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N-糖链切除对重组抗狂犬病毒单克隆抗体中和活性的影响 被引量:1
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作者 吕若芸 王辉 +4 位作者 陈忱 张世雄 张晓楠 曹晨华 魏敬双 《生物技术进展》 2016年第4期277-282,共6页
重组抗狂犬病毒单克隆抗体是一种全人源的抗病毒感染单抗,主要用于狂犬病毒暴露后预防。采用糖苷酶处理2种重组抗狂犬病毒单克隆抗体Mab1、Mab2水解切除N-糖链,通过糖染色和毛细管电泳检测确定N-糖链酶解程度,利用快速荧光灶抑制试验检... 重组抗狂犬病毒单克隆抗体是一种全人源的抗病毒感染单抗,主要用于狂犬病毒暴露后预防。采用糖苷酶处理2种重组抗狂犬病毒单克隆抗体Mab1、Mab2水解切除N-糖链,通过糖染色和毛细管电泳检测确定N-糖链酶解程度,利用快速荧光灶抑制试验检测其中和活性,分析N-糖链切除对该单抗中和活性的影响。结果显示,N-糖链切除后抗体中和活性无明显变化。说明N-糖链对这两株抗狂犬病毒单抗的体外中和活性不是必须的结构成分。 展开更多
关键词 重组抗狂犬病毒单克隆抗体 N-糖链切除 毛细管电泳 中和活性
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定量检测猕猴血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体间接ELISA法的建立 被引量:1
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作者 刘晓雷 侯禹男 +6 位作者 陈知航 单成启 车津晶 刘运龙 宋艳霞 苗小红 程远国 《生物技术通讯》 CAS 2008年第3期407-409,共3页
目的:建立定量检测血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体(HuMabs)NM57的间接ELISA法,为药代动力学研究提供一种简单快速的方法。方法:采用狂犬病毒糖蛋白包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测HuMabs NM57的间接ELISA... 目的:建立定量检测血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体(HuMabs)NM57的间接ELISA法,为药代动力学研究提供一种简单快速的方法。方法:采用狂犬病毒糖蛋白包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测HuMabs NM57的间接ELISA法,并对其特异性、灵敏度、精密度及准确度进行检测。结果:间接ELISA法检测HuMabs NM57的灵敏度为5ng/mL,组内及组间精密度分别为2.6%~6.0%、8.5%~11.3%。结论:建立了灵敏度高、特异性强的检测HuMabs NM57的间接ELISA法,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中HuMabs NM57的检测。 展开更多
关键词 重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体 间接ELISA法 定量检测
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小鼠抗狂犬病毒单克隆抗体轻链重链可变区基因的cDNA克隆
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作者 叶群瑞 陈伯权 +2 位作者 吴美英 黄华樑 孙黎 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期73-74,共2页
狂犬病是一种全球性病毒性疾病,病死率高,目前尚无有效疗法。用单克隆抗体(McAb)治疗病毒病可能有一定疗效,但是大多数McAb来源于小鼠或大鼠细胞,用来治疗人,必然会因种间差异带来变态反应。为克服这种障碍,将McAb技术与重组DNA技术结合... 狂犬病是一种全球性病毒性疾病,病死率高,目前尚无有效疗法。用单克隆抗体(McAb)治疗病毒病可能有一定疗效,但是大多数McAb来源于小鼠或大鼠细胞,用来治疗人,必然会因种间差异带来变态反应。为克服这种障碍,将McAb技术与重组DNA技术结合,可能为利用McAb治疗病毒病开拓新的前景。 展开更多
关键词 狂犬病毒单克隆抗体 CDNA克隆
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狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞灌流培养中细胞特异性灌流速率的研究
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作者 宋兰兰 安晨 +5 位作者 汪艳艳 郭岚 张祺 唐金舟 马树奇 陈继军 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第2期41-45,共5页
目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CS... 目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CSPR2:0.03 nL/(细胞·d)、CSPR3:0.04 nL/(细胞·d)、CSPR4:0.05 nL/(细胞·d)、CSPR5:0.06 nL/(细胞·d),每组3个重复]的15个TPP管中按100万个/mL的初始密度接种相同的CHO种子细胞;摇床中,以转速225 r/min、CO_(2)浓度5.0%、湿度80%和温度37℃的条件培养细胞;以后每天取细胞样品,分别检测活细胞密度(viable cell density, VCD)、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度和渗透压。接种3 d起,每天分别从CSPR 1~5的各管中,按0.02~0.06 nL/(细胞·d)的CSPR计算所需要更换的细胞悬液体积,将各管中的细胞悬液离心,取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养液重悬细胞后,继续培养。如细胞悬液中的葡萄糖质量浓度≤3 g/L时,用300 g/L的葡萄糖补至8 g/L。CHO细胞培养约19 d时,结束实验。根据CHO细胞生长、细胞代谢、抗体蛋白滴度(titer)、收获液总体积和抗体蛋白总收量,确定适合本细胞生长和表达的CSPR。结果 在CSPR 1~2[0.02~0.03 nL/(细胞·d)]的条件下灌流培养时,最高VCD分别为1 059万个/mL、1 298万个/mL,细胞活率在培养中后期下降较快,抗体蛋白总收量分别为98 mg和112 mg。CSPR3~5[0.04~0.06 nL/(细胞·d)]条件下的最高VCD分别为1 422万个/mL、1 523万个/mL和1538万个/mL,细胞活率维持较好,抗体蛋白总收量分别为119 mg、120 mg和107 mg。结论 当CSPR为0.04~0.05 nL/(细胞·d)时,细胞生长和抗体蛋白表达情况较好,为适合本细胞株灌流培养的CSPR。 展开更多
关键词 狂犬病毒单克隆抗体 CHO细胞 灌流培养 细胞特异性灌流速率 细胞生长 蛋白表达
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抗狂犬病毒单克隆抗体中残留宿主细胞蛋白ELISA定量检测方法的验证
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作者 赵晓瑞 叶星 +4 位作者 南建军 郭岚 徐玺丰 王倩 安晨 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第6期328-332,共5页
目的验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法。方法使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒,测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP,并验证该方法的专属性... 目的验证抗狂犬病毒单克隆抗体(单抗)中残留宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法。方法使用商用中国仓鼠卵巢细胞HCP残留ELISA检测试剂盒,测定2种针对不同表位的抗狂犬病毒单抗原液中的残留HCP,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性、耐用性、检测限及定量限。结果2种抗狂犬病毒单抗发酵液稀释10000倍后检出的HCP含量分别为31.42和19.36 ng/ml。制剂溶液、HEK293F和E.coli培养上清液中未检出HCP。3种浓度的HCP加标供试品的加标回收率均在80%~120%之间。3种浓度的HCP加标供试品重复性检测结果及中间精密度检测结果相对标准偏差均<20%。分别对3次残余HCP检测绘制四参数标准曲线,决定系数均>0.990。在一定范围内改变孵育时间和显色时间,HCP测定结果在合理的偏差范围内。检测限和定量限分别为2和3 ng/ml。结论抗狂犬病毒单抗中HCP残留量的ELISA定量检测方法专属性、准确度、精密度、线性及耐用性良好。 展开更多
关键词 狂犬病毒单克隆抗体 宿主细胞蛋白 酶联免疫吸附测定
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人源抗狂犬病毒单克隆抗体载体的构建及烟草转基因研究 被引量:6
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作者 陈超 张铁钢 《生物学通报》 北大核心 2011年第2期46-49,共4页
为了构建高效表达人源抗狂犬病毒单克隆抗体载体,首先对人源抗狂犬病毒抗体(SO57)重链和轻链编码基因的密码子进行偏好性改造,添加增强外源基因表达的控制元件,然后分别与花椰菜花叶病毒35s启动子和木薯叶脉花叶病毒启动子融合,连接至... 为了构建高效表达人源抗狂犬病毒单克隆抗体载体,首先对人源抗狂犬病毒抗体(SO57)重链和轻链编码基因的密码子进行偏好性改造,添加增强外源基因表达的控制元件,然后分别与花椰菜花叶病毒35s启动子和木薯叶脉花叶病毒启动子融合,连接至植物表达载体pBI121上,然后将构建好的载体转入农杆菌LB4404,采用叶盘法转化烟草叶片。用分子生物学技术,对6株转基因烟草进行检测,电泳检测结果均为阳性。用酶联接免疫吸附剂法,检测6株烟草叶片中人源抗狂犬病毒单克隆抗体的表达。结果表明,6株烟草均成功表达人源抗狂犬病毒抗体。 展开更多
关键词 人源抗狂犬病毒单克隆抗体载体 烟草转基因病毒
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Preparation and Identification of Anti-rabies Virus Monoclonal Antibodies 被引量:1
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作者 Wen-juan Wang Xiong Li +4 位作者 Li-HU Shan Lei Cao Peng-cheng Yu Qing Tang Guo-dong Liang 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第3期172-178,共7页
To provide a foundation for the development of rapid and specific methods for the diagnosis of rabies virus infection, anti-rabies virus monoclonal antibodies were prepared and rabies virus nucleoprotein and human rab... To provide a foundation for the development of rapid and specific methods for the diagnosis of rabies virus infection, anti-rabies virus monoclonal antibodies were prepared and rabies virus nucleoprotein and human rabies virus vaccine strain (PV strain) were used as immunogens to immunize 6-8 week old female BALB/c mice. Spleen cells and SP2/0 myeloma cells were fused according to conventional methods: the monoclonal cell strains obtained were selected using the indirect immunofluorescence test; this was followed by preparation of monoclonal antibody ascitic fluid; and finally, systematic identification of subclass, specificity and sensitivity was carried out. Two high potency and specific monoclonal antibodies against rabies virus were obtained and named 3B12 and 4A12, with ascitic fluid titers of 1:8000 and 1:10000, respectively. Both belonged to the IgG2a subclass. These strains secrete potent, stable and specific anti-rabies virus monoclonal antibodies, which makes them well suited for the development of rabies diagnosis reagents. 展开更多
关键词 Rabies virus Monoclonal antibodies SPECIFICITY Detection
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利用表面等离子体共振技术检测重组抗体NM57免疫原性 被引量:4
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作者 常亮 刘晓志 +7 位作者 赵伟 刘艳玲 董向峰 陈雪静 李立敏 蒋艳 高健 魏敬双 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期532-535,共4页
随着生物技术药物的大量研发,药物免疫原性评价成为阐明药物临床安全性和有效性的关键因素,建立稳定可靠的评价体系成为了研究热点。由于具有实时、连续监测等优势,表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)技术已被广泛用于生... 随着生物技术药物的大量研发,药物免疫原性评价成为阐明药物临床安全性和有效性的关键因素,建立稳定可靠的评价体系成为了研究热点。由于具有实时、连续监测等优势,表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)技术已被广泛用于生物药物免疫原性的评价。本研究中应用该技术对重组抗狂犬病毒人源单克隆抗体NM57Ⅰ期临床实验阶段接受注射的48名志愿者进行抗药物抗体(anti-drug antibody,ADA)检测。结果表明,该检测方法可达到抗体药物免疫原性检测的基本要求。 展开更多
关键词 免疫原性 表面等离子体共振 重组狂犬病毒人源单克隆抗体
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