胞体外成熟效果的影响

本实验采用两步成熟培养法研究C型钠肽(CNP)对犬卵母细胞体外成熟培养的影响,为利用CNP提高犬卵母细胞体外成熟效率提供依据。以犬卵母细胞体外成熟的常规培养法作为对照,实验组利用CNP添加浓度为50、100、500、1000 nmol/L的成熟培养液,分别培养6、12、18、24 h,完成犬卵母细胞第一步成熟培养,并继续在常规成熟培养液中培养72 h后,进行卵母细胞核成熟进程的染色鉴定,筛选适宜的CNP浓度和CNP处理时间。结果显示:CNP组卵培养12 h时母细胞存活率显著高于对照组;100 nmol/L CNP组MII期卵母细胞比率显著高于50 nmol/L CNP组,极显著高于500、1000 nmol/L CNP组;CNP处理组培养12 h的成熟率为26.90%,显著高于对照组,且极显著高于CNP预处理6、18 h和24 h成熟率。综上表明,犬卵母细胞在添加100 nmol/L CNP的成熟培养液中预处理12 h,可提高犬卵母细胞的体外成熟效果。

体外培养犬卵母细胞内脂质含量及透明带变化研究

在哺乳动物卵母细胞中,普遍存在着脂质,一般被看作是营养物质贮存形式。对卵母细胞内脂质含量的研究,有助于探讨卵母细胞物质代谢特点,从而提高体外培养成熟率。本试验对犬卵母细胞进行体外培养,采用组织化学技术,经苏丹Ⅳ染色剂对体外培养犬卵母细胞内脂质进行染色并测量不同阶段透明带的厚度。结果表明,犬卵母细胞体外成熟培养后,细胞内脂质含量减少,72 h后较明显。透明带在培养48 h增厚,到达72 h明显,较其它时间的差异显著。