犬防御素-3基因的真核表达及活性检测

为了在毕赤酵母X-33中表达犬防御素-3,并检测其抗菌活性,根据毕赤酵母密码子偏好性,人工合成犬防御素-3基因,构建重组质粒PpiczɑC-CBD-3,线性化后电转至毕赤酵母菌X-33,经抗性筛选,阳性克隆用10mL/L甲醇诱导表达,表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,并用琼脂空穴扩散法测定其抗菌活性。表达产物经Tricine-SDS-PAGE检测,在分子质量8.5ku左右有目的条带,与预期大小一致,表达的犬防御素经琼脂空穴扩散法检测显示出一定的抗菌活性。研究表明,犬防御素-3在毕赤酵母中成功分泌表达,为进一步研究奠定了基础。

基于cBD3的衍生肽对犬皮肤源多药耐药菌的抑菌活性

[目的]筛选犬皮肤源多药耐药菌,同时基于犬防御素设计衍生肽并探究其抗菌作用。[方法]通过K-B药敏纸片法对临床分离的菌株进行筛选,随后以犬β-防御素3(cBD3)的氨基酸序列为模板,采用氨基酸替换的方式对序列进行设计,选取优化肽cBD3-ABU进行化学合成,利用微量肉汤稀释法检测cBD3-ABU对多药耐药菌的抑菌活性。[结果]筛选获得8株犬皮肤源多药耐药菌;通过固相合成法获得纯度达95.61%的cBD3-ABU;cBD3对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、伪中间型葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为32、64、64、128μg/mL,高浓度cBD3-ABU对犬皮肤源大肠杆菌、表皮葡萄球菌、伪中间型葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为96.02%、81.85%、87.25%、98.91%。[结论]cBD3-ABU在体外具有良好的抑菌活性,具有进一步开发为治疗性药物的潜力。