犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因的原核表达

克隆了犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因并构建原核表达系统,并对表达产物进行了初步的血清学鉴定。利用PCR技术扩增犬布氏杆菌RM6/66参考株Omp31基因,然后将其克隆到pGEMT-easy载体上进行测序。测序正确后,将该基因插入到pET-32a载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达融合蛋白,Western blot分析融合蛋白的免疫反应性。结果构建了犬布氏杆菌Omp31基因的原核表达载体pET-Omp31,并且在大肠杆菌中成功表达融合蛋白,经Western Blot鉴定该蛋白能被犬布氏杆菌阳性血清所识别。犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31的表达成功,为犬布氏杆菌病血清学诊断方法的建立提供了基础资料。

犬布氏杆菌Cu/Zn-SOD基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为检测犬布氏杆菌(Brucella canis)重组Cu/Zn-SOD蛋白的抗原性,本研究通过PCR方法扩增B.canis的Cu/Zn-SOD基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-SOD。将该质粒转化受体菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约20 ku,以可溶性形式存在。经western blot分析表明,表达的重组蛋白可以与B.canis阳性血清发生特异性反应。表达的重组蛋白经纯化后,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,western blot分析表明制备的多克隆抗体可以与重组Cu/Zn-SOD蛋白发生特异性反应,表明Cu/Zn-SOD蛋白具有良好的抗原性。

我国部分地区犬布氏杆菌感染流行病学调查

为了了解我国部分省市犬感染布氏杆菌的情况。用血清样品用虎红平板凝集试验(RBT)和OIE标准间接酶标试验(i-ELISA)初筛,初筛阳性样品用试管凝集试验(SAT)复核,对SAT判定为阳性血清所对应的脾脏或新鲜全血进行布氏杆菌分离与培养。结果显示,4 750份犬血清中60份为阳性(29份检测到粗糙型布氏杆菌抗体:牧区2份、农区4份、城区23份;31份检测到光滑型布氏杆菌抗体:牧区19份、农区2份、城区10份),个体阳性率为1.26%(牧区6.69%,农区1.53%,城区0.84%);3份脾脏和1份新鲜全血经接种培养后,从1份全血中分离到1株菌,经AMOS-PCR方法鉴定为犬布氏杆菌。试验结果表明,调查的部分省市均有犬感染布氏杆菌,牧区个体阳性率最高、农区居中、城区最低,且存在粗糙型和光滑型布氏杆菌混合感染的现象。

成都地区犬布氏杆菌病的血清学调查及实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为了解成都地区犬布氏杆菌病的流行情况并建立一种快速、可靠、特异、灵敏的布氏杆菌的检测方法,对来自宠物医院、狗场等的860份犬血清样品进行了血清学检测,并针对布氏杆菌属保守基因设计1对特异性引物并建立了一种基于SYBR Green的荧光定量PCR检测方法。血清学检测结果显示,成都地区存在犬布氏杆菌病的总阳性率为1.51%,其中流浪狗阳性率最高,其次是狗场,宠物医院犬布氏杆菌病的阳性率最低。本研究建立的荧光定量PCR具有较高的特异性,标准曲线相关系数为0.996,扩增效率为91%,能够用于未知样品的定量检测。用建立的荧光定量PCR检测了33份虎红平板凝集试验(RBPT)阳性血清,结果,其中10份呈阳性;检测了30份随机抽取的阴性血清,其中2份呈阳性。结论:本研究建立的荧光定量PCR与RBPT的检测结果有差异,两种方法均检测到成都地区犬布氏杆菌病。

犬常见的几种传染病流行趋势及防控

目前,犬常见传染病有狂犬病、犬细小病毒感染、犬瘟热、犬钩端螺旋体、犬立克次氏体、犬窝咳等,不同病的流行趋势及防控措施均不相同,现做简单介绍。一、狂犬病狂犬病是一种由狂犬病毒引起的急性传染病,主要通过咬伤进行传播,含有狂犬病毒的唾液接触到伤口或破损粘膜会引起发病。