犬钩虫特异性抗原基因的克隆与表达

目的 寻找可诱发宿主保护性免疫力的犬钩虫特异性抗原。 方法 用犬钩蚴免疫获得保护性免疫力的家犬血清 ,免疫筛选犬钩虫 期幼虫 λZAP c DNA文库 ,阳性克隆基因经测序 ,在质粒 PUC18、PET2 8中进行一系列亚克隆 ,重组 p ET2 8C质粒诱导表达并对表达产物进行 SDS- PAGE和 Western blotting分析。 结果 从 c DNA文库中筛获 5个相同的阳性克隆 ,携带的犬钩虫抗原 (Ac Ag)外源基因片段在原核体系 (p ET2 8C)中表达分子量为 4 3k Da的融合蛋白。 Western blotting分析该重组蛋白可与筛库的犬血清反应。 结论 Ac Ag为新的犬钩虫特异性抗原 ,其基因与美丽纤杆线虫 (Caenorhabditis elegans)基因 unc- 89同源性为 35 %。该抗原诱发宿主保护性免疫力及作为疫苗的潜力值得进一步研究。