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不同狂犬病毒株抗原反应性的比较研究 被引量:2
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作者 周志军 朱华松 +4 位作者 李健 秦丽 李军 孙文 黄贵彪 《微生物学免疫学进展》 2005年第1期6-10,共5页
应用ELISA法对 285份免疫前及健康人血清和 742份以不同毒株制备的狂犬病疫苗 (aG株、CaG株、CTN株,PM株)全程免疫后人群的血清标本进行抗狂犬病毒抗体的检测。结果显示CTN株病毒抗原对不同毒株狂犬病疫苗免疫后血清的抗体阳性检出率均... 应用ELISA法对 285份免疫前及健康人血清和 742份以不同毒株制备的狂犬病疫苗 (aG株、CaG株、CTN株,PM株)全程免疫后人群的血清标本进行抗狂犬病毒抗体的检测。结果显示CTN株病毒抗原对不同毒株狂犬病疫苗免疫后血清的抗体阳性检出率均能达到 90%以上,且与SNT效价的相关性较好;而aG株抗原对除aG株以外其它毒株狂犬病疫苗免疫后血清的阳性检出率仅为 50%左右。因此不同毒株狂犬病毒抗原的反应性存在明显差异,选用纯度高、活性好的CTN株病毒或两株病毒以不同比例混合作为ELISA检测用抗原,测定疫苗免疫后人群的抗体水平,可获得满意的结果。 展开更多
关键词 狂犬病毒株 抗原反应性 比较研究 狂犬病 疫苗 抗体检测 ELISA
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不同狂犬病毒株在地鼠肾细胞上培养的病毒滴度与免疫原性比较
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作者 鲁宏 蒋茨蕾 +1 位作者 梁名践 潘丽静 《微生物学免疫学进展》 2002年第3期20-22,共3页
三个狂犬病毒株 ,分别经地鼠肾细胞培养 ,将其抗原含量 ,病毒滴度和免疫原性进行比较。结果显示 ,三个病毒株的抗原含量有差异 ,但差异无显著性 ;CTN V10 M3 的毒力最高 ,CTN BHK3 的毒力最低 ,aG株的毒力虽然居中 ,但免疫原性最好 。
关键词 狂犬病毒株 地鼠 肾细胞培养 病毒滴度 免疫原性 比较
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含绿色荧光蛋白基因和猪瘟E_2基因的伪狂犬病毒Bartha-K_(61)株TK基因缺失转移载体的构建 被引量:11
3
作者 范伟兴 张雪莲 +2 位作者 魏荣 赵宏坤 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期3-8,共6页
提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部... 提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因 狂犬病 狂犬病毒Bartha-K61 TK基因 EGFP基因 猪瘟病毒E2基因 基因缺失 转移载体 疫苗
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抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:4
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作者 汪招雄 何启盖 +2 位作者 黄红亮 刘正飞 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期222-225,共4页
将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1... 将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病毒Ea 单克隆抗体 间接免疫荧光试验
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猪伪狂犬病毒鲁A株TK基因的序列测定及其结构功能与进化分析 被引量:3
5
作者 范伟兴 张雪莲 +1 位作者 赵宏坤 陈溥言 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期249-258,共10页
对猪伪狂犬病毒鲁A株 (PRVLA株 )TK基因进行了克隆和序列测定 ,并分析比较了该序列与PRVNIA - 3株、Ea株、SH以及HSV - 1和VZV的同源性 ,结果表明 :在全长 10 4 8bp的DNA序列中 ,包括着一个 96 3bp的开放阅读框 (ORF) ,可编码 32 0个氯... 对猪伪狂犬病毒鲁A株 (PRVLA株 )TK基因进行了克隆和序列测定 ,并分析比较了该序列与PRVNIA - 3株、Ea株、SH以及HSV - 1和VZV的同源性 ,结果表明 :在全长 10 4 8bp的DNA序列中 ,包括着一个 96 3bp的开放阅读框 (ORF) ,可编码 32 0个氯基酸组成的多肽 ;在整个TK基因的ORF内 ,PRVLA株与PRVNIA - 3株、PRVEa株、PRVSH株、HSV - 1、VZV的TK基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98 9%、99 5 %、99 3%、36 4 %、39 1% ,氨基酸的同源性分别为 98 4 %、99 7%、98 7%、36 6 %、37 2 %。PRVLA株TK具有疱疹病毒胸苷激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列。将PRV -LATK、人类和小鼠的胸苷酸激酶、人类脱氧胞苷激酶、人类腺苷酸激酶的对应于这两个亚结构域的氨基酸用DNAStar分析的进化树表明 ,疱疹病毒的TK与人类和小鼠的胸苷酸激酶的亲缘关系比与人类脱氧胞嘧啶激酶的亲缘关系更近 。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒鲁A TK基因 序列测定 结构 功能 进化分析
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伪狂犬病毒粤A株gE基因真核表达质粒的构建 被引量:2
6
作者 吴德铭 黄毓茂 +2 位作者 罗满林 刘镇明 邬苏晓 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期69-72,共4页
根据伪狂犬病毒(PRV)NIA 3和Rice株的gE基因序列,设计了1对含有起始密码子和HindⅢ、BamHⅠ酶切位点的引物,以PRV粤A毒株(PRV YA)基因组为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增获得gE基因片段,将这一片段克隆至PMD18 T载体中,获得重组质粒PMD... 根据伪狂犬病毒(PRV)NIA 3和Rice株的gE基因序列,设计了1对含有起始密码子和HindⅢ、BamHⅠ酶切位点的引物,以PRV粤A毒株(PRV YA)基因组为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增获得gE基因片段,将这一片段克隆至PMD18 T载体中,获得重组质粒PMD18 gE;用HindⅢ和BamHⅠ酶切该重组质粒,回收得到含有以上2个酶切位点粘端的gE基因,将此基因片段克隆至相同酶切、回收后的pcDNA3 1(+)真核表达载体中,获得真核表达重组质粒pcDNA3 1 gE,经PCR鉴定、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性. 展开更多
关键词 狂犬病毒粤A GE基因 真核表达 质粒构建 BarnHI酶切位点 序列测定
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病毒感染复数对狂犬病毒PM株增殖的影响 被引量:6
7
作者 陈智 孙艳 +4 位作者 牟建超 刘莉娜 刘宇 刘辉 刘杰 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期30-33,共4页
目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒... 目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒后细胞的形态变化;培养3-5d后,第一次收获病毒液;更换培养液继续培养3-4d后,进行第二次收获。采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病毒滴度,通过NIH法测定灭活病毒液的效价。结果当MOI为0.05-0.10时,细胞圆缩30%-40%,细胞能维持较好的生长形态,可收获病毒,病毒收获液的滴度较高(〉5.0 lgLD50/mL),且灭活后病毒液的效价较高(〉4.0IU/mL)。结论确定狂犬病毒PM株在人二倍体2BS细胞增殖的适宜MOI,为人用狂犬病疫苗生产工艺的优化提供了依据。 展开更多
关键词 狂犬病毒(PM) 2BS细胞 感染复数 病毒滴度 效价
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猪伪狂犬病毒变异株HN1201 gB蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:3
8
作者 程璇 付朋飞 +3 位作者 杜永坤 褚贝贝 杨国宇 王江 《河南农业科学》 北大核心 2020年第10期137-142,共6页
为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体,以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠,取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合,制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光... 为获得用于伪狂犬病毒(PRV)临床检测和实验室研究所需的PRV gB特异性抗体,以PRV变异病毒株PRV HN1201免疫小鼠,取免疫后小鼠脾脏细胞与SP/20细胞融合,制备抗PRV gB蛋白的单克隆抗体。经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)筛选出1株稳定分泌PRV gB蛋白抗体的单克隆细胞系,经鉴定该细胞系所分泌抗体为IgG1亚型,腹水纯化抗体的IFA效价为2^-11;细胞培养上清和腹水纯化抗体用于Western blot的最佳稀释比分别为1∶50和1∶5000;杂交瘤细胞诱导小鼠腹水的中和效价为1∶25。IPMA、IFA及Western blot试验结果显示,制备的单克隆抗体能特异性识别PRV gB蛋白。 展开更多
关键词 狂犬病毒变异HN1201 gB蛋白 单克隆抗体 Western blot 免疫过氧化物酶单层细胞试验 间接免疫荧光试验
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一株表达EGFP基因的重组伪狂犬病毒的构建及其复制稳定性分析
9
作者 杨明珠 陈晓春 +2 位作者 张媛 王秀丽 李俊平 《中国兽药杂志》 2022年第5期1-9,共9页
为探寻伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因缺失株rPRV-bc-8基因组UL4-UL3基因间区域是否可作为外源基因的插入位点,在实验室已构建的含有增强型绿色荧光蛋白(Enhance Green fluorescent protein,EGFP)基因的转移质粒pMD-US6+7-EGFP... 为探寻伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因缺失株rPRV-bc-8基因组UL4-UL3基因间区域是否可作为外源基因的插入位点,在实验室已构建的含有增强型绿色荧光蛋白(Enhance Green fluorescent protein,EGFP)基因的转移质粒pMD-US6+7-EGFP-US2的基础上,通过DNA体外分子克隆技术将UL4序列替换左同源臂US6+7序列,UL3序列替换右同源臂US2序列,并将PolyA引入转移质粒,得到转移质粒pMD-UL4-EGFP-UL3。利用脂质体转染法将转移质粒pMD-UL4-EGFP-UL3与亲本毒rPRV-bc-8共转染PK-15细胞,经蚀斑纯化成功得到一株能够稳定表达EGFP基因的重组伪狂犬病毒rPRV-UL4-EGFP-UL3。通过倒置荧光显微镜观察以及PCR鉴定确定EGFP基因已成功插入到伪狂犬基因组的UL4-UL3之间,并通过细胞传代试验分析得到重组毒的遗传稳定性良好。通过体外增殖试验分析得到重组病毒rPRV-UL4-EGFP-UL3在细胞内的增殖速度较快,接种后12 h内滴度始终高于亲本毒rPRV-bc-8,接种后40 h达到最高滴度108.3 TCID50/mL,与亲本毒的最高滴度接近,但是最高滴度的出现时间晚于亲本毒,并且在达到平台期后病毒滴度下降的比亲本毒快。通过对病毒培养液中荧光蛋白浓度进行测定,结果显示在接种后56 h时荧光蛋白浓度达到最高值4793.9 ng/mL,之后进入平台期。综上结果表明构建的重组病毒具有良好的遗传稳定性及体外复制能力,并且外源基因EGFP在此位点具有良好的表达效果,为进一步相关重组病毒的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病毒基因缺失 同源重组 重组病毒 增强型绿色荧光蛋白
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狂犬病毒毒株及抗原性研究进展 被引量:3
10
作者 古漓 王树声 吴泰才 《疾病监测》 CAS 2000年第2期72-74,共3页
关键词 狂犬病毒 抗原性 狂犬病
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狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:12
11
作者 高明华 夏咸柱 薛琳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期31-34,共4页
目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)... 目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间。通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法。结果扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h。重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8%,并能与RV阳性血清发生特异性反应。用表达的狂犬病重组N蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法。结论成功表达了狂犬病核蛋白,用表达的狂犬病核蛋白建立的间接ELISA方法可以用于RV抗体的检测。 展开更多
关键词 狂犬病毒ERA 核蛋白基因 原核表达 间接ELISA
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猪伪狂犬病毒蛋白激酶基因的序列测定与分析 被引量:4
12
作者 潘兹书 张楚瑜 +2 位作者 丁建华 罗满林 雷亮 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期38-43,共6页
对伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB株 )蛋白激酶 (PK)基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与PRVNIA 3株、Ka株以及HSV 1、VZVPK基因的同源性。结果显示 ,在测定全长 1312bp的DNA序列中 ,包括着一个10 0 2核苷酸的开放读框 ,可编码 334... 对伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB株 )蛋白激酶 (PK)基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与PRVNIA 3株、Ka株以及HSV 1、VZVPK基因的同源性。结果显示 ,在测定全长 1312bp的DNA序列中 ,包括着一个10 0 2核苷酸的开放读框 ,可编码 334个氨基酸组成的多肽。PRV HB株PK与PRV NIA3、PRV Ka、HSV 1、VZVPK基因比较 ,核苷酸的同源性分别为 98 7%、97 5 %、5 0 7%和 42 0 % ;基因编码区氨基酸序列的同源性分别为98 2 %、95 8%、37 7%和 37 2 %。PRVPK具有细胞丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列。 展开更多
关键词 狂犬病毒湖北 蛋白激酶 核苷酸序列
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应用Cre/loxp系统构建含有BAC序列的重组伪狂犬病毒 被引量:3
13
作者 王涛 童武 +8 位作者 叶超 于之清 梁超 李国新 高飞 单同领 于海 郑浩 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第2期22-28,共7页
近年来我国出现伪狂犬病毒变异株,导致猪伪狂犬病重新爆发流行。为研究伪狂犬病毒变异株毒力增强与抗原变异的分子机制,需要建立该病毒的感染性克隆操作系统。本研究通过构建转移载体pTEGGF,利用同源重组将含有增强型绿色荧光蛋白(enhan... 近年来我国出现伪狂犬病毒变异株,导致猪伪狂犬病重新爆发流行。为研究伪狂犬病毒变异株毒力增强与抗原变异的分子机制,需要建立该病毒的感染性克隆操作系统。本研究通过构建转移载体pTEGGF,利用同源重组将含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)表达框及两翼各一个loxp位点,插入到伪狂犬病毒变异株PRV JS-2012 gG编码区下游,获得重组病毒rJS2012-gG/EGFP。将表达Cre重组酶的质粒pcDNA3.1-Cre转染BHK-21细胞,再感染rJS2012-gG/EGFP,筛选获得含有单一loxp位点的重组病毒rJS2012-gG/loxp。将rJS2012-gG/loxp基因组、含有EGFP标记基因的BAC载体p Belo BAC11-EGFP和pcDNA3.1-cre共转染BHK-21,获得含有BAC序列插入的重组病毒rJS2012-BAC。一步生长曲线与空斑试验显示,重组病毒rJS2012-BAC在体外生长略慢于亲本病毒。本研究成功构建了含有BAC载体的重组伪狂犬病毒,为进一步建立伪狂犬病毒变异株的感染性克隆操作系统,开展变异株的分子病原学研究打下良好基础。 展开更多
关键词 狂犬病毒变异 细菌人工染色体 CRE/LOXP系统
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抗猪伪狂犬病毒免疫球蛋白(Ig)研制试验与检测结果 被引量:1
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作者 李六金 贾满民 +4 位作者 陈慧茹 胡淑贤 押宗保 吴耀南 赵永康 《河北畜牧兽医》 2003年第2期21-23,共3页
本试验用配有佐剂的伪狂犬病毒抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪伪狂犬病毒Ig,其中对提纯工艺所涉及的PH值,温度,硫酸铵浓度等进行探索比较,继之对单位体积内的蛋白浓度,酶标抗体效价和稀释度... 本试验用配有佐剂的伪狂犬病毒抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种关中毛驴,用两次盐析法沉淀提取抗猪伪狂犬病毒Ig,其中对提纯工艺所涉及的PH值,温度,硫酸铵浓度等进行探索比较,继之对单位体积内的蛋白浓度,酶标抗体效价和稀释度进行了标化,同时对质量检测进行了平行性分析,本实验以陕西关中毛驴作为免疫反应供浆动物;研制用于预防和治疗抗猪伪狂犬病免疫球蛋白(Ig)生物制剂获得理想结果犤1-4犦。经8省(区)、市试用后,深受用户和兽医防疫部门的一致好评和欢迎。 展开更多
关键词 狂犬病毒 免疫球蛋白 IG 狂犬病毒XIAN—W1弱毒 毛驴 散发性传染病 提纯 免疫程序
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不同狂犬病毒抗原免疫马匹的效价比较
15
作者 薛向光 柳春红 +3 位作者 岳强 林洪娟 徐光磊 任志霞 《预防医学论坛》 2008年第12期1145-1147,共3页
[目的]对不同狂犬病毒抗原免疫马匹的效价进行比较。[方法]采用狂犬病毒aG株羊脑抗原和vero细胞培养的CTN株抗原分别免疫马匹,采用小鼠法分别进行病毒毒力和中和抗体效价检测。[结果]狂犬病毒aG株羊脑抗原毒力为6.0~7.5 logLD50/ml,免... [目的]对不同狂犬病毒抗原免疫马匹的效价进行比较。[方法]采用狂犬病毒aG株羊脑抗原和vero细胞培养的CTN株抗原分别免疫马匹,采用小鼠法分别进行病毒毒力和中和抗体效价检测。[结果]狂犬病毒aG株羊脑抗原毒力为6.0~7.5 logLD50/ml,免疫马匹后的中和抗体效价平均可达1∶30000以上;vero细胞培养的CTN株抗原毒力为4.5~6.0 logLD50/ml,免疫马匹后的中和抗体效价平均可达1∶10000以上,但狂犬病毒aG株羊脑抗原免疫马匹易引起变态反应,马匹淘汰率高。[结论]狂犬病毒aG株羊脑抗原与vero细胞培养的CTN株抗原相比,前者毒力强,免疫效价高,但易引起变态反应。 展开更多
关键词 狂犬病毒aG羊脑抗原 vero细胞培养的CTN抗原 佐剂
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狂犬病病毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株的适应传代 被引量:3
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作者 何丽芳 陈敏 +8 位作者 张益丽 任正勇 胡超 高显专 赵振鑫 马万 李兵 白梅 马波 《微生物学免疫学进展》 2014年第5期1-4,共4页
目的:建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞,连续传代,检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Wal... 目的:建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞,连续传代,检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Walvax-2细胞,通过连续带毒传代至第7代,病毒滴度可达6.78lgLD50/mL,并在第10~15代内滴度维持在7.0lgLD50/mL以上,15~30代滴度稳定在7.0lgLD50/mL左右。以15代适应毒株CTN-1V-HDCP15制备的疫苗原液,各项指标均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)的要求,疫苗效力在6.0IU/剂以上。结论所获人胚肺二倍体细胞Walvax-2株传代适应狂犬病毒固定毒株CTN-1V-HDC可用于人用狂犬病疫苗的生产开发。 展开更多
关键词 狂犬病毒CTN-1V 人胚肺二倍体细胞 适应 传代 狂犬病疫苗
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检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用 被引量:21
17
作者 汪招雄 何启盖 +3 位作者 刘丽娜 刘正飞 黄红亮 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期220-225,共6页
以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏... 以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。 展开更多
关键词 双抗体夹心间接ELISA 单克隆抗体 猪伪狂犬病毒Ea
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人用Vero细胞狂犬病疫苗生产毒种的建立 被引量:4
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作者 董关木 刘增顺 +5 位作者 郑海发 吴小红 刘景华 曲效敏 严子林 俞永新 《医学研究杂志》 2006年第5期45-46,共2页
关键词 VERO细胞 狂犬病毒株 人用疫苗 毒种 疫苗生产 中国药品生物制品检定所 国家食品药品监督管理局 自筹资金 免疫原性 卫生部
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猪伪狂犬病毒TK缺失株PRV/TK^-的构建及其生物学特性 被引量:11
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作者 陈瑞爱 邵定勇 韩静芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期577-582,共6页
为了构建伪狂犬病毒容A株(PRV-Ra)TK基因缺失重组病毒,本研究利用PCR从PRV-Ra株基因组分别扩增TK基因两侧的序列LTK和RTK,将LTK和RTK克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-TK/HEK。进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到pUC19... 为了构建伪狂犬病毒容A株(PRV-Ra)TK基因缺失重组病毒,本研究利用PCR从PRV-Ra株基因组分别扩增TK基因两侧的序列LTK和RTK,将LTK和RTK克隆到pUC19载体,构建转移质粒pUC19-TK/HEK。进一步将增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达盒克隆到pUC19-TK/HEK质粒中,构建转移质粒pUC19-TK/EGFP。用pUC19-TK/EGFP与PRV-Ra株基因组共转染BHK21细胞,通过噬斑纯化获得重组病毒PRV/TK-/EGFP;用pUC19-TK/HEK与PRV/TK-/EGFP病毒基因组共转染BHK21细胞,噬斑纯化获得不含EGFP基因的重组病毒PRV/TK-。该重组病毒在体外传30代后仍其有良好的遗传稳定性;PRV/TK-体外增殖速度、对家兔的毒力以及对仔猪的安全性和抗体反应性研究表明,重组毒株与原始株(PRV-Ra)在BHK21上具有相似的增殖规律;PRV/TK-对家兔的毒力比PRV-Ra下降了10000倍;以105.0TCID50PRV/TK-免疫小猪后4周,体内产生的平均中和抗体水平达101.9,略高于对照疫苗产生的抗体水平(101.8)。本试验为PRV基因功能的研究及PRV基因缺失苗的研发提供了技术平台。 展开更多
关键词 狂犬病毒容A TK缺失 生物学特性
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