犬腺病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的CAV Hexon基因序列和CPV VP2基因序列,设计了2对特异性引物和2条Taq Man探针。经过条件优化建立了检测CAV和CPV的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以含有CAV Hexon基因和CPV VP2基因的重组质粒标准品为模板绘制标准曲线,其相关系数(R^2)均大于0.990,CAV和CPV荧光定量PCR均具有良好的线性关系。特异性试验结果显示,该方法仅对CAV-I型、CAV-II型和CPV检测结果为阳性,而对犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒检测结果均为阴性,表明其特异性强。该方法的敏感性检测结果显示其检测下限为10拷贝/μL。重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性好。利用普通PCR方法与本实验建立的方法分别对感染CAV(10份)和CPV(27份)的犬模拟病料样品进行检测,两种方法对CAV和CPV检测的符合率分别可达100%和96.30%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于CAV和CPV的临床检测。

黄芪多糖对史宾格犬疫苗的免疫效果

在成年史宾格犬免疫接种英特威犬四联疫苗时,同时以0.1 mL/kg的剂量给犬注射黄芪多糖注射液,免疫前1 d、免疫后7 d、免疫后14 d静脉采血,采用荧光定量检测仪检测犬瘟热病毒(CDV)和犬腺病毒(CAV)的抗体滴度。将中药活性物质黄芪多糖引入到犬的疫苗免疫程序中,探讨黄芪多糖对犬疫苗免疫效果的影响。结果表明,免疫接种后7、14 d试验组犬瘟热病毒IgG抗体滴度和犬腺病毒IgG抗体滴度显著高于对照组。证实黄芪多糖注射液能促进犬机体CDV和CAV抗体的产生,提高CDV和CAV的抗体水平。