不同人抗狂犬病病毒抗体检测方法分析

目的以快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测结果为金标准,评价酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assy,ELISA)、胶体金检测方法(colloidal gold,CG)检测人血清样品中抗狂犬病病毒抗体的效能。方法对182份接种过狂犬病疫苗者的血清样品分别采用RFFIT、ELISA、CG检测抗狂犬病病毒抗体,比较四种检测方法结果的一致性、敏感性与特异性。结果两种ELISA、CG与RFFIT检测结果的一致率都高于92.00%,万泰ELISA的敏感性较高,亿特ELISA的特异性好,一致性检验Kappa值亿特ELISA最好。结论用CG进行初筛,用ELISA进一步检测,必要时用RFFIT法进行确诊,不同检测方法进行联合使用,具有较好的经济社会价值。

两种联合免疫方式下血清狂犬病病毒抗体结果比较

目的比较头面部和手足末端暴露者在两种不同的联合免疫方式下,血清狂犬病病毒抗体的差异性。方法选择2010年4月至2013年6月期间来江西省赣州市疾病预防控制中心就诊的头面部、手足末端Ⅲ级暴露并同意使用狂犬疫苗和狂犬病人免疫球蛋白(Human rabies immunoglobulin,HRIG)联合免疫的患者,随机分为实验组和对照组,实验组采用HRIG分三步给药的新注射法,随后按0、7、21程序2-1-1四针法接种狂犬疫苗;对照组采用常规法注射HRIG,随后按0、3、7、14、28程序五针法接种疫苗。分别在两组患者首针疫苗后第7d(D7)和第45d(D45)采血清,酶联免疫法测狂犬病病毒IgG抗体,比较两组抗体阳性率差异。结果实验组D7的狂犬病病毒IgG抗体阳性率明显高于对照组(P<0.01),而D45两组无明显差异(P>0.05)。结论新联合免疫方式能提高免疫早期的抗体水平并保持后期抗体不受影响。

假病毒中和试验对狂犬病毒中和抗体效价的检测效能分析

目的:组织不同的实验室分析假病毒中和法(Pseudo Virus-based Neutralization Assay,PBNA)对不同样品的狂犬病病毒中和抗体水平的检测能力,并比较其与经典的快速免疫荧光灶抑制试验(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test,RFFIT)以及小鼠中和试验法(Mouse Neutralization Test,MNT)的相关性。方法:共9家实验室,分别采用PBNA、RFFIT以及MNT法对6份样品进行狂犬病病毒中和抗体检测,每个实验室进行3~5次重复实验。采用配对t检验及Pearson相关系数对3种检测方法的结果进行统计学分析。结果:PBNA与RFFIT、PBNA与MNT、RFFIT与MNT Pearson相关系数分别为0.985、0.988和0.974,抗体几何平均滴度进行t检验,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:3种方法重复检测6份样品的定量结果具有高度的相关性,PBNA法可作为《中华人民共和国药典》方法RFFIT、MNT的一种替代或补充方法,用于人用狂犬病疫苗临床血清、狂犬病人免疫球蛋白及抗狂犬病血清的狂犬病病毒中和抗体效价检测。

间接酶联免疫吸附试验检测免疫人群血清狂犬病病毒抗体的效能评价

目的用金标准快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibtion test, RFFIT)评价间接ELISA检测免疫人群血清狂犬病病毒抗体的效能。方法收集在广西壮族自治区疾病预防控制中心门诊部首次全程接种狂犬病疫苗的个体血清和加强免疫血清共314份,用RFFIT和间接ELISA两种方法对其进行狂犬病病毒抗体检测。结果 314份血清标本用两种方法检测结果一致率为81.85%,与RFFIT比较,间接ELISA检出阳性结果符合率为83.50%,阳性预计值为96.88%,阴性符合率为52.94%,阴性预计值为15.52%,经McNemar检验两种方法检出结果差异有统计学意义(P<0.05);进一步从RFFIT值分析得出87.76%的假阴性标本都存在于RFFIT值<3.0 IU/ml的标本中,从免疫后时间分析得出93.88%的假阴性标本都存在于免后1~3年标本中,而对于高RFFIT值的血清标本特别是全程免疫后42 d和加强免疫的高几何平均滴度的血清标本,间接ELISA结果假阴性率很低(3.26%及以下),两种方法检测结果一致率高达95.70%及以上,经McNemar检验两种方法检出结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论间接ELISA可以用在狂犬病疫苗全程免疫后抗体阳转率的普查,用于个人免疫效果的评价方面需谨慎。

ELISA抗体检测试剂盒在狂犬病毒特免血浆筛选中的初步应用

用SepharoseCL6B纯化灭活的狂犬疫苗原液作为包被抗原,对试剂盒生产工艺进行优化,根据ELISA相对效价和SNT效价的正相关性,设计出能满足大规模狂犬病毒特异性免疫血浆筛选需要的合理可靠的收浆方案。

人源抗狂犬病毒二硫键稳定抗体在大肠杆菌中的融合表达

目的在大肠杆菌pMAL-P2x系统中表达anti-rabiesMBP-ScdsFv融合蛋白,酶切获得目的蛋白ScdsFv,进行纯化、鉴定及简单活性分析。方法利用DNA重组技术,将全长的ScdsFv蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-p2x中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliER2566,IPTG诱导表达。表达产物经Xa酶切后,经Ni柱、AmyloseResin亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot对其进行鉴定,ELISA检测其结合活性。结果成功地构建了重组质粒pMAL-ScdsFv,经诱导表达、蛋白酶切、亲和纯化后获得目的蛋白。ELISA检测其具有抗原特异结合活性,其热稳定性有显著提高。结论抗狂犬病毒ScdsFv蛋白具有良好的结合活性和生物学活性稳定性,可作为候选分子用于狂犬病的防治研究。

治疗性人源抗狂犬病毒抗体研究进展

狂犬病是由狂犬病毒（rabies virus,RV）引起的人兽共患疾病,发病后死亡率几乎达百分之百。狂犬病毒属弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒属（Lyssavirus）,基因组编码五种结构蛋白,其中由G基因编码的糖蛋白,是病毒与宿主细胞结合的配体,能诱导机体产生中和抗体,与病毒的毒力、致病性密切相关。

狂犬病毒抗体ELISA检测试剂盒的改进研究

为了提高狂犬病毒抗体检测的灵敏度和特异性 ,采用狂犬病毒单克隆抗体包被酶标板 ,再分别加入重组的狂犬病毒糖蛋白或细胞培养抗原做固相层的方法 (抗体捕捉法 ) ,用传统的间接ELISA法做对照 ,按常规方法检测抗狂犬病毒抗体。结果显示 ,抗体捕捉法的非特异性反应低于间接法 ,而灵敏度达到 0 .5IU水平 ,高于间接法。在80 0份临床标本检测中 ,检出率明显高于间接法。用 15份阳性血清作小鼠中和试验 ,并和抗体捕捉ELISA法比较具有高度的一致性。试验结果充分表明 ,该方法优于传统的ELISA间接法。

WISTAR PM／WI 38－1503－3M抗原检测狂犬病毒抗体可行性研究

ＷＩＳＴＡＲＰＭ／ＷＩ３８－１５０３－３Ｍ抗原检测狂犬病毒抗体可行性研究陈阳，王惠榕，于恩庶我们应用酶免疫斑点法（ＩＤＴ），采用Ｇａ和ＰＭ两种抗原对注射国产狂犬病疫苗的人血清狂犬病毒抗体检测，对这两种不同株抗原进行了比较，认为ＰＭ抗原检测人血清狂犬病...

N-糖链切除对重组抗狂犬病毒单克隆抗体中和活性的影响

重组抗狂犬病毒单克隆抗体是一种全人源的抗病毒感染单抗,主要用于狂犬病毒暴露后预防。采用糖苷酶处理2种重组抗狂犬病毒单克隆抗体Mab1、Mab2水解切除N-糖链,通过糖染色和毛细管电泳检测确定N-糖链酶解程度,利用快速荧光灶抑制试验检测其中和活性,分析N-糖链切除对该单抗中和活性的影响。结果显示,N-糖链切除后抗体中和活性无明显变化。说明N-糖链对这两株抗狂犬病毒单抗的体外中和活性不是必须的结构成分。

2004年山东省部分暴露者狂犬病毒抗体检测结果分析

[目的]评价人用狂犬病疫苗的免疫效果。[方法]对狂犬病疫苗初次全程(5针)免疫者用ELISA检测狂犬病毒抗体。[结果]共接种狂犬疫苗1 108例,免疫后抗体阳性1 067例,阳性率为96.3%。年龄越小抗体阳性率越高、女性的抗体阳性率高于男性、在山东省疾病预防控制中心预防门诊外接种疫苗者抗体阳性率较低,差异均有统计学意义(P<0.01),不同疫苗间的抗体阳性率的差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]人用狂犬病疫苗有很好的免疫效果,但对免疫失败者应加强免疫,以防狂犬病的发生。

接种狂犬疫苗后抗狂犬病毒抗体水平检测结果分析

目的:为全面了解人接种狂犬疫苗后抗狂犬病毒抗体的水平,保护患者的生命安全,为今后的狂犬疫苗预防接种工作提供第一手资料。方法:对全程接种狂犬疫苗的患者,30天后抽取静脉血,按间接免疫荧光染色法检测抗狂犬病毒抗体。结果:2004年接种狂犬疫苗后抗狂犬病毒抗体水平检测合格率97.6%。其中男性96.9%,女性98.3%。2005年抗狂犬病毒抗体水平检测合格率97.2%,其中男性97.0%,女性97.4%。结论:通过0、3、7、14、28天全程接种狂犬疫苗后,97%以上的患者抗狂犬病毒抗体水平合格,还有3%左右的患者抗体水平低于保护阈值,需进一步加强接种。

免疫荧光法检测末梢血纸片中狂犬病毒抗体

对52例接种狂犬疫苗者分别采集静脉血和纸片吸收末梢血,用间接免疫荧光法测定狂犬病毒抗体。两种标本1:5效价阳性率均为96.2％,阴、阳性总符合率100％,1:10效价阳性率分别为88.5％和86.5％,无显著性差异,总符合率98.1％,结果一致性有非常显著意义.提示末梢血纸片可代替静脉血用于狂犬病毒抗体测定,为筛检初免失败者,进而加强免疫补救措施,提供了简便可行的采样方法。

定量检测猕猴血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体间接ELISA法的建立

目的:建立定量检测血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体(HuMabs)NM57的间接ELISA法,为药代动力学研究提供一种简单快速的方法。方法:采用狂犬病毒糖蛋白包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测HuMabs NM57的间接ELISA法,并对其特异性、灵敏度、精密度及准确度进行检测。结果:间接ELISA法检测HuMabs NM57的灵敏度为5ng/mL,组内及组间精密度分别为2.6%～6.0%、8.5%～11.3%。结论:建立了灵敏度高、特异性强的检测HuMabs NM57的间接ELISA法,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中HuMabs NM57的检测。

小鼠抗狂犬病毒单克隆抗体轻链重链可变区基因的cDNA克隆

狂犬病是一种全球性病毒性疾病,病死率高,目前尚无有效疗法。用单克隆抗体(McAb)治疗病毒病可能有一定疗效,但是大多数McAb来源于小鼠或大鼠细胞,用来治疗人,必然会因种间差异带来变态反应。为克服这种障碍,将McAb技术与重组DNA技术结合,可能为利用McAb治疗病毒病开拓新的前景。