猪圆环病毒II型感染抑制伪狂犬病病毒疫苗的体液免疫反应

为了探讨猪圆环病毒II型(PCV2)感染对伪狂犬病病毒(PRV)疫苗体液免疫反应的影响,检测了PCV2实验感染仔猪血清中PRV疫苗抗体含量的动态变化。将仔猪随机分成二组,一组仔猪进行PCV2接种和PRV疫苗免疫而作为PCV2组;另一组仔猪不予PCV2接种但进行PRV疫苗免疫而作为对照组。所有仔猪在PCV2接种后14天均进行PRV弱毒疫苗免疫,用间接ELISA检测仔猪血清中病毒特异性抗体;到PCV2接种后14天,PCV2组仔猪全部出现PCV2病毒血症。在PRV疫苗免疫后7天,多数仔猪血清中可检测到疫苗抗体之后疫苗抗体含量逐渐上升,在免疫后14天时对照组疫苗抗体水平显著(P<0.05)高于PCV2组,但在免疫后21天时两组之间抗体水平没有差异。研究结果显示:PCV2实验感染仔猪的PRV疫苗抗体产生出现延迟,表明PCV2感染可抑制PRV疫苗诱导的体液免疫反应。

基因重排狂犬病病毒疫苗株免疫效果的初步研究

试验探究了基因重排狂犬病病毒(RV)弱毒疫苗株能否刺激小鼠产生RV抗体免疫球蛋白G(IgG),比较了其不同免疫方式、不同免疫剂量对小鼠抗体水平的影响及安全性评估。选取28只体重(20±3)g、35日龄左右的昆明系小白鼠,随机分为7组:第1组为低剂量口服组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第2组为中等剂量口服组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第3组为高剂量口服组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第4组为低剂量注射组:复合佐剂50μL+病毒液50μL;第5组为中等剂量注射组:复合佐剂150μL+病毒液150μL;第6组为高剂量注射组:复合佐剂300μL+病毒液300μL;第7组为口服对照组:复合佐剂300μL+SRV9亲本毒株300μL,分别于0、7、14d进行免疫,采用ELISA定量检测试剂盒对各免疫组小鼠的血清IgG水平进行检测,免疫期结束后取各免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织制作病理组织切片对疫苗的安全性进行评估。结果显示,各免疫组均产生了RV抗体IgG;肌内注射免疫产生的抗体速度较口服免疫快,但肌内注射免疫会导致小鼠发病死亡;600μL口服免疫组产生的抗体水平显著高于100、300μL口服免疫组及亲本毒株SRV9对照组(P<0.05),说明适当加大口服免疫剂量会使口服免疫组产生的抗体水平增加,并且不会引起不良反应。病理组织学检查发现,各口服免疫组小鼠的肝脏、肾脏、肺脏、脑组织的形态结构较为正常,未发生病变,表明基因重排RV疫苗株口服免疫副作用小、安全性较好。本试验结果为研制新型口服疫苗开辟了新的方向。

大肠杆菌不耐热肠毒素对狂犬病病毒减毒疫苗株粘膜免疫效应的增强作用

将狂犬病病毒 SRV9减毒疫苗与大肠杆菌不耐热肠毒素 (L T)混合 ,分别经口腔滴入、灌胃、灌肠等途径免疫小鼠。通过检测外周血淋巴细胞特异性转化率、CTL反应、Ig G、Ig A、SIg A等免疫指标 ,并结合攻毒保护 ,探讨了狂犬病病毒经消化道不同途径接种产生的免疫效果以及 L T在粘膜免疫中的作用。结果表明 :肠道接种组的狂犬病病毒特异性免疫应答水平高于口腔和胃接种组的免疫应答水平 ,L

脐周部皮下注射狂犬病毒疫苗1例的方法与体会

目的 探讨脐周部皮下注射法的原理与应用价值。方法 在海军环球航行访问与外军交流中对军犬咬伤患者的处理,比较并总结外军狂犬病疫苗的脐周部皮下注射方法。结果 脐周部皮下注射狂犬病疫苗具有利于药液吸收、不良反应轻、注射方法程序化等优点。结论 脐周;皮下注射方法适合于长期高频次皮下注射药物时使用。

狂犬病毒疫苗生产的现状与进展

狂犬病毒疫苗在预防和控制人和动物狂大病中发挥了巨大作用。本文介绍了狂大病毒神经组织疫苗、细胞培养疫苗和基因重组疫苗生产的现状及其新进展。

口服狂犬病毒疫苗诱饵的研究进展

狂犬病(Rabies)是一种重要的人兽共患传染病,由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)感染温血动物和人后引起,一旦发病,死亡率几乎达100%,是迄今为止人类病死率最高的急性传染病。目前防制狂犬病的最有效的方法是在暴露后进行高免血清封闭以及免疫狂犬病疫苗。由于注射疫苗价格较高,注射不方便等缺点给防治和消灭狂犬病带来了极大的困难。近年来,口服的免疫方式成为狂犬病毒疫苗研究的热点,除了狂犬病毒疫苗组份,疫苗的投送工具——诱饵也是决定口服狂犬病疫苗效果的重要因素。本文就口服狂犬病毒疫苗诱饵的国内外研究情况进行综述。

Vero细胞口服狂犬病疫苗的研究

本试验采用ＣＴＮ－１株经Ｖｅｒｏ细胞传１５代，病毒滴度均在７．０～８．０ｌｏｇＬＤ５０／ｍｌ之间。给８只犬分别口服８．１ｌｏｇＬＤ５０的疫苗３０天的中和抗体几何平均效价为１：１１０，中和抗体的平均国际单位为２．５９ＩＵ／ｍｌ，阳转率为１００％；给４只犬分别口服７．４３ｌｏｇＬＤ５０的疫苗，阳转率为５０％，中和抗体的平均国际单位为２．４８ＩＵ／ｍｌ。选用３５－６０日龄的乳犬１６只口服１０个剂量的疫苗，并在口服后５、１０、２０天、３个月各杀３只犬取脑及唾液腺分别在ＢＨＫ２１细胞上盲传２代，同时在昆明种小白鼠乳鼠脑内盲传２代，进行病毒分离，均为阴性，余下犬观察１２个月均正常。总之该口服狂犬病疫苗对犬具有较好的安全性及口服免疫原性。

猪伪狂犬病灭活疫苗(PRV_(SX)-gE株)对新生仔猪安全性的初步研究

为了证实自主研制的猪伪狂犬病病毒gE基因缺失灭活疫苗(PRV_(SX)-gE株)免疫新生仔猪的安全性,对新生仔猪(非使用日龄靶动物)进行1次单剂量肌内接种实验。结果显示:3批PRV_(SX)-gE株疫苗(批号为2017001、2017002、2018001)肌内接种3~5日龄仔猪后,仔猪接种部位及全身未见明显症状,体温正常,精神状态良好,饮食正常,被毛顺滑、有光泽。实验结果初步证明:利用PRV_(SX)-gE株疫苗免疫新生仔猪(非使用日龄靶动物)是安全的。

1054例狂犬病疫苗免疫后血清学实验研究

狂犬病目前全世界还没有特殊治疗方法，因此应用狂犬病毒疫苗对被动物咬伤者进行免疫接种是预防狂犬病发生的有效措施之一。疫苗接种后是否有效，需经过检测血清中的相应抗体。笔者对1054例暴露于可疑带毒动物的就诊者进行狂犬疫苗接种，采用间接免疫荧光（IFAT）进行免疫后的抗狂犬病毒抗体检测，同时与ELISA方法和RPHIA方法进行了比较。现将结果报告如下。

免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免疫增强作用

为了评价免疫增强剂VA5对猪伪狂犬病毒灭活疫苗的免疫增强作用,将VA5与灭活疫苗混合并制成疫苗。通过常规Bartha-K61株灭活疫苗、含免疫增强剂灭活疫苗和Bartha-K61活疫苗3组免疫效力对比试验,首次免疫后14和35 d对猪进行采血,并且进行中和实验以及对相关细胞因子进行检测。结果表明,该免疫增强剂能够显著地提高猪伪狂犬灭活疫苗血清中抗体产生,同时能显著提高猪外周血淋巴细胞(PBMC)中IL-2和IFN-γ mRNA表达。交叉中和试验表明,VA5能够显著地提高猪伪狂犬灭活疫苗对伪狂犬流行变异株的中和作用。试验表明,VA5能够显著提升猪伪狂犬病毒灭活疫苗体液与细胞免疫,为研制免疫效果更好的灭活疫苗提供了依据。

狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发

目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质去除和抗原回收情况,确定合适的收获液浓缩比例;比较不同批次样品纯化后的杂质去除率和重复性,判定本纯化工艺的稳定性。结果:选取60%作为初始蔗糖浓度,在上样速度为150~200ml/min时,可以有效地对10倍浓缩的病毒收获液进行纯化;卵清蛋白、牛血清白蛋白和庆大霉素去除率分别达到99%,95%和95%,且工艺具有极好的稳定性。结论:开发的连续流蔗糖密度梯度离心技术可以作为冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的产业化纯化工艺。

狂犬病疫苗免疫人B细胞受体库的高通量测序分析

目的对志愿者接种商业化狂犬病病毒疫苗前后的B细胞受体库进行高通量测序,探讨志愿者接种前后B细胞受体库互补决定区3表达谱的变化情况,为了解B细胞生物学作用、评估疫苗作用等提供参考。方法以商业化狂犬病病毒疫苗分别注射4个志愿者,分离外周血单核细胞,提取PBMC总RNA,对总RNA进行逆转录获得cDNA,以cDNA为模板进行多重PCR,后通过Illumina HiseqtmXten(novaseq)平台进行高通量测序和生物信息学分析。结果通过接种RABV疫苗,志愿者BCR的多样性改变但变化无统计学意义。V/J区基因片段的序列使用频率以及V-J基因组合改变,其中IGHJ1基因与IGHV1-3、IGHV3-20、IGVH3-7和IGHV2-26使用频率升高,免疫前后差异有统计学意义;8个V-J组合在免疫前后差异有统计学意义。鉴定了疫苗免疫诱导B细胞克隆后高频扩增(>0.4%)的CDR3氨基酸克隆序列与核苷酸克隆序列,发现同一志愿者中,接种疫苗后与接种疫苗前相比高频克隆序列的大部分频率发生变化,并且不同志愿者之间的序列不同;此外还了解高频序列和对应多肽的性质,如等电点和平均亲水性。结论通过高通量测序对狂犬病病毒疫苗免疫后的人BCR进行了定量分析,发现了狂犬病疫苗免疫人后BCR表达谱的变化情况,为了解B细胞在保护宿主免受RABV感染和改善疫苗反应的生物学作用提供实验性数据。

人参茎叶总皂苷联合亚硒酸钠对猪伪狂犬病灭活疫苗免疫的增强作用

为了探讨人参茎叶总皂苷(ginseng stem-leaf saponins,GSLS)联合亚硒酸钠(Na2SeO3,简称Se)对伪狂犬病病毒(PRV)灭活疫苗免疫的增强作用,本试验给小鼠口服GSLS后,接种添加了Se的PRV灭活疫苗,并检测免疫后小鼠血清中PRV gB抗体及其亚类(IgG1和IgG2a)水平、淋巴细胞增殖水平、淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6)水平以及野毒(fPRV)攻毒后小鼠的存活率。结果显示,与仅仅免疫PRV灭活疫苗的小鼠相比,口服GSLS联合疫苗中添加Se(GSLS-Se)能够显著提高小鼠血清中PRV gB抗体及其亚类(IgG1和IgG2a)水平,淋巴细胞增殖水平和细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-6)水平。此外,GSLS-Se还提高了免疫小鼠对野毒感染的抵抗力。结果表明,GSLS-Se对PRV灭活疫苗具有免疫增强作用,值得在本动物上进一步研究。