犬精液冷冻保存技术的研究进展

国内犬精液冷冻保存技术起步较晚,尚处在研究探索阶段,犬精液冷冻保存技术还不成熟,冷冻精液受胎率、窝产仔数与自然交配相比还有一定的差距,而且品种、地域、采精时间的不同,精液冷冻效果也不一致。从犬精液的冷冻保存方法、冷冻保护剂、解冻方法三个方面,综述了近年来国内外的犬精液冷冻研究成果,为探索更加有效的犬精液冷冻技术,提高犬精液冷冻效果提供参考。

影响犬精液冷冻效果的因素分析

精液冷冻是影响犬人工授精技术的关键环节,由于冷冻效果不稳定,冻后精子活力差,造成人工授精成功率低,平均窝产仔数少,影响到该技术在国内的广泛使用。犬精液冷冻是一项系统的技术,影响犬精液冷冻效果的因素也是多方面的。综述了精液冷冻保护剂、质膜保护剂、抗氧化保护剂、冷冻程序和冷冻方法等因素对犬精液冷冻效果的影响。

五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。

二甲双胍对犬精液冷冻保存效果的影响

本实验旨在研究二甲双胍对犬冷冻-解冻后精液品质的改善效果,用含有不同浓度(0、25、50、100μmol/L)二甲双胍的Tris-卵黄稀释液冷冻保存犬精液,解冻后测定精子活力、质膜完整率、顶体完整率、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位状态及腺苷三磷酸(ATP)含量等指标。结果显示:二甲双胍添加组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率、ATP含量、处于高线粒体膜电位状态精子占比均高于对照组(P<0.05),而ROS、MDA含量低于对照组(P<0.05);50μmol/L二甲双胍组的精子活力、质膜完整率和顶体完整率分别为42.62%、52.99%和54.91%,均高于其他组(P<0.05);50μmol/L二甲双胍组精液中的ROS、MDA含量低于其他各组(P<0.05),同时该浓度下的精子处于高线粒体膜电位状态的占比多于其他各组(P<0.05),ATP含量也高于其他各组(P<0.05)。综上,在犬冷冻稀释液中添加二甲双胍可以改善犬冷冻-解冻后的精液品质,对提高精子的抗氧化能力及能量代谢都有显著效果,其中最佳添加浓度为50μmol/L。

两种不同冷冻方法对犬冷冻精液品质的影响

本试验以德国牧羊犬的精液为材料,采用液氮熏蒸法和细管炸熏法两种冷冻方式进行细管冷冻试验,用精子活力、顶体完整率和畸形率,作为判定精子冷冻品质的指标,确定两种冷冻方法对犬冷冻精液效果的影响。结果表明:(1)液氮熏蒸法冷冻后的精子活力为0.30±0.12,细管炸熏法冷冻后的精子活力0.38±0.08,细管炸熏法优于液氮熏蒸法,且差异显著(P<0.05);(2)液氮熏蒸法冷冻后精子顶体完整率42.20±3.51,畸形率25.60±7.03,细管炸熏法冷冻后精子顶体完整率43.50±4.64,畸形率24.50±5.94,细管炸熏法稍优于液氮熏蒸法,差异不显著(P>0.05)。

不同浓度咖啡因对犬精液冷冻效果的影响

为提高犬冷冻精液的冷冻效果,试验向Tris-卵黄基础稀释液中添加不同浓度的咖啡因;结果表明:当所添加的咖啡因浓度为5.0mmoL/L时,精子活率为0.33±0.04(P<0.01),显著>对照组。添加浓度为12.5mmoL/L时,精子活率仅为0.23±0.04(P<0.01),显著<对照组。浓度为5.0mmoL/L时精子畸形率最低,为0.174±0.036(P<0.01),显著<对照组。但添加咖啡因的各组跟对照组在顶体完整率上并无显著差异。