肉制品中犬源性成分PCR检测方法的建立

为建立一种检测肉制品中犬源性成分的PCR检测方法,用于生、熟犬肉的鉴定,采用PCR方法特异性扩增生、熟犬肉基因组DNA,并采用PCR方法检测46份保定市的犬肉制品。所检犬源性成分在213bp处出现预期的DNA目的片段,扩增片段经限制性内切酶HphⅠ酶切分析确认,所得179bp和34bp片段与预期目标一致。应用该引物均可扩增出犬的目的DNA片段,而对马、山羊、绵羊、驴、兔和猪等15种动物肉的DNA扩增则呈阴性。其检测灵敏度达到4.56pg DNA。利用本法对46份犬肉制品进行检测,检出率为100%。试验表明建立的方法快速简便,且具有较高的特异性和敏感性,用于生、熟犬肉的鉴定是可行的。

实时荧光聚合酶链式反应技术测定肉制品中犬源性成分

根据犬线粒体脱氧核糖核酸(DNA)序列设计了特异性引物和探针,应用实时荧光聚合酶链式反应技术,检测了肉制品中犬源性成分的含量。所提取的17种犬的DNA样品扩增后均能得到典型S形扩增曲线,而所选取的14种其他动物源的DNA样品均未呈现同样的扩增曲线;同一模板所得Ct值(n=7)的相对标准偏差为1.2%。这说明所设计的条件具有较好的特异性和重复性。犬源性组分DNA的质量分数在0.000 01%~10%内与其Ct值之间呈线性关系,检测的灵敏度为0.1pg,不同加工方法所得肉制品的扩增结果之间无显著差异。